β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022061103203116037](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103203116037.png)
溶液的配制:
1. 试剂一:临用前取 1 支加入 0.555 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂建议-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融(1 支粉剂溶解后可做 48S,为了延长使用时间,此产品多给 1 支粉剂);
2. 标准品:5μmol/mL 对硝基苯酚溶液。
产品说明:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰,测定 405nm光吸收增加速率,可计算 β-木糖苷酶活性。
![image 2022061103210006145](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103210006145.png)
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水、超声破碎仪。
操作步骤:
一、 样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、植物样本:称取约 0.1g 样本,加 1mL 提取液充分冰浴匀浆,然后 12000rpm,4℃,离心 20min,弃沉淀,取 20μL上清测定蛋白含量,剩余上清作为待测酶液。
2、 细菌、真菌样本:收集约 500 万个细胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎(冰浴,功率 200w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000rpm,4℃,离心 10min,弃沉淀 ,取 20μL 上清测定蛋白含量,剩余上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至405nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL,稀释可参考下表。
![image 2022061103213171932](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103213171932.png)
3、 样本测定:
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三、β-木糖苷酶活性计算
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注意事项:
1、 吸光度变化应该控制在 0.05~0.6 之间。否则加大样本量或稀释样本,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、 样本蛋白质含量需要另外测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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