你在细胞房的显微镜真的只要能看到就够了吗？平常只是用显微镜观察细胞状态，如果真的需要图片资料还需要用细胞房外的显微镜拍摄，这样的工作方式真的合理吗？每次拍摄照片都要把细胞带出细胞房，拍摄完，还需要走很长的距离，再带回细胞房，这对细胞状态和生长不会有影响吗？每次想进行细胞计数还需要先用显微镜观察下细胞，然后再在细胞计数仪上进行计数，不能直接观察然后计数细胞吗?这一切现在都可以改变，Echo Rebel正倒置一体显微镜独特的设计使其足够小巧、轻便，且无需配置电脑，使用IPAD PRO显示成像画面，只需要一本书的大小就可以放下整台机器，帮助您完成从观察到成像的全过程。使用基于IOS系统的软件简化拍照流程、加快拍照速度，帮助您最少的时间获得最好的图像质量，减少拍照过程对细胞的影响。Echo Rebel正倒置一体显微镜足够小巧，也可以将其放入培养箱中进行观察，其与IPAD采用无线连接，可以在培养箱外进行相关观察和操作，进一步减少影响。Echo Rebel正倒置一体显微镜软件不仅可以进行细胞观察，还可以添加细胞计数功能，解决了细胞计数与观察分开的难题，进一步帮助用户节省时间和精力。同时又获得精确的计数结果。★ 在几秒内快速分析图像，让您告别以往费时费力的人工细胞计数。只需轻轻一点，自动实现细胞存活率计算，无需培训轻松上手。★ 还可以实现多张图片采集，多次计算，消除人为误差，精准度高。★ 轻松实现自动捏合缩放，查看单个细胞的特写图，还可以快速计算不同直径大小细胞数量。Echo Rebel 正倒置一体显微镜Echo Rebel正倒置一体显微镜配置了800W像素的高速摄像头，可以进行视频录制，远程观察等功能，帮助您实时的监测您的细胞状态，获取长时间的细胞动态变化和运动情况，也可实现多屏共享等功能。Echo Rebel正倒置一体显微镜采用独特的视网膜屏全视野技术，将目镜内置，重新定义观察方式，且显微镜创新性的将正倒置显微镜合二为一，突破传统限制，只需一转，就可满足不同的样品观察需求。▲ Echo Rebel正倒置一体显微镜★

RNA样本：比较不同的样本时，应保证各样本中含有大致相同量的RNA，因此需要对所提取的RNA进行定量。常用的定量方法包括：分光光度法、荧光染料检测、琼脂糖凝胶电泳、毛细管凝胶电泳和3'：5'分析。由于不同的方法产生不同的结果，因此直接比较不同方法的测定结果是很不科学的。建议使用荧光RNA结合染料(如RiboGreen)定量RNA，此法在检测低浓度目标时表现出最佳性能。任何情况下都建议仅使用单一方法测定所有样本并报告相关信息。检测和报告全基因组DNA的污染程度，并记录能够耐受的这些污染的临界值标准也是非常重要的。另外还应重点报告RNA样品是否已经过RNA酶处理(包括酶的类型及反应条件)，并报告每个核酸目标在阳性质控品和无反转录质控品存在下Cq值的比较结果。此外，还需对RNA模板进行质量评价。除非提取的总RNA量太低以至于不允许进行质量评价。但产生这种特殊情况是有条件的：从单细胞、血浆、其他无细胞体液、一些激光捕获样品或澄清组织培养基中提取RNA，或提取操作和RT-qPCR测定通过一个连续的、单管实验完成。还需要注意的关键信息包括RNA的数量、完整度、不存在反转录或PCR抑制剂。值得注意的是RNA在体内的降解非常明显，这是mRNA为应对环境刺激而进行的自然调节。研究人员尚不能控制RNA的降解，其表现之一是即使高质量的RNA样品也显示出不同的mRNA降解差异。A260/A280的吸收度比值必须在中性pH的缓冲盐条件下测定，但如果进行核酸定量分析，特别是测定细胞mRNA浓度微小(建议使用稀释的样本或常用的抑制方法如SPUD法检查反转录活性或PCR的抑制作用。如果RNA样本发生部分降解，这个信息一定要报道，这是至关重要的，因为这样可能会使方法检测低浓度转录水平的灵敏度降低，而且由于降解引起的转录水平的相对差异可能会产生不正确的目标比值结果。DNA样本：一般情况下，DNA不会产生很大的降解问题。然而，在法医学领域，DNA降解程度的评估是一项很重要的工作，例如在犯罪现场恶劣的环境条件下或大规模灾害或涉及多个失踪人员的案件中，DNA的化学结构可能已经发生降解。PCR分析的小规模扩增有助于最大限度地减少检测有关的问题，但目前已开发的方法主要用于DNA质量的定量测定，我们应该考虑将这些方法用于上述的特定目的抑制剂的存在会给测定结果带来变异，因此文章中必须说明是否存在抑制剂，以确保不影响DNA的测定结果，如病原体检测和相应的定量。在样本中加入阳性质控品的方法可用于检测抑制作用，但不同PCR反应可能会受到不同程度的抑制，这些抑制剂往往是在核酸提取物中与DNA共纯化的物质。因此，常规实验中最好将核酸样本稀释，以证明观察到的Cq或拷贝数的减少与预期结果是一致的，并报告这些数据。资料来源：2020版MIQE指南福利来啦,试用中心开启~动动手指识别下方二维码，关注“深蓝云生物科技”公众号→云活动→试用中心，赶紧来申请吧！naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

图源：网络侵删病原体（pathogens）是指可造成人或动植物感染疾病的微生物（包括细菌、病毒、立克次氏体、真菌）、寄生虫或其他媒介（微生物重组体包括杂交体或突变体）。（来源：百度百科）传统的病原体检测金标准方法是“涂片镜检法+分离培养法”，但这种方法耗时长，细菌培养一般需要1-3天，真菌培养一般需要1-3周，对于发病较快结核杆菌等则需要1个月，同时还存在镜检和分离培养等方法还不易对相关病原体进行分型检测的问题，特别是临床上对于急性感染疾病一般无法用这种方法在就诊前获得检测结果。图源：网络侵删随着技术的发展，陆续出现了分子诊断技术、免疫学检测方法和化学法检测等病原体检测手段，目前使用最多的是分子诊断技术。第三代PCR技术-数字PCR，作为分子诊断领域的佼佼者，在病原体核酸检测方面彰显出巨大优势：1、摆脱病原微生物检测对标准品的依赖病毒等微生物的载量对于阐释疾病病程，后续治疗及疗效评估是至关重要的， qPCR技术的最大瓶颈在于需要依赖标准曲线，而且扩增效率的差异会直接导致实验室内或者不同实验室之间的荧光定量PCR检测结果的偏差。数字PCR基于单分子层面的检测可以摆脱对标准品的依赖，且不受PCR抑制物的影响，尤其是在缺乏标准品的检测项目中，数字PCR可用于直接定量病原微生物的拷贝数。2、灵敏度高在病原微生物的检测方面，数字PCR利用其灵敏度高的特点，对各种样品中的病原微生物展开广泛的研究，可以用于早期诊断和用药的低拷贝病毒的监控。如人类免疫缺陷病毒（HIV）抗逆转录病毒治疗过程中病毒残留的监控；抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染监控。（详细内容见文末相关文章链接）3、大大缩短报告周期使用数字PCR检测临床标本无需经过病原微生物培养过程，大大缩短了报告周期，使快速检测潜在的病原微生物成为可能，且利于从大量不同的背景核酸中检出病原微生物，对于感染性疾病的诊断和控制意义重大，有助于及时减少患者服用无效药物的数量，及早采用其他备用药物。naica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。深蓝云病原体分子生物学检测解决方案naica®数字PCR 10x Mix和5x Mix为您的多重检测体系提供更大上样空间，现货供应，欢迎订购。订购信息：naica® PCR Mix也可订购。

