根据2020年6月新推出的第四版MIQE指南，北京深蓝云生物科技有限公司为您提供 “2020新版MIQE指南如何指导qPCR实验” 的网络直播课。MIQE是一套荧光定量PCR实验指南，提出了评估qPCR实验和国际审稿所需的最低标准。主要是以结果的可靠性为目标，帮助实验者确保科学文献的完整性，提高不同实验室之间结果的一致性，并提高实验的透明度。想了解更多关于2020新版qPCR MIQE标准的分享，快来参加深蓝云直播课堂吧！

2020年7月7日，Gene-π数字PCR学堂——数字PCR量化医学先进治疗的质控体系（成都站）在天府生命科技园成功举办。为更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术，本次训练营聚焦于第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、先进治疗质控体系的量化、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容。理论结合实践，吸引了来自医院、第三方临验中心、科研机构、分子诊断企业等机构的学员参与，会场座无虚席，受到了学员们的一致好评。为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。本期训练营为Gene-π 数字PCR学堂——数字PCR量化医学先进治疗的质控体系，由中国医药生物技术协会基因检测技术分会、成都天府生命科技园、转化医学网主办，艾普拜生物科技（苏州）有限公司、北京深蓝云生物科技有限公司承办。首先，训练营由北京深蓝云生物科技有限公司的技术专家对第三代数字PCR技术及Naica™多通道微滴数字PCR系统介绍、数字PCR系统原理、先进治疗中的Naica™数字PCR解决方案、数字PCR的结果解析、数字PCR技术的体系开发和标准物质的绝对定量、Naica™多通道微滴数字PCR系统进行了详细介绍，同时进行实操。Naica™数字PCR技术是一种高灵敏度的数字PCR解决方案，作为下一代基因检测和核酸定量技术。Naica™数字PCR系统具有独特的三色检测能力，能够在同一反应中检测多种核酸。操作简单，反应快速，2.5小时内即可获得结果，是全新的创新技术，完全区别于市场上的同类产品。Naica™数字PCR系统支持广泛的基因检测和分子生物学分析，包括用于癌症诊断的液体活检研究、病毒载量检测、产前筛查和转基因成分检测等，是精准治疗中用药组合和疗效监测的首选技术。特邀嘉宾中科院营养中心湖州申科生物技术有限公司生物制品管理专家宗伟英女士，针对生物制品中数字PCR绝对定量的重要性和Naica™数字PCR在残留DNA，RNA检测中应用分享。实验展示实验分析数字PCR(digital PCR, dPCR)技术是精确定量核酸分子的全新技术手段，采用绝对定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数，具有较高的灵敏度和特异性等特点。数字PCR在临床上的多个领域展现出良好的应用前景，比如肿瘤液体活检、器官移植损伤评估、无创产前筛查、病原微生物分子诊断以及二代测序文库质控和结果验证等，在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的指标量化。数字PCR提高低频事件的分辨能力，且具有更强的抑制剂耐受能力等优点。在转化医学、生命科学、生物科学各个方面，均有创新性的研究和应用，同时多荧光通道和可视化质控，在多种基因特异性检测的同时确保快速获得更可靠的数据，实现了生物样本有限的情况下获得更多信息，显著提高检测能力和工作效率。接下来，2020 Gene-π数字PCR学堂将陆续进入苏州、广州等城市，欢迎大家持续关注！

