2023/11/11 20:49
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产品配置单:
GERSTEL LabWorks 平台
型号: MPS Robotic
产地: 德国
品牌: GERSTEL
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方案详情:
本应用说明介绍了全自动在线工作流程的开发,包括脂肪酸的提取、衍生化和GC-MS分析。使用Folch提取法从鲑鱼组织中提取脂质,并在注射到GC-MS系统之前对提取物进行直接甲基化衍生处理。
Folch 提取需要彻底的组织提取。因此,将标准 Folch 提取与使用珠磨的 Folch 提取进行比较。珠磨是一种机械细胞破碎方法,用于从细胞内部释放生物分子。通过搅拌或摇动对样品和珠子进行高度搅拌;珠子碰撞导致细胞打开并释放细胞间成分。
用于自动化Folch提取和自动化甲基化衍生的GERSTEL MPS双臂系统,配置了离心、蒸发、混合振荡和孵化加热等模块
自动化 Folch 提取
将50毫克鲑鱼组织转移至2毫升小瓶中。添加1毫升氯仿/甲醇作为有效的脂质提取溶剂。然后剧烈涡旋样品30分钟。离心10分钟后,将500微升上清液转移到干净的小瓶中,并加入200微升LC-MS级用水,通过液液萃取提取有机小分子。将含有脂质的下层有机层转移到干净的2毫升小瓶中,并在mVAP中蒸发至干。在进行水解/甲基转移之前,将干提取物重新溶解于100微升甲苯中。
脂肪酸的甲基化衍生
向鲑鱼提取物中加入500 μL 新配制的甲醇,在70°C下反应30分钟。然后添加各 500 μL LC-MS 级用水和己烷,并以2500 rpm的速度涡旋样品10 分钟。离心2分钟后,将1 μL顶部有机层直接注入 GC-MS。
使用 (a) 标准 Folch 提取或 (b) 珠磨法 Folch 提取的鲑鱼组织提取物的 TIC-QTOF-MS 色谱图
检测到的三种 Omega 3 脂肪酸的平均面积和标准差(Omega A:9,12,15-十八碳三烯酸甲酯,(Z,Z,Z)-,Omega B:,8,11,14, 17-二十碳五烯酸甲酯 (all-Z)- 和 Omega C: 4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯, (all-Z)-) 使用全自动 Folch 萃取 ( 标准提取与使用珠打浆的提取)。
开发了一种全自动在线提取和衍生鲑鱼脂肪酸的方法。Folch 提取完全自动化,使用均质鲑鱼组织和珠磨。两种研究方法都成功提取和衍生了脂肪酸,并且具有非常好的重现性。
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