疟疾是由疟原虫属的单细胞原生动物寄生虫引起的，人类疟疾每年会导致2亿人感染，造成40多万人死亡。真核细胞周期通常分为不同的阶段，核分裂后立即进行胞质分裂。为了确保细胞分裂的正确进行，细胞分裂每个阶段都通过检查点的反馈协调控制分裂进程。但疟原虫有所不同，在恶性疟原虫的无性复制周期中，其经历了多轮不同步的有丝分裂，伴随着未浓缩染色体的分离，随后是具有完整核膜的核分裂。然后，多核细胞经历一轮胞质分裂，产生数十个称为裂殖子的子细胞。迄今为止，还没有发现调节疟原虫分裂的细胞周期检查点的分裂模式。由于疟原虫细胞分裂的特殊性，了解疟原虫中驱动和调节分裂过程的分子机制可以帮助揭示治疗疟疾的新靶点。本次推荐的文章《Depletion of the mini-chromosome maintenance complex binding protein allows the progression of cytokinesis despite abnormal karyokinesis during the asexual development of Plasmodium falciparum》找到了一个与疟原虫分裂相关的蛋白复合物，该蛋白的缺失将导致疟原虫细胞分裂异常。本文的作者鉴定出了微小染色体维持复合物结合蛋白(MCMBP)的疟原虫同系物(PfMCMBP)，它与MCM复合物(基因组DNA复制所需的复制解旋酶)结合。为了研究PfMCMBP在恶性疟原虫无性生命周期中的作用，作者通过同源重组将三份带有去稳定结构域的血凝素表位标签融合到3D7菌株中内源PfMCMBP的羧基末端，产生3D7-PfMCMBP3HADD转基因寄生虫株。即在小分子Shield-1 (Shld1)的存在下，PfMCMBP3HADD蛋白稳定，并且将Shld1在培养基中的含量与PfMCMBP建立联系，量化其在胞内的含量。通过Echo荧光显微镜观察发现PfMCMBP缺失的表型，PfMCMBP缺失可以破坏核形态和寄生虫增殖，但不会阻断DNA复制。PfMCMBP缺失促进了MTOCs的形成，MTOCs具有延伸的纺锤体微管，这些微管附着在空间分离的DNA簇中的染色体上。PfMCMBP缺失促进有丝分裂纺锤体微管的形成，延伸到一个以上的DNA焦点,导致异常的中心粒分布。虽然PfMCMBP缺陷使寄生虫无法正常进行核分裂，但其可以完成胞质分裂，形成具有不同细胞和细胞核大小的非整倍体裂殖子。本文表明寄生虫缺乏一个强大的检查点来停止异常核分裂后的胞质分裂。▲ PfMCMBP缺陷寄生虫在整个环期至早期滋养体的核DNA形状Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜参考文献：Sajuthi S P , Deford P , Li Y C , et al. Type 2 and interferon inflammation regulate SARS-CoV-2 entry factor expression in the airway epithelium[J]. Nature Communications, 2020, 11(1).DOI：10.1038/s41467-020-18781-2

多重分析，即在单个反应中检测多个靶标，可以帮助用户节省宝贵的样品，并节省时间、试剂和成本。此外，和做多次单重实验相比，由于多重反应所有靶标都在同一个反应中进行扩增和检测，使得样品和试剂的移液操作误差减少，因此多重检测可以提高定量精度。naica®微滴芯片数字PCR系统的多重检测与单重检测一样灵敏和精准。专业的分析设计和优化可以实现更复杂的多重检测，从而在单个PCR反应中用多对引物和探针扩增多个DNA目标。Crystal Miner软件是一个开放的数据分析软件，可以通过其提供的强大工具来帮助优化和完成多重分析。评估引物和探针性能的实验指南1.Stilla建议使用naica® multiplex PCR mix，该试剂设计的初衷是为了得到更好的多重naica®微滴芯片数字PCR系统的实验数据。2.单重反应测试。在进行多重反应之前，每个引物/探针/模板均需要进行单重性能验证。例如，对于三重分析，在多重反应混合进行之前，首先应对核酸靶标进行三个单重反应。当进行单重反应时，预期结果只出现单一阳性。3.为了优化多重分析性能，样品性质也是十分重要的因素(例如，游离DNA和基因组DNA需要设计不同的DNA片段，分析游离DNA需要设计成短片段DNA，分析基因组DNA需要设计更完整的DNA片段)。4.使用的DNA模板应该没有污染物和可能的抑制剂。如果样品材料稀少或不容易获得，可以合成寡核苷酸作为模板分析优化。5. 评估每个单重反应的退火温度范围，在最佳反应温度下，阳性和阴性微滴分离良好且没有非特异性扩增(图1)。由Crystal Miner软件(图2)提供的Stilla可分离评价可以作为一种度量标准，用于确定所有探针的最佳退火温度。如果单重反应没有被很好地优化，可能会出现明显的非特异性扩增。此外，非特异性扩增可能由几个非优化参数造成。包括引物/探针二聚体或引物/探针非特异性。在这种情况下，可以采用多种方法限制非特异性序列的扩增，如提高退火温度、进行touch down PCR或重新设计引物序列等。实验前可使用相关软件评估引物探针的特异性。▲图1 ：Crystal Miner软件展示单重反应一维点状图，在60°C到65°C退火温度内， 蓝色、绿色和红色荧光通道检测到的荧光强度。黑框部分表示单重反应的最佳退火温度。可分性评分(e)可用于确定3个靶标扩增的最佳退火温度。(带*数字为可分性评分)▲图2 ：可分性评分是基于阳性和阴性微滴群体的距离。可分性评分是由Crystal Miner软件自动计算，并可以在高级QC标签栏下找到。6.在选定的退火温度下，使用所有引物和探针进行多重naica®微滴芯片数字PCR系统，并以区分度为指导，评估反应性能。如果有需要，可从以下几点优化:★ 调整PCR的循环数——建议从45个循环开始，并增加循环数，以进一步优化阳性和阴性微滴群体之间的分离度。★ 调整引物和探针浓度——naica®微滴芯片数字PCR系统推荐的引物和探针浓度范围可从0.125到1μM (图3)。对于多重分析的设计建议从较低的浓度范围开始,以减少反应的复杂性,减少引物和探针所占据的体积。▲图3。Crystal Miner软件的一维点状图显示了一系列引物(左图)和探针(右图)浓度不断增加时蓝色检测通道中的荧光强度。黑框部分表示良好的可分性评分，及在低引物探针浓度的选择标准下确定的用于多重分析的引物探针浓度。(带*数字为可分性评分)★ 使用修饰的碱基，如锁核苷酸(LNA)碱基或小沟结合基团(MGB)，以提高探针的Tm值，同时保持较短的长度(可能7.评价引物和探针的相互作用：在同一个多重实验中引物和/或探针之间形成同源/异源二聚体的概率应保持在最低。二聚体是可以评估的，相互作用的分数可以用多种工具来确定(例如，IDT Oligo Analyzer Tool, Primer 3, Primer express, Beacon designer) (图4)。高浓度的引物和探针会增加非特异性相互作用的概率。因此，多重分析时，建议所有检测都从低浓度的引物开始(例如，0.25 uM)，如果需要，逐步增加浓度至1 uM(例如，提高扩增效率)。▲图4：引物和探针之间的相互作用示例。a)target 1的探针与target 2的反向引物相互作用(R2 target 2，红框)。当使用反向引物RI target 2时，没有检测到这种相互作用。在本例中，应选择RI target 2进行多重检测。b) target 1的探针与target 2的正向引物的相互作用(F2 target 2. 蓝框)。当使用正向引物F1 target 2时，没有检测到这种相互作用。在本例中，FI target 2应被选择用于多重检测。8.对于多重分析，荧光溢出补偿是十分重要的。使用多个单色参照，Crystal Miner软件可以创建一个补偿模型用于特定的多重反应。有关荧光溢出的更详细描述,请访问https://www.gene-pi.com/item/spill-over-2/。执行荧光溢出补偿的操作说明请参考Crysta Miner软件用户手册。naica®微滴芯片数字PCR系统naica®微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。2.5小时内，可快速获得结果。