随着分子遗传知识的积累，DNA和RNA分子的定量变得越来越重要。人们发明了诸多方法，以便尽可能精确地量化核酸的数量。数字PCR(digital PCR, dPCR)技术是精确定量核酸分子的全新技术手段，采用绝对定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数，具有较高的灵敏度和特异性等特点。数字PCR在临床上的多个领域展现出良好的应用前景，比如肿瘤液体活检、器官移植物损伤评估、无创产前筛查、病原微生物分子诊断以及二代测序文库质控和结果验证等，在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的指标量化。数字PCR提高低频事件的分辨能力，且具有更强的抑制剂耐受能力等优点。在转化医学、生命科学、生物科学各个方面，均有创新性的研究和应用，同时多荧光通道和可视化质控，在多种基因特异性检测的同时确保快速获得更可靠的数据，实现了生物样本有限的情况下获得更多信息，显著提高检测能力和工作效率。 为更好地让广大学者了解数字PCR技术，Gene-π数字PCR训练营——数字PCR量化医学先进治疗的质控体系（成都天府站）将于2020年07月07日在成都召开。本期训练营由中国医药生物技术协会基因检测技术分会、成都天府科技园、转化医学网主办，艾普拜生物科技（苏州）有限公司、北京深蓝云生物科技有限公司承办。 聚焦于第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、先进治疗质控体系的量化、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容，训练营将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。您在PCR实验中是否遇到过质控的问题吗？如何在实验过程中设置质控要求？在本次训练营中都可以得到答案，心动了吗？心动了就赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！敲黑板了！我们的初衷是--真诚的把先进的科研技术带给大家!所以本次培训活动完全免费!!!不收取任何费用! 只要您提交了报名申请，经主办方审核通过后，您会收到报名成功确认邮件，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，只有50个参加名额，先到先得哦。赶紧报名吧！下期预告：2020 Gene-π数字PCR学堂——将陆续进入广州等城市，敬请期待！！！详情咨询方式：电话：0512-86860010，15801106547邮箱：info@cycloudbio.com

主题肿瘤液体活检中6色数字PCR多重检测Panel的应用主讲人介绍内容简介* 单次测定可定量90％以上已知EGFR突变* 可靠快速地检测出乳腺癌中常见的突变* 检测和定量直肠癌PIK3CA突变注册页面注册方式：1、扫描二维码进行注册2、点击链接进行注册：https://www.eventbrite.com/e/stilla-technologies-june-virtual-events-introducing-6-color-digital-pcr-registration-106784539432下期预告想参加下期网络研讨会的小伙伴，也请按照上面的注册方式进行注册哦！往期回顾• 第1期：数字PCR的创新 ：多重检测从少量样本中获取更多的数据

2020年4月21日，由Tara N. Guhr Lee等在《Journal of Cystic Fibrosis》期刊中发表了《Accumulation and persistence of ivacaftor in airway epithelia with prolonged treatment》的文章，文中使用Azure Sapphire对IRDye 680孵育的印迹膜扫描成像，对CFTR蛋白进行定量分析。背景：囊性纤维化（CF）的基本缺陷反映了囊性纤维化跨膜电导调节剂（CFTR）的功能丧失，囊性纤维蛋白是参与氯离子和碳酸氢盐跨细胞膜转运的质膜蛋白。CF的一个关键治疗方法是CFTR调节剂，即用于改善异常CFTR功能的药物。CFTR调节剂的当前剂量策略基于血清药代动力学，但靶组织（如气道上皮）中的药物浓度尚不清楚。先前的数据表明，CFTR调节剂可能在气道上皮中积聚，血清药代动力学可能无法准确预测慢性治疗的效果。方法：在治疗和冲洗阶段的各个时间间隔，通过质谱法测量药物浓度，在Ussings室中评估电生理功能，并通过Western印迹定量成熟的CFTR蛋白。结果：与lumacaftor或tezacaftor相比，CF-HBEs中ivacaftor的累积程度要大得多，并且在冲洗14天后仍然持续升高。CFTR活性在治疗7天达到峰值，但随着ivacaftor的进一步积累而降低，尽管冲洗后仍保持在基线以上。结论：慢性治疗期间和之后，CFTR调节剂的细胞内累积和持续存在提示气道上皮内复杂的药代动力学和药效学特性不能由血清药代动力学预测。可能需要直接测量靶组织中的药物以优化剂量策略，并且治疗停止后CFTR调节剂的持续存在对个性化药物治疗方法具有重要意义。Sapphire 双模式多光谱激光成像系统可完成NIR和RGB荧光，化学发光和磷屏成像等多种检测。无论您的实验室进行哪种成像，例如普通的Western Blot、Southern印迹、2D和2D DIGE、可视化组织或小型模式动物成像都可高质量实现。

