土壤β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(S-C1)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/3ebe11ee-2f8a-411f-9332-f537cb05a90a.jpg)
溶液的配制:
1、 试剂一:甲苯自备。
2、 试剂二:临用前每瓶加入 10 mL 试剂三,充分溶解备用,用不完的试剂仍 2-8℃保存一周。
3、 标准品:5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。
产品说明:
β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,C1酶作用于纤维素线状分子的末端,水解β-葡萄糖苷键,每次切下1个纤维二糖分子。
S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/8c65363f-44d7-4586-aee7-b6067c150ed7.jpg)
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30-50目筛、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,波长调至400nm,蒸馏水调零。
2、 标准品稀释:临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液,加入980μL试剂三,充分混匀,配制成100 μmol/L标准液使用,现用现配。(实验中每管需要500μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 加样表:
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/5b2257d5-a083-43c4-ad0f-c044f8839672.jpg)
三、S-C1 活力计算
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/c4e34c5c-58b5-48e6-9b4e-7b98cc4d6aba.jpg)
注意事项:
当吸光值大于1.5时,建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定。计算时同步修改计算公式。
实验实例:
1、 取两管 0.1g 土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A 测定管、A 对照管。用 1mL 玻璃比色皿测得计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.79-0.308=0.482,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.599-0=0.599,计算酶活得:
S-C1 活力(U/g 土样)=2.28×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=2.28×0.482÷ 0.599÷0.1=18.3466 U/g 土样。
2、 取两管 0.1g 林土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A 测定管、A 对照管。用 1mL 玻璃比色皿测得计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.613-0.346=0.267,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.599-0=0.599,计算酶活得:
S-C1 活力(U/g 土样)=2.28×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=2.28×0.267÷0.599÷0.1=10.163U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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