全国第七届病原体核酸检测新技术高级培训班将于2021年6月1-5日在江西省南昌市（中共江西省委滨江宾馆）采用线上线下结合形式召开。本次培训由中国医促会分子诊断学分会和中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所共同主办，江西省疾病预防控制中心承办，《中华实验和临床病毒学杂志》编辑部、《Biosafety and Health》编辑部、《病毒学报》编辑部、《Biomedical and Environmental Sciences》编辑部、《China CDC Weekly》编辑部和《Zoonoses》编辑部共同协办。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次会议，我们将在5号展位恭候您的参观咨询。本次培训班主要培训目的是为了跟踪分子检测技术在新冠病毒等病原体应用的最新进展，推广成熟的核酸检测技术，促进相关技术人员的学术交流，提高专业人员的相关知识和技术水平，培养基因检测专业高品质人才。数字PCR技术（Digital PCR)作为新一代核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可直接数出含有DNA分子的微分区的个数，通过泊松分布算法对起始样品进行绝对定量。具有灵敏度高、精确度高、对抑制物的耐受度高等优势。在感染性疾病中病原体检测和传染病预防监测中，数字PCR技术可针对病原微生物核酸拷贝数直接定量，从而实现灵敏、精准、快速、特异性地鉴定和分型，同时实现难培养和不能培养的病原微生物的快速检测。基于naica®微滴芯片数字PCR系统，深蓝云提供全自动封闭式的三色和六色荧光通道高灵敏数字PCR检测病原体解决方案，无需标准品和标准曲线，只需一步上样，将PCR反应体系分成～30000个纳升级单层平铺的微滴阵列，实现核酸的单分子扩增，通过泊松分布获得核酸的拷贝数，是真正的绝对定量检测方法，具备高灵敏度、高精准度、高分辨力、高耐受力等技术特征。在保持高特异、快速检测的同时，实现全自动化、全封闭，确保环境和样本安全。同时深蓝云提供病原体数字PCR检测试剂，快速、特异、高灵敏的区分感染何种病原体，有助于病原体的早期鉴定，降低误诊、漏诊的发生概率，提供自动质控和原始结果可视化回溯功能，排除假阳性结果，同时由于不同病原体的治疗方案不同，同样有助于患者的临床治疗和地方流行性传播的预防。工作流程温馨提示：会议注册本次培训班采用线下和线上结合教学，学员代表、嘉宾等参会人员可通过微信扫描会议二维码或者复制链接（http://m.jxruishi.cn/col.jsp?id=123）进入在线注册页面，按要求逐项填写注册信息。线下参会学员注册截止日期为2021年5月25日，请合理安排时间完成注册。* 注意事项：1、本次会议线下参会名额有限且不接受现场报名。且会议房间有限，请参会代表尽快完成注册并做好房间预订，线下参会注册截止时间为5月25日24点。2、未在大会平台预订住宿的参会代表，组委会将不负责预留房间，请自行解决。3、若注册时选择住房登记后因故不能参会，或行程发生变化请与会务组老师联系，避免造成不必要的损失。4、关于学分证获取。本次培训班学分证是各省市疾控中心定向推荐学员参加学习并参加考试且成绩合格（60分）后方可获得学分证。本次考试为线上平台形式，请在考试平台开放时间段内登陆并完成考试。5、会议视频有回放，回放有效期为30天。6、如有学员想咨询讲者相关问题，会议期间请在直播页面“Q&A”中用“咨询讲者姓名+问题”格式发送内容，讲者将酌情选择问题回复，问答统一整理后发布在平台首页“Q&A”版块内。深蓝云展台产品展示naica®下一代数字PCR平台naica®全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica®微滴芯片数字PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

实时荧光定量PCR目前已经成为基因表达水平定量差异比较的权威性方法，数字PCR由于其优越的绝对定量技术，也正在蓬勃发展，涉及包括农业、环境、工业和医学研究等多个领域。为了帮助科学家能产生一致的、高质量的实验数据，Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments(qMIQE)及Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments（dMIQE）指南应运而生。该指南正被全世界越来越多的研究人员、生物期刊、学术和商业机构支持。qPCR和dPCR MIQE指南是一个全球标准化的成功案例，该指南规定了实验和发表文章时所必须的最低实验信息，规范了整个实验流程，以确保实验的实用性、准确性和可重复性。实验数据无法重复？结果质量无法评估？因信息缺失被拒稿？一起来了解MIQE是如何从下列方面去确保实验结果质量的：1、专业术语；2、样本采集、处理和制备；3、核算质量控制；4、反转录；5、引物探针信息；6、数据分析。扫描二维码进入直播间赶紧扫描上方二维码报名参加吧！

线粒体疾病是线粒体基因组（mtDNA）发生基因突变所导致的一类遗传疾病, 仅通过雌性种系传播。通常，细胞中超过60%的线粒体DNA发生突变就会导致疾病，并且一个人的线粒体DNA突变越多，其疾病就越严重，线粒体疾病目前是不可治愈的。▲图源：网络（侵删）目前核移植（NT），也称为线粒体捐赠，作为一种预防线粒体疾病从患病母亲传给其后代的战略而受到了越来越多的关注。但由于核移植中含有少量细胞质来源的mtDNA，介导受体中mtDNA异质性改变且伴有扩增，因此需要对mtDNA突变负荷进行准确定量，现用NGS测序方法局限性在于成本较高、耗时较长、数据处理复杂且信噪比较低。Leber遗传性视神经病（LHON）最常见的母系遗传性线粒体疾病，比利时根特大学生物系专家团利用数字PCR(dPCR)平台对LHON相关m.11778 G＞A突变位点进行检测，并和NGS方法进行对比，探讨数字PCR在mtDNA异质性定量中的适用性。研究成果发表在知名期刊《Clinical Chemistry》上。检测样本信息:为了评估dPCR在异质性评估中的适用性，共设置了3种类型的样品：（i）具有很高突变负荷的患者样品13个；（ii）由健康志愿者捐赠的同质野生型样品3个；（iii）经过NT处理的样品，由于mtDNA残留而携带低突变负荷，共6个样本。检测方法：通过处理，将样品突变负荷范围设置在50％至0.01％，进行分析验证。实验结论:☑  在dPCR和NGS结果上观察到的突变率具有良好的一致性。☑与NGS相比，dPCR具有更低的背景噪声。使用naica®微滴芯片数字PCR系统，非患者样本中的突变等位基因没有阳性信号，符合预期。☑  和dPCR结果相比，在NGS结果中几乎所有异质样品的次要等位基因频率都被高估，初步猜测NGS实验流程中可能引入了错误序列，经过PCR扩增改变次要等位基因频率。☑  相较于NGS，数字PCR成本低、操作简便、结果直观、更适用于低频突变检测。☑  数字PCR方法适合用于核移植后线粒体异质性定量检测。▲naica®微滴芯片数字PCR系统检测不同mtDNA样本二维图（FAM-突变型，VIC-野生型）左上：高突变负荷患者样本；右上：野生型样本；左下：NT后异质性样本；右下：NTC▲Bland-Altman PLOT评估naica®微滴芯片数字PCR系统检测结果和NGS结果的一致性最后，文章conclusion给出-数字PCR具有更多优势，适用于核移植后线粒体的异质性评估：▲ 图片来源：原文第8页期刊介绍：naica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR系统在进行核酸检测时具有独特的优势。该系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

2021年5月13日，深蓝云Gene-π数字PCR学堂——核酸绝对定量分析及应用训练营（北京站）在北大医疗创新谷成功举办。本次培训以理论结合实践的形式，聚焦数字PCR原理系统、实验操作、结果分析，在先进治疗中数字PCR技术的体系开发和标准物质的绝对定量等核心内容，受到学员的一致好评。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量和基因检测提供了全新的思路，可实现单细胞/单分子层面的绝对定量。目前，该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检、病原微生物、先进的细胞治疗、基因治疗检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。本次训练营对第三代数字PCR技术及naica®️微滴芯片数字PCR技术介绍、naica®️ 微滴芯片数字PCR系统在核酸绝对定量技术及先进治疗中的应用、在生物制品安全检测中的应用等方面进行了详细介绍，同时进行实操。▲ 专家在进行精彩的分享▲ 实验操作作为数字PCR头部企业技术开创者的法国Stilla Technologies公司于2019年提出数字PCR在线学习资源中心——www.gene-pi.com，为使用和即将使用数字PCR技术的专家学者提供有效的途径，同时开展Gene-π数字PCR线下实操培训课堂，为大家提供完善的服务以及优化的应用解决方案。naica®微滴芯片数字PCR系统naica®微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。2.5小时内，可快速获得结果。

中国细胞生物学学会细胞死亡研究分会2021年第一届学术年会将于2021年6月2-5日在浙江桐庐海博大酒店（二楼桐庐会堂A厅）举办，此次大会由中国细胞生物学学会细胞死亡研究分会主办，浙江大学、上海市细胞生物学学会和细胞学会会展部联合承办。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次会议，我们将在6号展位恭候您的参观咨询。程序性细胞死亡是生物体最基本的生命活动。越来越多的证据表明程序性细胞死亡的方式具有多样性，以细胞凋亡及程序性细胞坏死为代表的多种细胞死亡方式广泛参与生物体发育和疾病过程，并扮演不同的角色。全面系统的研究多种细胞死亡方式，能够推动对不同细胞死亡方式机制的深入了解，为细胞死亡相关疾病的临床诊治提供重要依据。详情请登录：https://www.cscb.org.cn/meeting/celldeath2021/查看。细胞死亡实时形态学监测全电动化解决方案Revolution正倒置一体电动化智能显微成像系统☑   电动化智能程序：电动追焦，锁焦，多点样品导航和重访。☑   高清晰全景图像： 双sCMOS相机，多焦面叠加，多视野整合，多维成像。☑   HYPERSCAN高速：同步无刷直线伺服电机和相机，数秒钟完成全景扫描。☑   卓越的光学性能：大视野，大景深，多物镜、多荧光立方可选。☑   一体化机身结构：正倒置一体，全能型显微镜，方便安放和运输。☑   人性化数据交互：互联网+现场和远程实时共揽、延时摄影和图像分享。细胞死亡信号通路及激活和抑制因子数字PCR解决方案naica®全自动微滴芯片数字PCR系统数字PCR技术(Digital PCR)无需标准品和标准曲线即可对起始样品中靶标核酸进行绝对定量。深蓝云展台产品展示naica®下一代数字PCR平台naica®全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica®微滴芯片数字PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统深蓝云生物科技将携带相关产品亮相此次大会，恭候您的参观咨询！与您不见不散——展位：6号

