脯氨酸(Pro)含量检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060711140340342](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060711140340342.png)
溶液的配制:
1.试剂一:自备冰乙酸。
2.标准品:脯氨酸 10 mg,临用前加入 1 mL 蒸馏水,配成 10 mg/mL 标准品。
产品说明:
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色,在 520nm 测定吸光度。
技术指标:
最 低检出限:0.2876 μg/mL
线性范围:0.5-40 μg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细胞、细菌或组织样本的制备:
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),之后置沸水浴振荡提取 10min;10000g,常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取 10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样本:取 0.1mL 血清(浆)加入 0.9mL 提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取 10 分钟,10000g,常温离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。
二、 测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 520nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准品的处理:将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。
3、 操作表:
![image 2022060711145843198](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060711145843198.png)
三、Pro 含量计算
1、 以标准溶液浓度为横坐标,ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将ΔA代入方程得到x
(μg/mL)。
2、 按照细菌、细胞数量计算
细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)=x×V 提÷细胞/细菌数量= x÷细胞/细菌数量
3、 按照组织质量计算
Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W
4、 按照血清(浆)体积计算
Pro 含量(μg/mL)=10×x
V 提:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;细胞/细菌数量:以 104为单位,万个;10:血清稀释倍数,
(0.1+0.9)÷0.1=10。
注意事项:
1. 提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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