来自美国Azure Biosystems公司的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，融合了高品质Pilter温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。北京深蓝云生物科技有限公司已经为您准备好了仪器，期待您的试用哦~既然仪器已经备好了，那么该怎样选择检测方法呢？众所周知，qPCR依托于荧光检测技术，通过使用DNA结合染料、荧光PCR引物或探针等实时监测目的基因的扩增，从而对目的基因进行定量分析。为了避免在实验时出差错，下面就跟着小编一起来看一下常用的经典方法吧~1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法•  原理：SYBR Green I 是一种DNA结合染料，其与双链DNA结合后，荧光大大增强，DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此，检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。•  特征：可逆荧光，最大吸收波长497nm，最大发射波长520nm。•  适用情况：非特异性的荧光染料，不能识别特定的双链，只要是双链（包括非特异性扩增产物、引物二聚体等）就会结合发光，在临床上使用可能会有假阳性发生。但该方法容易建立实验体系，可进行熔点分析，通用性好，价格相对较低，在科研中使用比较普遍。2 、TaqMan 探针法•  原理：检测时除了需要一对特异性引物外，还需要一条与靶序列互补配对的寡核苷酸链—TaqMan探针，其5’末端包含荧光报告基团R，3’末端为淬灭基团Q。当探针与靶序列互补配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭基团接近而淬灭。在进行延伸反应时，聚合酶的5’核酸外切酶活性将探针切断，使得荧光基团与淬灭剂分离，发射荧光。荧光信号和产物的量相匹配。•  特征：检测到的是积累荧光，随着循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。•  适用情况：特异性较强，可进行多重qPCR分析，但成本较染料法要高一些，实验构建相对复杂。常用的荧光基团推荐：FAM、VIC、HEX、CY5等。3 、分子信标(molecular beacon)•  原理：分子信标方法在检测时除了需要一对引物以外，还需要一条呈发夹结构的寡核苷酸探针（25-40nt），分子信标的 5'端附有荧光报告基团，3'端附有淬灭基团，环被设计成与靶序列互补的15–30核苷酸，其两端各有5-7个核苷酸互补形成茎结构，将报告基团与淬灭基团连接到一起。发夹结构中，由于报告基团接近淬灭基团，监测不到荧光信号，当环的部分与核酸序列互补配对，分子信标打开成链状，使得荧光基团与淬灭剂分开，发射荧光。•  特征：茎环结构，也是积累荧光。•  适用情况：高特异性、可以用于多重反应，适合区分等位基因。但不能做熔点分析；发夹的茎结合过强过弱都不合适，过强的话，信标不能与靶标正确杂交，过弱的话，会随机折叠成非发夹结构，导致产生杂信号。常用的荧光基团有FAM 、Texas Red等。4  、荧光共振能量传递(FRET)•  原理：FRET探针又称双杂交探针，由两条相邻探针组成。第一个探针3'端带有供体基团，第二个探针的5'端带有受体基团，在PCR反应的退火步骤，两条探针头尾相连地分别杂交在靶标序列上，荧光分子接近，从供体到受体产生荧光共振能量传递，受体荧光信号的增加与扩增子出现的量成比例。•  特征：由于FRET探针是靠近发光，所以检测信号是实时信号，而非积累荧光。•  适用情况：除引物外需要设计两条探针，通用性不高；需挑选合适的供体及受体基团，供体基团发射波长与受体基团的激发波长需显著重叠，而供体基团发射波长与受体基团的发射波长要明显分离。可做熔点分析，特异性较强。5 、 LUX Primers•  原理：LUX (light upon extention) 引物是通过荧光标记的引物，使引物可以实现探针的功能。其原理和分子信标类似，LUX引物也是发夹结构，其中一条引物3’端用荧光报告基团标记。在没有单链模板的情况下，该引物自身配对，形成发夹结构，使荧光淬灭。在模板存在的情况下，引物与模板配对，发夹结构打开，产生荧光信号。•  特征：积累荧光；不需要额外设计探针。•  适用情况：不能进行熔点分析，通用性比不上SYBR Green I。但不需要专门设计探针，同时不会受非特异性扩增产物和引物二聚体的影响，特异性较SYBR Green I强。【以上内容来源于网络整理，侵删】看完了上面关于经典qPCR检测方法的介绍，您是不是有想去跑一轮qPCR的冲动呢？美国Azure Biosystems公司的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。*   数据可靠性: 连续1000次实验后，结果高度一致，温控精准，性能稳定可靠。*  应用灵活性: 提供多种qPCR应用分析，定制化报告。*   流程智能化: 中英文用户界面，触控操作，可多机联用。*   交互灵活性: 主机可独立运行qPCR程序，电脑、Wi-Fi、网络交互。