数字PCR是一种精准的核酸绝对定量技术，可对目标基因进行绝对定量，具有卓越的灵敏度和精准度。其灵敏度高的关键因素在于将PCR混合液分割成数万个油包水的独立微滴。液相和油相之间的界面上发生的化学相互作用可能会影响PCR扩增效率。PCR预混液的组成和性能对于确保靶点的有效扩增和微滴稳定性至关重要。naica® multiplex PCR MIX是数字PCR头部企业法国Stilla Technologies公司生产，专用于在naica® 微滴芯片数字PCR系统，在整个检测动态范围内，提供强大的微滴稳定性和卓越线性范围的多重目标基因的定量检测。为了达到最佳灵活性和灵敏度，我们提供5X和10X浓度的naica® multiplex PCR MIX以降低MIX用量，从而使得更多的反应体积可供更多的模板、引物或探针的加入。naica® multiplex PCR MIX可在naica®微滴芯片数字PCR系统的动态范围内对多个靶点进行同时定量，并保持良好线性。采用0.2到13000cp/uL的DNA样本，使用10X naica® multiplex PCR MIX，在naica®微滴芯片数字PCR系统上进行三个靶点的同时检测（图1）。高浓度的PCR MIX（5倍和10倍浓度均可使用）可使样本输入体积最大化，从而提高低浓度样本中目标靶点的检测能力。▲ 图1：使用naica® multiplex PCR MIX同时对3个靶点（BRAF、ALB和pUC18）进行线性定量。将人类基因组(hg)DNA和pUC18质粒进行连续稀释（0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000cp/uL），各稀释液进行3次重复检测。结果显示各靶点的线性关系好，R2均大于0.99，说明结果高度真实可靠。在多重检测中可以对低浓度靶点进行稳定且灵敏的检测。多重检测中多个靶点的共扩增比单个靶点的扩增更为复杂，可能会因为潜在的干扰和反应复杂性的影响，导致多重检测的线性范围降低。在naica®微滴芯片数字PCR系统上使用naica® multiplex PCR MIX分别进行3重和单重检测（图2），结果发现，不管是在高浓度的外部靶点（BRAF和ALB hgDNA）存在的情况下（图2A）还是在外部靶点不存在的情况下（图2B），两组实验中pUC18线性量化的动态范围一致，且阳性微滴和阴性微滴群组的荧光水平和可分性也高度一致。此外，不管是单重还是3重检测，pUC18靶点都能得到可靠的定量（图3），且检测范围和线性度一致。▲ 图2：使用naica® multiplex PCR MIX进行的3重和单重扩增的比较。将pUC18质粒的13000至0.2 cp/uL的系列稀释液在2个外部扩增靶点背景下(每个靶标为3000cp/uL,图A))和在不含外部靶点(图B)的情况下进行定量检测,3次重复。结果显示，3重和单重扩增中pUC18的检测结果高度一致。注：3重和单重的反应液中均含有pUC18、BRAF和ALB的特异性引物探针。▲图3：使用naica® multiplex PCR MIX的扩增结果真实可靠。采用13000-0.2cp / uL的pUC18 DNA稀释液进行3重(A)和单重检测(B)，各稀释液进行3次重复。(A) 3重反应中额外加入3000cp / uL(10ng)的hgDNA模板；(B) 单重反应中没有额外加入hgDNA模板。结果显示，3重和单重反应中，pUC18均能获得真实可靠的定量结果，同时检测范围和线性高度一致；3重反应中BRAF和ALB检测也具有良好的重复性，相对标准偏差在2.3-2.5%之间，n=21。订购信息：Eva Green®染料法的naica® PCR Mix也可订购。

PCR技术以特异性的寡核苷酸引物放大扩增特定的DNA片段，一对引物在单次反应扩增单个基因。通常每个靶标分别进行检测，即单重PCR反应，但当我们需要检测多个靶标基因时，单重PCR费时费力同时无法排除不同样品孔间的加样差异，如内参基因的归一化检测，需要在同一反应管中检测内参基因和目标基因，多重PCR实验无疑是最简单直接的解决方案。多重PCR也称复合PCR,是在常规PCR基础上改进并发展起来的一种PCR扩增技术,即可在一个反应体系中加入两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段。在荧光定量PCR（qPCR）和数字PCR（digital PCR）技术中，多重PCR设计配合多荧光通道可以进行更多靶标的相对于标准品的检测和直接的绝对定量检测，既具有单重PCR的敏感性和特异性，同时又比单重PCR更加高效、快捷和经济。多重PCR实验具体如何进行？又有哪些注意事项？实时荧光定量PCR和数字PCR如何和多重PCR结合？北京深蓝云生物科技有限公司云课堂将为您答疑解惑。想要了解更多关于单重PCR和多重PCR实验设计的相关信息，快来参加5月13号的直播课堂吧！扫描二维码进入直播间

数字PCR技术（Digital PCR)作为新一代核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可直接数出含有DNA分子的微分区的个数，通过泊松分布算法对起始样品进行绝对定量。具有灵敏度高、精确度高、对抑制物的耐受度高等优势。在感染性疾病中病原体检测和传染病预防监测中，数字PCR技术可针对病原微生物核酸拷贝数直接定量，从而实现灵敏、精准、快速、特异性地鉴定和分型，同时实现难培养和不能培养的病原微生物的快速检测。基于naica®微滴芯片数字PCR系统深蓝云提供全自动封闭式的三色和六色荧光通道高灵敏数字PCR检测病原体解决方案，无需标准品和标准曲线，只需一步上样，将PCR反应体系分成～30000个纳升级单层平铺的微滴阵列，实现核酸的单分子扩增，通过泊松分布获得核酸的拷贝数，是真正的绝对定量检测方法，具备高灵敏度、高精准度、高分辨力、高耐受力等技术特征。在保持高特异、快速检测的同时，实现全自动化、全封闭，确保环境和样本安全。同时深蓝云提供病原体数字PCR检测试剂，快速、特异、高灵敏地区分感染何种病原体，有助于病原体的早期鉴定，降低误诊、漏诊的发生概率，提供自动质控和原始结果可视化回溯功能，排除假阳性结果，同时由于不同病原体的治疗方案不同，同样有助于患者的临床治疗和地方流行性传播的预防。工作流程：北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次会议，我们将在17号展位恭候您的参观咨询。深蓝云展台产品展示naica®下一代数字PCR平台naica®全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica®微滴芯片数字PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量和基因检测提供了全新的思路，可实现单细胞/单分子层面的绝对定量。目前，该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检、病原微生物、先进的细胞治疗、基因治疗检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。在先进治疗领域，数字PCR可以提供比qPCR更精准的核酸定量，不依赖于标准品和标准曲线，直接读取阳性信号，通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数，并具有检测周期短，灵敏度和精确度高等特点。用于先进的细胞治疗、基因治疗相关载体的滴度检测，病毒完整性检测，宿主残留检测以及微生物检测等，突破现有检测方法的局限性，精准质控确保结果可靠。为更好地让广大学者了解数字PCR技术，Gene-π数字PCR学堂——核酸绝对定量分析及应用训练营（北京站）将于2021年05月13日在北京召开。聚焦于数字PCR原理、实验操作、应用进展、结果分析，先进治疗中的质量控制、病毒载体标准品定量等核心内容，训练营将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。培训时间地点时间：2021年5月13日地点：北京市昌平区中关村生命科学园医疗园路 北大医疗创新谷二层第二会议室培训日程您在PCR实验操作中是否遇到过问题？如何在实验过程中设置质控要求？数字PCR在什么浓度范围内检测是准确的？数字PCR的最低检测限如何评估？数字PCR引物探针设计和qPCR有什么区别及如何评估其质量？在本次训练营中都可以得到答案，心动了吗？心动了就赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！敲黑板了！我们的初衷是--真诚地把先进技术和应用带给大家!只要您提交了报名申请，经审核通过后，收到报名成功确认通知，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，先到先得哦。赶紧报名吧！

