二抗是指用于靶向结合一抗的抗体。在多种免疫印迹、ELISA以及免疫荧光等免疫实验中,二抗经常和一抗结合使用以检测目标蛋白。很多二抗都带有标记物,例如Alexa Fluor荧光染料或辣根过氧化物酶(HRP),从而使二抗的信号可以被检测到。
实验中也可以使用带有标记物的一抗,但是二抗有很多优点。无论是使用哪种一抗进行检测,使用二抗可便于更换不同的标记物。例如,同样的一抗可以与HRP标记二抗一起用于免疫印迹,也可以与另一种Alexa Fluor 488荧光标记二抗一起用于免疫荧光实验。
另外,二抗结合在抗原位置的标记染料比直标一抗要多,从而增强检测信号。使用二抗可以避免对一抗进行复杂且昂贵的化学标记(偶联),而且偶联反应(具有氨基酸特异性)可能干扰一抗对抗原的识别。
要选择出一种最适用于您的应用和研究的最佳二抗,建议考虑以下因素:
种属来源和种属反应性
特异性反应
纯化方法
交叉吸附
多重检测能力
抗体类型和亚型
完整抗体还是抗体片段
标记物
生物素结合蛋白
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