数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在肿瘤个体化诊疗、肿瘤标志物、基因治疗/免疫治疗、液体活检、疫苗等生物制品研究、病毒等病原微生物检测、标准物质定值、基因编辑的检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、诊疗方案、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。数字PCR通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数，可以提供比qPCR更精准的核酸定量，无需标准品，并具有灵敏度好、精确度高、耐受抑制剂能力强等优点。该技术是目前最适合用于体液样品（如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等）中痕量核酸标记物检测的方法。多荧光通道的特异性检测且快速获得检测结果，实现了生物样本量有限的情况下获得更多信息的同时，显著提高检测能力和工作效率。为更好地让广大学者了解数字PCR技术，Gene-π数字PCR学堂——核酸绝对定量分析及应用（上海张江站）将于2020年06月30日在上海召开。本期训练营由上海市浦东新区生物产业行业协会、中国医药生物技术协会基因检测技术分会、长三角一体化基因检测联盟、转化医学网主办，艾普拜生物科技（苏州）有限公司、北京深蓝云生物科技有限公司承办。聚焦于数字PCR原理、实验操作、结果分析、质量控制以及在生物制品、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容，训练营将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。所以本次培训活动完全免费!!!不收取任何费用!只要您提交了报名申请，经主办方审核通过后，您会收到报名成功确认邮件，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，只有50个参加名额，先到先得哦。赶紧报名吧！已报名2020年2月29日的数字PCR培训班（因疫情延期至本次）的无需重复报名。下期预告：2020 Gene-π数字PCR学堂——将陆续进入成都、广州等城市，敬请期待！！！详情咨询方式：电话：0512-86860010，15801106547邮箱：info@cycloudbio.com注：活动最终解释权归北京深蓝云生物科技有限公司所有