在现代水产养殖中，水产养殖系统的水质直接影响鱼类的健康和生产。微生物在去除有机物和氮循环、有毒硫化氢(H2S)的产生方面发挥着至关重要的作用，但是如果微生物对鱼类致病或发挥益生菌特性，则会直接影响鱼类的健康。近日，法国Stilla公司和挪威SINTEF Ocean合作在《Journal of Microbiological Methods》杂志上发表了一篇名为“Absolute quantification of priority bacteria in aquaculture using digital PCR”的文章，旨在对水产养殖的相关优势细菌进行检测。在本文中，作者主要分析了与鲑鱼生产相关的三种不同的细菌：第一种为鱼类病原体，与鱼类的溃疡性疾病有关的Moritella viscosa，会引起肠性红嘴病的Yersinia ruckeri以及与鱼类的细菌性冷水病有关的Flavobacterium psychrophilum。第二种为可以从海产品转移到消费者身上的人类病原体，Listeria monocytogenes。第三种为通过破坏饲养环境威胁鱼类健康的细菌。通常硫酸盐还原细菌（SRB）在厌氧条件下通过将硫酸盐（SO42-）转化为有毒的硫化氢（H2S）来影响鱼类健康。可通过以Desulfovibrio desulfuricans为参考菌株进行SRB检测。研究学者利用naica®微滴芯片数字PCR系统的单重和多重检测方式对上述优势菌种进行绝对定量。结果表明Moritella viscosa， Yersinia ruckeri，Flavobacterium psychrophilum检出限在20 fg左右，Listeria monocytogenes和Desulfovibrio desulfuricans DNA检测含量可低至2 fg，同时它们都具有较高的线性动态范围（图1）。多重cdPCR检测结果与在相应的单重分析中检测到的目标基因浓度非常吻合（图2，图3）。此次试验充分证明了naica®微滴芯片数字PCR系统可以同时精确定量复杂水质样品中多种优势菌株。▲图1 ：naica®微滴芯片数字PCR系统定量5种优势菌种的线性回归图，分别给出相应的方程和回归系数▲图2：对Yersinia ruckeri（A）Flavobacterium psychrophilum（B）的单、双重分析结果进行比较。在MMC-DNA背景(1 ng/μl)中添加Yersinia ruckeri ，Flavobacterium psychrophilum gDNA，10倍稀释后进行基因拷贝数定量。▲图3 ：在1 ng/μl MMC-DNA背景下，单重(圆形)和三重(三角形)测定的靶基因拷贝浓度绘制。恒等线表示每个点的X坐标和y坐标相等的位置。文章基于naica®微滴芯片数字PCR系统完成对多种优势菌株的定量检测。naica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR系统在进行核酸检测时具有独特的优势。该系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要两个半小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

PCR（聚合酶链式反应）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，其最大的特点是能将微量的DNA大幅增加。作为科研路上打怪升级的初级关卡，PCR可以说是重点中的基本，基本中的重点。对于实验室萌新来说，它很神秘；对于实验室老手来说，它很easy。那为什么老手们做起来不那么费力呢？主要是他们把握住了PCR实验的关键--引物探针的设计。引物探针的设计很大程度上决定了PCR实验的难易程度，那么该如何设计引物探针呢？现有的引物设计软件和网站又该怎么使用呢？所有的答案都在“引物探针的设计和设计软件的介绍”的直播课中，让北京深蓝云生物科技有限公司来为您答疑解惑吧！想了解更多关于实时荧光定量PCR知识的分享，快来参加深蓝云直播课堂吧！赶紧扫描上方二维码报名参加吧！

2021年4月13日，深蓝云Gene-π数字PCR学堂——数字PCR病毒载量精准检测工具（北京站）在国家疾控中心成功举办。为更好的服务于用户，本次培训班以理论结合实践的形式，聚焦数字PCR原理系统、实验操作、结果分析，病毒载量精准检测等核心内容，受到了用户的一致好评。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量和核酸检测提供了全新的思路。无需标准品和标准曲线，可提供比qPCR更精准的核酸定量，直接读取阳性信号，通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数，并具有高灵敏度、高精确度等特点。本次训练营对第三代数字PCR技术及naica®️微滴芯片式数字PCR技术介绍、naica®️数字PCR核酸绝对定量技术中的病原体检测应用、病毒载体绝对拷贝浓度数字PCR检测实验设计、特别是一步法数字PCR新冠病毒检测试剂盒的使用和结果判读等方面进行了详细介绍，同时进行实操。▲ 专家在进行精彩的分享▲ 实验操作作为数字PCR头部企业技术开创者的法国Stilla Technologies公司于2019年提出数字PCR在线学习资源中心——www.gene-pi.com，为使用和即将使用数字PCR技术的专家学者提供有效的途径，同时开展Gene-π数字PCR线下实操培训课堂，为用户提供完善的服务以及优化的应用解决方案。naica®微滴芯片式数字PCR系统naica®微滴芯片式数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。2.5小时内，可快速获得结果。数字PCR学堂为了方便大家更好的学习数字PCR相关知识，我们为大家提供了Gene-π数字PCR学堂（www.cycloudbio.com数字PCR学堂快速入口），您可以选择感兴趣的应用教程，其中包含从实验设计到数据分析的详细工作流程。您还可以通过搜索导航工具直接搜索特定的项目（"dPCR的DNA准备"，"荧光溢出"等），或点击我们的"HOW TO" 选择您需要的部分（设计、分析、报告）。

新冠肺炎疫情发生以来，爱普拜生物（Apexbio）研发团队利用naica®数字PCR平台迅速组织开发了“超灵敏三色数字PCR技术的新型冠状病毒核酸检测系统”。近日，通过北京市新技术新产品（服务）认定，喜获北京市新技术新产品（服务）证书。超灵敏三色数字PCR技术的新型冠状病毒核酸检测系统基于naica®数字PCR技术，采用创新的反转录-dPCR一步法多重荧光探针检测技术，只需将模板RNA与检测试剂加入芯片，运行自动化、全封闭的naica®数字PCR系统即可。naica®自动化微滴芯片数字PCR系统采用cutting-edge微流体创新型2D芯片作为整个系统的设计核心，通过单层微滴阵列的方式将PCR体系分成25000~30000个均匀一致的微滴，对靶序列在同一温度循环的条件下进行独立且稳定的PCR扩增。结合了强大的图像分析技术和直观可视的检测功能，在一个检测孔中快速完成新冠病毒/人源内标同步检测，通过对阴阳性微滴的计数，从而直接获得病毒拷贝数浓度。无需标曲，真正实现高灵敏、高特异的核酸绝对定量检测方案。产品特性：◐ 结果判读简单直观：直接输出病毒拷贝数◐ 灵敏度更高：进行可疑样本的复核检测◐ 严格质控：含样本量质控基因和实验质控品◐ 不限样本来源：对抑制剂的耐受力强检测流程:北京市新技术新产品（服务）认定是由北京市科学技术委员会、北京市发展和改革委员会、北京市经济和信息化局、北京市住房和城乡建设委员会、北京市市场监督管理局、中关村科技园区管理委员会共同开展，旨在认证北京市重点发展的先导技术和战略新兴技术，推动高新技术产业的发展，助力企业创新能力的提升，具有极高的权威性。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。

