谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒 微量法

谷氨酰胺酶（GLS）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：使用前 37℃预热；

2、 试剂一：临用前加入 5 mL 提取液充分溶解待用；

3、 试剂二 B：临用前将试剂二 A 倒入试剂二 B 中混匀（A:B=1：4 比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂二 A：试剂二 B=1:4 现配现用；

4、 标准品：10 μmol/mL 氮标准液，使用前 37℃预热。

产品说明：

GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定 GLS 催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g 离心15 min，取上清置于冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。

2. 标准液的制备：将标准溶液用提取液稀释8倍得1.25μmol/mL的标准溶液。

3. 样本测定：

三、GLS 酶活性计算

注意事项：

1、 当测定吸光值大于 0.8 时，建议将上清液用提取液进一步稀释后测量，计算时乘以稀释倍数。

2、 试剂二配置后尽快使用，若发现变色则不能再用。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！