随着全球新冠病例的增加，全球新冠病毒检测的测试能力显示出了不足，在“High-sensitivity COVID-19 group testing by digital PCR”的文章中使用RT-dPCR技术（Stilla Technologies，Apexbio Suzhou）对新冠病毒样本进行了群体检测，以此来确定混检方式的群体检测对新冠病毒的敏感性。摘要：在这项研究中，研究者使用RT-dPCR进行了混样检测，并对其敏感度进行了测试。研究者共采集了448份样本，设置了三种不同样本容量的检测方式：P8共56个混合样本、P16共28个混合样本、P32共14个混合样本（PN代表样本容量）。将P8、P16、P32进行dPCR检测并以单独样品的qPCR检测结果作为对比。研究表明，dPCR在检测混合样本的时候仍然具有良好的灵敏度。基于研究数据，研究者建立了初步的筛选方案，采用8或16个样品的样品容量进行混样检测较q-PCR相比检测更加敏感，而32个样品容量虽然在检测结果上面dPCR与qPCR的相同，但是由于P32样本数量比较少，所以还需要进行进一步确认。数字PCR（dPCR）是一种核酸分子绝对定量技术。随着越来越多的国家受到新冠病毒的影响，全球对新冠病毒检测的需求也在不断增加，数字PCR能够快速、准确的诊断出新冠病毒的携带者并且尽可能的降低假阳性。Stilla Naica™ crystal数字PCR设备平台Naica™ crystal数字PCR技术是一种高灵敏度的数字PCR解决方案，作为下一代基因检测和核酸定量技术。Naica™ crystal数字PCR系统具有独特的三色检测能力，能够在同一反应中检测多种核酸。操作简单，反应快速，2.5小时内即可获得结果，是全新的创新技术，完全区别于市场上的同类产品。Naica™ crystal数字PCR系统支持广泛的基因检测和分子生物学分析，包括用于癌症诊断的液体活检研究、病毒载量检测、产前筛查和转基因成分检测等，是精准治疗中用药组合和疗效监测的首选技术。Apexbio Suzhou 艾普拜生物科技艾普拜生物科技（苏州）有限公司是临床检测服务的一体化解决方案提供商，引进先进的硬件生产技术，开发符合临床应用的技术产品。致力于精准医疗诊断产品（诊断试剂、仪器）的研发、生产、销售和服务。公司基于先进的Naica™数字PCR平台和自主专利的检测技术，持续研发了数十种临床检测产品，操作简便、结果迅速、分析简便。公司拥有多项核心技术，已获得专利授权十余项，软件著作权多项。Stilla Technologies中国技术示范与服务中心北京深蓝云生物科技有限公司致力于为用户提供新型生命科学研究仪器和分析产品以及优化的整体应用解决方案。深蓝云生物配备着专业的技术支持和应用支持，依托国际领先的生命科学产品和解决方案，专注为用户提供分析产品和完善的售前咨询和售后服务。更多信息请关注“深蓝云生物科技”官网和微信公众号。

2020年6月3日，由Lena Landaverde等在《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊中发表了《Method for the elucidation of LAMP products captured on lateral flow strips in a point of care test for HPV 16》的文章，文中介绍了一种使用荧光染色的方法对LAMP产物进行表征，Azure Sapphire对5'-FAM标记的产物在488 nm光源下扫描成像来进行验证。摘要：环介导扩增（LAMP）是一种等温扩增技术，因其高灵敏度和在等温条件下运行的能力而在诊断工作中受到青睐，LAMP反应产生的扩增子的长度和形状各不相同，因此在双链DNA嵌入染料染色的凝胶上无法辨别。标准表征技术也无法识别哪些扩增子与LFS特异性结合，从而产生视觉读数。我们的目标是在分析开发过程中通过使用荧光素亚酰胺（FAM）和生物素标记的环正向和反向引物来标准化我们在分析开发过程中对LAMP产物的表征。将pvuII限制酶消化物应用于LAMP产物，FAM标签带与LFS视觉读数直接相关，我们将这种检测开发流程应用于质粒DNA和临床样品的HPV 16检测。文中使用Azure Sapphire对5'-FAM标记的产物在488 nm光源下扫描成像。Sapphire双模式多光谱激光成像系统Sapphire 双模式多光谱激光成像系统可完成NIR和RGB荧光，化学发光和磷屏成像等多种检测。无论您的实验室进行哪种成像，例如普通的Western Blot、Southern印迹、2D和2D DIGE、可视化组织或小型模式动物成像都可高质量实现。