介绍多重实时荧光定量PCR为研究多个靶点提供了许多优势。首先，一次PCR检测多个基因省时省力，可以更快地获得结果，同时最大限度地减少使用耗材，如PCR管或板。此外，每个样本可以获得更多的信息，这在样本量有限的情况下尤其重要。最后，由于RNA水平或基因拷贝数在同一反应中直接比较，因此不需要参比染料来校正孔或板之间的移液差异。在多重实时荧光定量PCR中使用不同荧光标记的靶标特异性探针，可以在不同的荧光通道中检测各靶标基因。与需要进行凝胶电泳分析的终点法多重PCR相比，这消除了对不同片段大小PCR产物的需求。此外，使用靶标特异性荧光探针的反应不会受到非特异性信号的干扰，而非特异性信号一般可能来自次级PCR产物与染料(如SYBR Green)的结合。▲ 图1：Azure Cielo™新型的高性能光学检测系统。采用16组光纤单孔扫描技术，可对16孔进行同时成像，以达到更快、更高效的扫描。多重实时荧光定量PCR已应用于多种研究，例如从基因表达的研究到生物样品中潜在病原体的快速检测和鉴别等1-3。该技术非常强大，甚至已被优化应用到国际空间站微重力环境中4。最近，多重qPCR还被广泛应用于SARS-CoV-2和甲型、乙型流感的鉴别诊断5。Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统最多可满足6个靶标的多重实验需求。该系统采用16组光纤单孔扫描设计，特殊的激发/发射方式可确保在单孔扫描时仅激发孔内区域，通过消除光散射以消除背景噪声和孔间干扰；而采用单一光源进行整板激发的检测系统，则会发生光散射，导致更高的背景噪音干扰和更少的光线激发样本（图2）。为了提高速度，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可16孔同时成像，整个96孔板在9s内即完成6个荧光通道的扫描(图1)。▲ 图2：单一光源可同时激发孔内和孔外区域，导致更高的背景噪音干扰和更少的光线激发样本。Azure Cielo采用光纤单孔扫描，可以消除光散射，提高了孔间数据的一致性。Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道兼容大部分qPCR染料可满足不同实验需求（见表1）。▲ 表1 ：Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统广泛兼容多种qPCR化学染料。为了证明Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的多重性能，使用人cDNA样本分别进行了单重及6重的RT-qPCR检测。方法单重RT-qPCR实验：均使用人cDNA样本，配制各自的20uL单重PCR反应液，2次重复，进行6个荧光通道的检测。6重RT-qPCR实验：使用250ng至1.95ng的人cDNA样本两倍梯度稀释液，配制20uL的6重PCR反应液，2次重复，进行6个荧光通道的检测。表2中列出了6个靶标基因和各自的探针类型。▲表2：6个靶标基因和探针类型。按照如下程序进行qPCR扩增：1x，95℃ 90s；45x，95℃ 15s，60℃ 20s。采用绝对定量对数据进行分析，得到各个基因的Cq值和标准曲线。结果与讨论如图3所示，从单重RT-qPCR反应的扩增曲线中看出，各通道之间均没有发生荧光信号溢出或串扰的情况。▲ 图3：在Azure Cielo™  6 实时荧光定量PCR系统上进行单重RT-qPCR反应，扫描所有通道的扩增曲线。6重RT-qPCR实验中各靶标基因的扩增效率和线性动态范围如图4所示，每个靶标的扩增效率均接近100%，且标准曲线的R2值接近于1。▲ 图4 ：6重RT-qPCR实验中各靶标基因的扩增效率和线性动态范围。以上结果表明Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统具有卓越的多重反应能力以及非凡的检测性能。同时6通道的设计极大程度上提高了实验的灵活性，可选择多种染料类型，方便多重PCR的检测。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。参考文献：1. Valasek MA, Repa JJ. The power of real-time PCR. Adv Physiol Educ. 2005;29:151–159.2. Shin JH, Lee SE, Kim TS, et al. Development of molecular diagnosis using multiplex real-time PCR and T4 phage internal control to simultaneously detect Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia, and Cyclospora cayetanensis from human stool samples. Korean J Parasitol. 2018;56(5):419–427.3. Irshad M, Gupta P, Mankotia DS, et al. Multiplex qPCR for serodetection and serotyping of hepatitis viruses: A brief review. World J Gastroenterol. 2016;22(20):4824–4834.4. Parra M, Jung J, Boone TD, et al. Microgravity validation of a novel system for RNA isolation and multiplex quantitative real time PCR analysis of gene expression on the International Space Station. PLoS ONE.2017;12(9):e0183480.5. FDA. (2020). CDC Influenza SARS-CoV-2 (Flu SC2) Multiplex Assay. FDA.Gov. https://www.fda.gov/media/139743.

PCR技术自发明至今，为生命科学的发展做出了不可磨灭的贡献。Real-time PCR（实时荧光定量PCR）和digital PCR（数字PCR技术）是基于一代PCR技术开发的第二代和第三代技术，目前已经得到了广泛的应用。Real-time PCR技术是利用标准曲线对样品进行定量分析；数字PCR技术通过生成单层平铺的微滴阵列的单分子PCR进行终点法检测，基于泊松分布计算的绝对定量方法，三代PCR技术之间有哪些异同之处呢？让我们从根源着手，从PCR，Real-time PCR，digital PCR三代PCR基本原理出发去一探究竟。北京深蓝云生物科技有限公司为您解答疑惑，提供“PCR，Real-time PCR，digital PCR三代PCR技术发展和原理”网络直播课，与大家共同探讨PCR技术和应用。想要了解更多关于PCR，Real-time PCR，digital PCR三代PCR相关的信息，快来参加4月15日的直播课堂吧！赶紧扫描上方二维码报名参加吧！

2021年4月7日，深蓝云Gene-π数字PCR学堂——先进治疗中核酸绝对定量分析及应用（上海张江站）成功举办。本次训练营以理论结合实践的形式，聚焦于数字PCR原理系统、实验操作、应用进展、结果分析，先进治疗中的质量控制、病毒载体标准品定量等核心内容，受到了学员们的一致好评。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量和基因检测提供了全新的思路，可实现单细胞/单分子层面的绝对定量。目前，该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检、病原微生物、先进治疗检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。为了更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术，本次训练营对第三代数字PCR技术及naica®️微滴芯片式数字PCR技术介绍、数字PCR系统原理、naica®️数字PCR核酸绝对定量技术及先进治疗中的应用等方面进行了详细介绍，同时进行实操。▲ 专家在进行精彩的分享▲ 实验操作数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在医学、环境、食品检测等多个领域展现出良好的应用前景，尤其以医学方面为最， 在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的量化指标，受到了学员们的一致认可。naica®微滴芯片式数字PCR系统naica®微滴芯片式数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。2.5小时内，可快速获得结果。

2020年，我国新发癌症达457万，而因癌症死亡的人数超过300万，因此更有效、更合理的癌症治疗方案开发逐渐被人重视。在之前的癌症治疗中，对可用药物的反应检测，如肿瘤缩小，通常需要几周到几个月的时间，无法代表肿瘤的动态敏感性。新近开发的植入式微型装置(IMD)，用于将微量化疗剂局部输送到活肿瘤的狭窄区域；随后可以取出组织并进行分析，以评估药物反应。这种方法有可能快速筛选多种药物，但需要手术切除组织，并且仅在切除组织时的单个时间点评估药物反应。本文研究者开发了一个新的检测平台——“肿瘤实验室”植入式微型设备(LIT-IMD)平台，可直接用于对活肿瘤内的细胞死亡药物反应进行成像，无需切除或处理。LIT-IMD是将微型成像探针、植入式微型设备、活细胞检测技术结合在一起，将其插入活肿瘤中，IMD将多个药物微剂量输送到空间离散的位置，同时，它局部释放微量的荧光细胞死亡检测剂（碘化丙锭PI，PI结合双链DNA，但只能进入已经破坏细胞膜的细胞；因此，它在失去膜完整性的晚期凋亡和坏死细胞中积累），扩散到暴露于药物的组织中，并在细胞死亡部位积累。集成的小型化荧光成像探针对每个区域成像，以评估药物诱导的细胞死亡。研发者使用LIT-IMD对鼠肿瘤模型8小时多种药物的反应进行评估，目前评估细胞死亡的金标准方法是荧光成像和荧光组织化学(IHC)分析，研究者将肿瘤成像与金标准荧光显微镜和组织病理学进行对比，使用Echo Revolve荧光显微镜进行标准成像，LIT-IMD成像结果明显与Echo Revolve荧光显微镜图片存在相关性。(b)将来自活肿瘤组织(第一列)中的M-2CFM成像的荧光信号与相应的Echo Revolve荧光显微镜(第二列)和免疫组织化学(IHC)(第三列)进行比较，在组织切片和处理后成像。在荧光和IHC图像上，方框表示与活体肿瘤中由M-2CFM探针成像的组织区域相对应的大约400 × 300 µm的感兴趣区域。在IHC图像上，“X”表示药物释放的位置；“V”表示活的肿瘤组织。经过训练的图像分类器能够从染色的IHC图像中定量确定非存活指数(非存活除以存活肿瘤)，然后将其与实验荧光图像相关联。该平台是第一个完全集成的平台，可用于原位评估多种化疗反应。Echo Revolve荧光显微镜在该成像平台研制过程中通过良好的成像效果和参数帮助研发者确定平台拍摄效果和仪器性能，帮助其优化和完善平台。Revolve正倒置一体显微镜Revolve显微镜展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。☑   视网膜屏显示技术：比拟目镜人眼观察效果。☑   全视野观察： 更清晰，更方便。☑   多通道荧光：多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。☑   自动化操作：通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。☑   App应用软件：基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。☑   精湛的工艺尽显高端品质：实现非凡的性能。

