DNA 分子熔点的测定- 分光光度法

简介
Melting Temperature 的缩写，熔解温度，即 DNA 分子的熔点。
将 DNA 加热到一定温度时， DNA 的双螺旋就会发生裂解， DNA 碱基
互补的主要作用力氢键结构将被破坏，在紫外光谱中表现为
260nm 处吸光度的增加。 通常将 DNA 的变性达到 50%时，即增色效
应达到一半时的温度称为 DNA 的解链温度， 也称 DNA 的熔点，简
写为 Tm。
方法原理
DNA 熔点测定实验可以测得 DNA 的熔点，该实验过程以以温度为
横坐标，以 260nm 处的吸光度值为纵坐标作图得到的曲线称为热
变性曲线，当到达熔点温度 Tm 时，有 50%DNA 由双链改变为单链。
分析步骤
本实验配置的 DNA 溶液，从 63℃ 升温至 95℃ ，每隔 15 秒测定该
样品在 260nm 处的吸光度值，并以温度为横坐标，吸光度为纵坐
标绘制热变性曲线。
赛默飞世尔解决方案
Thermo Scientific™ Evolution 200系列及350紫外可见分光光
度计优异性能， 无论您是在检测DNA/RNA 序列，还是双链或
三螺旋序列， 均可满足您的实验需求。
• 双光束光学设计可同时测量参比和样品
• 可变带宽以及可选配满足 21 CFR Part 11要求的安全软件
• 确切获得瞬间数据可为快速混合动力学测量提供最高的精确
度 •
通过使用0°C- 100°C帕尔帖单样品池架或者帕尔帖8联池
系统并使用斜率为0.4 - 20°C /min 的多级加热/ 冷却曲线
精确控温，用于DNA熔解和Tm计算
•使用软件内置拟合算法自动计算不同熔解曲线的Tm 值
本实验利用赛默飞世尔科技的 Evolution260 紫外可见分光光度计进
行 Tm 值检测，操作简单，快捷，实验结果准确，为客户提供完美
解决方案。 根据您的需求，我们同时有更多型号可供选择。