生物样本量的有限性，使用有限的生物样本获取更多的数据结果，能够帮助科研学者和诊断人员获得更全面的信息，同时降低运行成本，提高工作效率。在过去的十年中，数字PCR平台的商业化引发了定量核酸检测领域的一场革命。Stilla Technologies的Naica™ 数字PCR系统，提供了一种创新的解决方案，可以进行3通道定量，同时最大程度地缩短了获得结果的时间。日前法国Stilla Technologies公司发布Naica™六通道数字PCR系统，保持原有创新特性的同时，提高检测通道和检测通量，≤3小时即可获得6通道的检测，每天可完成至少144个样本检测，实现了从少量样本中获得最多的数据结果，显著提高科学家获得的遗传学信息量，同时保持高灵敏度和精准度。兼容Sapphire高灵敏芯片和Opal高通量芯片，根据需求灵活选择。配置灵活，设计精巧，占地少节省空间。六色检测通道，减少样本用量，快速有效地获得更多样本信息。与此同时法国Stilla Technologies公司推出系列讲座，分享Naica™ 六通道数字PCR系统的功能，并介绍6色通道检测简化工作流程和多种应用案例，小编奉上时间和日程。注册地址：https://www.eventbrite.com/e/stilla-technologies-june-virtual-events-introducing-6-color-digital-pcr-registration-106784539432

生物样本量的有限性，使用有限的生物样本获取更多的数据结果，能够帮助科研学者和诊断人员获得更全面的信息，同时降低运行成本，提高工作效率。2016年，法国Stilla Technologies的Naica™微滴芯片式数字PCR系统，为核酸定量检测提供了一种创新型的解决方案，可以进行3通道定量，同时实现了极简的自动化工作流程，最短时间内获得数字PCR检测结果。未来已来，Stilla公司在6月分享月以“Naica™六通道数字PCR多重检测”为主题，举办系列在线讲座，分享6色Crystal Digital PCR多重检测技术、6通道检测方法的建立和多种应用案例。内容包含：? 6色数字PCR简化转基因GMO检测工作流程的经验分享；? 肿瘤液体活检中6色数字PCR多重检测Panel的应用；? 以及6色数字PCR在环境监测和食品检测中的应用优势。主题：数字PCR的创新 ：多重检测从少量样本中获取更多的数据主讲人介绍：Alexandra Bogoalec Koir博士，来自Slovenia国家生物研究所，正在进行转基因成分的多重定量研究及dPCR计量中可能存在的影响测量不确定度的潜在问题。同时致力于开发和评估新兴的分子生物学方法，特别是医学诊断领域的定值检测的方法学和计量学研究。Allison Mallory，分子生物学、细胞生物学和发育生物学博士，麻省理工学院博士后，任职Stilla Technologies分子生物学研发总监，她和她的团队使用Naica™ Crystal Digital PCR平台，扩展了数字PCR的检测极限，提高了数字PCR的检测灵敏度。内容简介：来自Slovenia国家生物研究所的Alexandra Bogo?alec Ko?ir将详细介绍她的团队如何利用6通道Crystal Digital PCR系统来简化耗时的GMO定量工作流程，同时分享转基因大豆低浓度样本的检测数据分析。该网络研讨会还将讨论6通道Crystal Digital PCR系统的高灵敏度检测能力在肿瘤检测中的应用优势。Stilla Technologies的Allison Mallory将分享非小细胞肺癌，结直肠癌和乳腺癌样本中的复杂性的突变检测，同时将分享6通道Crystal Digital PCR系统如何通过无创液体活检来实现有效的治疗监测和耐药性的早期检测。注册页面：注册链接：https://www.eventbrite.com/e/stilla-technologies-june-virtual-events-introducing-6-color-digital-pcr-registration-106784539432