2020年10月22日，由Wioletta Rut 、Katarzyna Groborz、Linlin Zhang和Xinyuanyuan Sun等在《nature chemical biology》期刊发表了《SARS-CoV-2 Mpro inhibitors and activity-based probes for patient-sample imaging》的文章。SARS-CoV-2的主要蛋白酶（Mpro）是关键的抗病毒药物靶标，作者首先获得了该蛋白酶的荧光底物(HyCoSuL)靶向库，并确定了P4-P2位点的底物特异性，比较了SARS-CoV和SARS-CoV-2主要蛋白酶的底物偏好性。其次，作者设计并合成了一种有效的SARS-CoV-2抑制剂（Ac-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS）和两种活性探针，其中一种探针与SARS-CoV-2 Mpro配合物的晶体结构被确定。最后，作者观察了SARS-CoV-2 Mpro在COVID-19感染患者鼻部咽上皮细胞中的活性。这些数据为COVID-19有效诊断和治疗的化合物设计提供了支撑。在本次研究中，作者使用美国Azure Biosystems Sapphire平台检测SARS-CoV-2 Mpro 探针的敏感性，其中抑制剂是Ac-QS5-VS(Ac-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS)，活性探针是Bodipy-QS5-VS(Bodipy-PEG(4)-Abu-dTyr-Leu-Gln-VS)。Sapphire以其超高的分辨率，更宽的动态范围和更高的检测灵敏度助力此项研究。▲ Sapphire双模式多光谱激光成像系统☑   双模式成像：扫描检测和CCD成像双模式。☑   4个固态激光器激光激发：488nm(蓝色)、520nm(绿色)、658nm(红色) /685nm/638nm、784nm(NIR)，给用户更多荧光选择。☑   唯一的3种检测器设计：PMT，APDs和CCD检测器，PMT检测器用于蓝色荧光检测和磷屏成像；3个独立的APD检测器用于绿色、红色荧光检测和双近红外荧光检测，高分辨CCD用于高灵敏化学发光检测。☑   扫描方式：4通道同时扫描，扫描更快速。☑   分辨率更高：可达10微米的分辨率，成像更清晰。☑   动态范围更宽：同时定量低丰度蛋白和高丰度蛋白，定量更准确 。

数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量和基因检测提供了全新的思路，可实现单细胞/单分子层面的绝对定量。目前，该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检、病原微生物、先进治疗检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。在先进治疗领域，数字PCR可以提供比qPCR更精准的核酸定量，不依赖于标准品和标准曲线，直接读取阳性信号，通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数，并具有检测周期短，灵敏度和精确度高等特点。用于先进治疗相关载体的滴度检测，病毒完整性检测，宿主残留检测以及微生物检测等，突破现有检测方法的局限性，精准质控确保结果可靠。为更好地让广大学者了解数字PCR技术，Gene-π数字PCR学堂——先进治疗中核酸绝对定量分析及应用（上海张江站）将于2021年04月7日在上海张江召开。聚焦于数字PCR原理系统、实验操作、应用进展、结果分析，先进治疗中的质量控制、病毒载体标准品定量等核心内容，训练营将携中外知名学者、资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。培训时间地点时间：2021年04月07日地点：中国药谷生物医药创新交流中心（上海市浦东新区蔡伦路 781 号一楼）培训日程主办单位中国医药生物技术协会基因检测技术分会上海市浦东新区生物产业行业协会上海市遗传学会长三角一体化基因检测联盟转化医学网承办单位北京深蓝云生物科技有限公司艾普拜生物科技（苏州）有限公司参会报名您在PCR实验操作中是否遇到过问题？如何在实验过程中设置质控要求？数字PCR的在什么浓度范围内检测是准确的？数字PCR的最低检测限如何评估？数字PCR引物探针设计和qPCR有什么区别及如何评估其质量？在本次训练营中都可以得到答案，心动了吗？心动了就赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！敲黑板了！我们的初衷是--真诚地把先进技术和应用带给大家!只要您提交了报名申请，经主办方审核通过后，收到报名成功确认通知，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，先到先得哦。赶紧报名吧！

实时荧光定量PCR技术是通过测定RNA的转录水平来评估基因的活力。RNA样本提取的质量直接影响基因表达分析。影响RNA品质的因素有以下三种：RNA浓度、RNA纯度和RNA完整性。检测RNA浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种：紫外分光光度计法：测量260nm吸收值计算RNA浓度，测量260nm/280nm吸收值的比值，用于评估RNA纯度。需要注意的是：在检测核酸物质时应该在固定的PH溶液中进行。260nm/280nm的比值范围在 1.9~2.1 之间。＜1.9，说明有蛋白质残留；＞2.1，说明RNA可能发生降解。琼脂糖凝胶电泳：完整的RNA通常有三条带，最亮的是28S条带，其次是18S条带，最淡的是5S条带（部分试剂盒提取时会过滤掉5S条带）。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28S和18S的比值。该方法主要用于检测RNA的纯度和完整性。如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量最好。若RNA条带出现弥散，原因可能：RNA被核酸酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。上述两种方法在实验室比较常用，此外还有几种检测方式供大家选择。荧光染料检测：通过荧光染料和RNA结合，荧光活性增强。此方法的灵敏度较高，主要用于检测RNA的浓度。微毛细管电泳：可使用软件的RIN（RNA Integrity Number）分数评估，10为RNA完整性最好，0为最差。此方法的灵敏度和分辨率较高，可用于检测RNA浓度、纯度和完整性。3’-5’完整性检测：是在一个RNA样本中检测GAPDH mRNA的完整性来代表所有RNA的完整性，主要用于检测RNA的完整性。得到高品质RNA的小建议：1、尽量避免RNA酶污染，使用无RNA酶的耗材和试剂，建议将扩增前后的场所分开。2、尽量减少采样时间，样品处理后快速冷冻，可以加入RNA保护剂。3、RNA提取过程中可以使用RNA酶抑制剂。4、存储过程中避免反复冻融。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

数字PCR（dPCR，Digital PCR）是核酸绝对定量检测的重要工具，该技术在低丰度核酸检测时展现出较高的灵敏度和精准度。随着对液体活检，拷贝数变异检测和病原体检测的深入研究，数字PCR技术的出现有可能对基因组研究产生重大影响。在方法验证时精准度、重复性、重现性、数据分析、方法优化和性能提升等方面，可能会影响这项技术在临床中的使用。因此，Front Line Genomics举办了此次网络研讨会，旨在介绍数字PCR（dPCR，Digital PCR）对于现代科学的影响，以及我们如何深度提升此技术的应用意义。法国Stilla Technologies公司将携naica®️微滴芯片式数字PCR平台参与此次研讨会。主题：数字PCR技术高阶创新应用解决方案日期：2021年3月11日（周四）时间：北京时间23：00内容简介：本次研讨会介绍在多种创新的高阶应用中数字PCR（dPCR，Digital PCR）实验设计并给出相应的解决方案。▶ 创新型数字PCR高分辨率熔解曲线分析技术用于核酸绝对定量和病原体检测主讲人：Stephanie Fraley，加州大学圣地亚哥分校生物工程系副教授。▶ 数字PCR与NGS方法监测体外受精核移植后线粒体携带水平的方法学比较主讲人：Ward de Spiegelaere，根特大学助理教授。▶ naica®微滴芯片式数字PCR系统—灵活的dPCR检测方法开发平台主讲人：Jean Fatien， Stilla Technologies公司研发科学家。注册页面：注册链接：https://app.livestorm.co/front-line-genomics/next-gen-pcr-online-advancing-dpcr-for-various-applications?type=detailednaica®微滴芯片式数字PCR系统naica®微滴芯片式数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。2.5小时内，可快速获得结果。

2021年度十大医疗创新（由美国克利夫兰诊所Cleveland Clinic评选），基因疗法成功入选。细胞与基因治疗改变了人类治疗遗传疾病和疑难杂症的方式，一些具有里程碑意义的研究将细胞和基因治疗推向制药工业面前，这个领域的迅速发展也带来了重大挑战，如病毒载体的攻克、如何将基因转移或编辑效率提高到有效治疗疾病所必需的水平，基因治疗后对患者的长期监测，以及基于现有生物技术的局限性是否能解决当前面临的一些问题等。数字PCR技术（ Digital PCR)作为新一代核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可直接数出含有DNA分子的微分区的个数，通过泊松分布算法对起始样品进行绝对定量。具有灵敏度高、精确度高、对抑制物的耐受度高等优势。在细胞和基因治疗领域中，数字PCR可以用于病毒基因组的拷贝数定量、标准物质的绝对定量、微生物快检、宿主DNA或RNA残留检测等方面。北京深蓝云生物科技有限公司（Cycloudbio）数字PCR产品经理-李冰先生与会报告“细胞与基因治疗中数字PCR方法的应用和实践”，聚焦在细胞和基因治疗领域中，数字PCR方法学的并行与转换为重点，更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术及其在基因和细胞治疗领域的相关应用。会议信息时间：2021年3月19日-20日地点：中国上海会议涵盖领域：细胞治疗，基因治疗，创新疗法，溶瘤病毒， CDMO，CRO，法规，IND应用，GLP，临床试验设计，GMP，免疫调节，病毒载体，高通量筛选，转染，联合疗法，IVD，数字PCR，CRISPR / CAS9基因编辑，人源化动物模型，mRNA肿瘤疫苗，纳米抗体，BsAbs，肿瘤微环境，干细胞疗法，重组蛋白等。深蓝云展台位置：A12深蓝云展台产品展示naica®下一代数字PCR平台naica®全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica®微滴芯片数字PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；以先进的iPad Pro替代了传统目镜设计，进行操控，观察，传输，采集图像和管理，同时基于iOS的Echo app，使软件操作更加人性化。▲  Echo  Revolve 正倒置一体显微镜▲ Echo  Rebel 正倒置一体显微镜

