多重免疫荧光染色实验 常见问题解答

问：样本可以做成冰冻切片吗？

答 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法，推荐用抗体洗脱液

问 所有操作要避光吗？

答 不需要，在常规环境下操作就可以，染料的荧光强度很高。

问 抗体修复液每一轮修复都要更换吗？

答 是的，每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。

问 染料的选择会影响后染色吗，有共定位的话怎么办？

答 共定位的情况，我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况，染料不会对染色有影响，串色的情况需要预实验做充足，包括抗体稀释比例，染料与放大液比例，修复条件的确定。

问 多色用的一二抗各是什么种属？

答 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求，一抗根据样本种属选择既可，二抗根据一抗选择即可，多个抗体组合，种属不会有影响。

问 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好？

答 微波修复洗脱更稳定，抗体洗脱液对大多数抗体都管用，难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦！

问 实验用时真的一天能做完吗？

答 相比普通的组织荧光实验，我们一抗的孵育时间只需室温30min，二抗和信号放大步骤只需孵育10min，能大大节约时间，五色左右可在一天内做完。

问 多色样本的寄送有条件限制吗？

答 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定，只要防震盒常温运输即可，冰冻切片的话，需要干冰低温运输。

问 我的组织还有GFP蛋白，给结果的时候能排除干扰吗？

答 可以的，结果分析的时候可以避免绿色通道，分析软件赋予的颜色是伪彩色，可以更换其他颜色。

问 我这边提供抗体的话，抗体需要满足什么条件吗？

答 抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用，各品牌供应商都会提供相应的实验验证的，我司组化抗体经过严格实验验证，是不错的选择。

问 如果我能提供抗体给你们做服务的话，需要的抗体量是多少？

答 需要的抗体量要根据样本数来，但一般来讲，50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。问 在指标与染料的搭配以及染色顺序上，有什么规律吗？

答 并没有一个特别的线性关系，和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系，所以会多因素考虑，多尝试，预实验很重要。

问 TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤，但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有？

答 试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。

问 B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗？

答 

T细胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再细化还有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）
B细胞：CD19 ；
DC细胞：CD8α、CD11b