不同分光光度计间细菌光密度测定的差异分析
背景
细菌培养基的光密度( OD) 测定是微生物学中使用的
一种常见技术。 研究人员主要依靠分光光度计来进行
这些测定, 然而实际上这个测定是基于培养基的光散
射量而不是光吸收量。 在其标准配置中, 分光光度计
并未对光散射测定进行优化, 这通常会导致仪器间所
测得吸光度上的差异。
方法
该研究调查了不同的分光光度计光学配置对在分批培
养基中生长的大肠杆菌JM109光密度测定的影响。
分光光度计检测包括了使用阵列检测的反向光学系
统、 基于单色器的传统系统以及一种配备积分球配件
( ISA) 的单色器系统。 在每个仪器上测定OD600生
长曲线, 同时, 对McFarland进行CFU/mL计数来进一
步对每个光学系统进行鉴定。
结果
来自相同光学配置类别的分光光度计其OD数据是相当
的。 用反向光学系统测定较高OD时数据变化更大,
这是由较低杂散光所导致。 基于单色器的系统测试较
高OD时准确度较高, 主要是因为与来自反向光学系统
的多色光相比, 单色光具有更好的杂散光去除能力。
然而, 反向光学系统测定OD时却有具有良好的动态
范围。 使用ISA产生出的数据与用其它系统产生出的
数据不同, 这是因为其具有捕捉几乎所有前向散射光
的能力。 而对McFarland标准品的测定确认了这些现
象。
结论
分光光度计进行可靠的光散射测定的能力在很大程度
上取决于其光学配置; 因此, 具有不同光学配置的分
光光度计会呈现出不同的OD测定值。 理想状态下, 高
度散射样品( 如细胞培养基) 的吸光度是使用ISA进
行测定的, 目的是为了捕捉几乎所有的散射光。 培养
基生长可使用OD600测定, 然而每当改变分光光度计
时, 就应该计算和应用一个换算因数。