荧光定量Western Blot，绝对不是上样量越多越好。可靠的Western Blot印迹数据通过加载适当量的样品才能获得。加载过多的蛋白会导致信号饱和或用于检测的荧光基团的自猝灭。那么，您如何知道要加载多少裂解液呢？首先使用BCA或Bradford等蛋白测定方法测量裂解液样品的浓度。一旦知道样品的浓度，便可以确保每种样品的加载量相同。于此同时，您仍然需要一种方法来校准凝胶加载量和转印效率的问题。蛋白印迹定量的最佳方法和新共识是将蛋白进行归一化。许多期刊都接受了总蛋白质归一化（TPN），有些期刊（例如《JBC》）甚至要求作者在Western印迹的定量数据时使用TPN或使用验证过的看家蛋白进行归一化。在下面的实验中，加载了0.2-50µg的HeLa裂解物，以检测靶标蛋白STAT3与内参对照GAPDH和总蛋白膜染色的性能。尽管Total-PVDF膜染色线性最高至50μg裂解物，但这显然不是靶标蛋白STAT3加载的理想上样量，因为信号在12.5μg以上不再线性。上样控制GAPDH的归一化提出了一个严重的问题，因为它在裂解物的浓度低于1µg时呈线性，因此其定量用途非常有限。一般而言，我们建议不要加入超过20µg的裂解物，因为这通常会导致蛋白定量方面的问题。为了获得最佳的荧光定量Western印迹，不要忘记应用适当的归一化策略并加载适量的蛋白。Azure Imager多功能分子成像系统☑   双激光近红外成像：激发强度大、信噪比高、光泄漏少。☑   RGB可见荧光多功能检测：可进行小鼠成像、转基因植物筛选、模式生物斑马鱼成像、培养皿成像等。☑   同时4通道荧光成像，检测更高效。☑   高灵敏化学发光和彩色Marker成像。☑   彩色蛋白胶和核酸胶成像。参考文献：1. Collecting and presenting data. The Journal of Biological Chemistry.website.:http://jbcresources.asbmb.org/collecting-and-presenting-data#blot. Accessed February 4, 2019.2. Fosang AJ and Colbran RJ. Transparency Is the Key to Quality. J Biol Chem. Dec. 11 2015. 290(50). 29692–29694. PMCID: PMC4705984.

法国Stilla Technologies公司邀请美国IDT公司共同开展的网络研讨会将于2021年2月4日（周四）北京时间00：00AM进行，来自美国IDT公司资深应用工程师Erik Wendlandt博士和来自法国Stilla Technologies公司高级应用科学家Kimberley Gutierrez博士将与我们在线分享“基于naica®六色微滴芯片数字PCR系统高度多重实验设计和优化”的相关内容。主题：基于naica®六色微滴芯片数字PCR系统高度多重实验设计和优化日期：2021年2月4日（周四）时间：北京时间00：00AM内容简介：本次研讨会探讨qPCR和dPCR实验中多重靶点同时检测，以最大限度地从有限生物样本中获得更多基因信息的潜力。我们将讨论荧光染料的选择，如何避免解决二聚体，并比较单重和多重数据，以达到实验的确证。对于更具挑战性的多重等位基因突变检测，我们还将介绍IDT Affinity Plus™的核酸探针的技术优势。研讨会将重点介绍使用法国Stilla® 公司最新产品naica®六色微滴芯片式数字PCR系统进行多重数字PCR（dPCR，digital PCR）分析。naica®六色微滴芯片式数字PCR系统可以提供完整的数字PCR解决方案，具有灵活的样本通量以及高灵敏度的靶标核酸检测和绝对定量。naica®六色微滴芯片式数字PCR系统可在多达6色荧光通道中进行至少六重靶标基因定量检测，将多重数字PCR（dPC，digital PCR）检测提高到更高维度。我们还将展示更多基于naica®六色微滴芯片式数字PCR系统的液体活检检测数据。主讲人介绍：Viviane Sternkopf博士（Stilla Technologies公司应用科学家）Viviane在格赖夫斯瓦尔德大学获得分子生物学博士学位。在超过10年的时间里，她作为分子生物学领域的主题专家和客户培训师，支持不同的分子诊断产品。Erik Wendlandt博士（美国IDT公司应用工程师）Erik Wendlandt博士是美国IDT资深现场应用工程师，致力于帮助科学家设计和解决qPCR和dPCR实验的问题。注册页面：注册方式：1）关注：“深蓝云生物科技”公众号，找到对应的研讨会新闻进行注册。                       2）访问：“北京深蓝云生物科技” 网站----“新闻动态”栏目，找对应研讨会新闻注册。

ROX是一种广泛使用的惰性荧光染料，通常添加到qPCR反应液中以校正荧光信号。然而，随着荧光技术在仪器中的发展，比如在Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，为了标准化而单独使用染料的步骤已不再需要。当实时荧光定量PCR系统首次引入市场时，许多产品使用固定光源和检测系统对96孔整板进行同时成像，导致热块中每个孔的光路不同（图1）。光程差异将导致每个孔的绝对荧光测量值发生变化，这取决于它们在板上的位置。例如，具有较短光程的孔可能比具有较长光程的孔具有更高的荧光读数，从而导致两孔之间的荧光值偏差增大。因此，许多研究者开始使用参考染料（如ROX）对这种信号变化进行标准化校正。Azure Cielo™实时荧光定量PCR的光学系统由图1可知，在传统实时PCR系统的全板成像中，与角落的孔相比，中心区域的孔可以检测到更高的荧光信号。由于ROX信号不受qPCR反应的影响，只要qPCR混合液的属性保持不变，那么它在整个qPCR过程中也会保持稳定。基于这个原因以及ROX更优越的光谱特性，ROX被视为一个很好的参考染料，可用于荧光信号的归一化处理，以校准光程差引起的荧光变化。但是ROX作为参考染料的挑战在于，它占用了一个可能用于检测靶标的荧光通道。随着流感病毒和COVID-19新冠病毒（参照ANDiS SARS-CoV-2 and Influenza A/B RT-qPCR Detection Kit）等应用变得越来越普遍，多重反应也越来越常规，这也说明了多通道检测的重要性。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统采用新型的高性能光学系统，在qPCR实验中无需ROX校准。该光学系统采用16组光纤单孔扫描设计，一根光纤用于高能LED激发，另一根用于光信号检测，可16孔同时采集，确保数据采集的一致性（图2）。此外采用“全孔检测”技术，每个孔可采集大约100,000个数据点，检测时取读数的平均值，精准测定每个孔的荧光强度（图3）。这种“全孔检测”为每个采集时间点提供了比单孔扫描系统更具重现性和可靠性的数据，因为单孔扫描系统仅仅采集少量的数据点。应用实例：1、方法：配制20µl反应体系，在Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统进行10个重复孔的qPCR扩增。2、结果与讨论：结果表明，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统能很好地检测到每个qPCR扩增产物。由图4可知，10个重复孔的扩增曲线高度一致，说明所有孔检测到的信号均匀增加；计算得出Cq平均值为17.54，标准偏差低至0.02。Cq值的变异系数（CV）为0.13%，也反映了数据的高精准度。光纤检测系统与Marlow-Peltier温度模块相结合，在qPCR实验中实现了孔间信号检测的均匀性和加热温度的均匀性，并且由于每个样品都是单孔激发和扫描，因此避免了背景信号的干扰。通过10个重复反应的低标准偏差和CV值进一步证明了Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统的产品特点，即可完全消除光程差，不需要使用ROX进行均一化处理，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统仍能获得高精准度的可靠数据。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。申请试用关注“深蓝云生物科技”公众号→云活动→免费试用。