什么是点击化学？点击化学（Click chemistry），又译为“链接化学”、“速配接合组合式化学”，是由化学家巴里·夏普莱斯（K B Sharpless）在2001年引入的一个合成概念，主旨是通过小单元的拼接，来快速可靠地完成形形色色分子的化学合成。它尤其强调开辟以碳-杂原子键（C-X-C）合成为基础的组合化学新方法，并借助这些反应（点击反应）来简单高效地获得分子多样性。点击化学的代表反应为铜催化的叠氮-炔基Husigen环加成反应（Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition）。点击化学的概念对化学合成领域有很大的贡献，在药物开发和生物医用材料等的诸多领域中，它已经成为最为有用和吸引人的合成理念之一。2020年4月23日，由Hoch DG, Abegg D, Hannich JT, et al等人在《Cell Chem Biol》期刊发表了《Combined Omics Approach Identifies Gambogic Acid and Related Xanthones as Covalent Inhibitors of the Serine Palmitoyltransferase Complex》的文章，文中使用Azure Sapphire对CY5标记的叠氮化合物-炔基点击化学反应的SDS-PAGE胶进行成像，为寻找治疗靶点提供可行性证据。摘要：在这项研究中，研究者将天然产物藤黄酸以及与结构相关的合成氧杂蒽酮确定为鞘脂生物合成的同类共价抑制剂。应用化学蛋白质组学来确定藤黄酸与丝氨酸棕榈酰转移酶复合物（SPTSSB）可调节小亚基B结合。这项研究表明，SPTSSB可能成为具有病理性S1P信号传导相关疾病的可行治疗靶标。此外，研究者相信其合成的化合物将成为研究鞘脂代谢非常有价值的工具。文中使用Sapphire对CY5标记的叠氮化合物-炔基的点击化学的SDS-PAGE胶进行成像。

Stilla与Cambridge Healthtech Institute合作的网络研讨会将于5月21日北京时间凌晨1:20进行，来自Stilla的全球应用专家Romain博士将与我们在线分享“高灵敏度Crystal Digital PCR™法检测试剂盒用于SARS-CoV-2 检测”的相关内容。时间：北京时间5.21日1:20AM主题：高灵敏度Crystal Digital PCR™ 法检测试剂盒用于SARS-CoV-2检测主讲人：罗曼（Romain）在巴黎第六大学获得了神经免疫学博士学位，他通过对微解剖的神经胶质细胞进行基因表达分析来确定炎症因子在帕金森病小鼠模型中的作用。在领导了欧洲、中东和非洲的Bio-Rad基因组学项目之后，Romain加入了我们的团队，成为Stilla Technologies的国际应用专家。内容简介：当前用于COVID-19诊断的金标准是使用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测SARS-CoV-2核酸。最近的研究表明RT-qPCR在SARS-CoV-2检测中的局限性，可能导致假阴性结果。因此，开发可靠而灵敏的实验室检测至关重要。Naica™数字PCR系统可以为核酸的绝对定量提供非常高的灵敏度和精度。基于中国早期成功的概念验证，Stilla正在Naica™数字PCR系统上开发SARS-CoV-2检测试剂盒：高度灵敏且含内部质控的SARS-CoV-2 3-plex。它可以同时检测SARS-CoV-2正链RNA基因组的N基因和ORF1ab基因，并以人类看家基因为内部参照，确保了实验的有效性。凭借较高的灵敏度，Crystal Digital PCR结合SARS-CoV-2检测试剂盒可作为对RT-qPCR中高Ct值样本检测的理想选择。注册页面：注册地址：https://www.covid-19webinars.com/Diagnostics-FDA-Authorization?utm_source=stilla&utm_medium=social

Stilla Technologies的创新型Naica™数字PCR系统解决方案与即用型Covid-19检测试剂相结合，能够快速，准确和可靠地鉴定出SARS-CoV-2病毒及其病毒载量。目前，Naica™系统主要用于科研，计划将其应用范围扩大到诊断。2020年5月5日，巴黎——法国领先的高精准基因检测解决方案提供商Stilla Technologies，携SARS-CoV-2病毒-Naica™数字PCR系统解决方案，参与全球抗击Covid-19，可靠地检测出SARS-CoV-2病毒的同时获得病毒载量。目前，SARS-CoV-2检测方法是实时荧光定量——逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行SARS-CoV-2病毒核酸检测。然而，这项技术可能在患者轻度感染、采样样本量少等情况下无法可靠地检测出低载量的病毒。在这些情况下，使用RT-PCR检测病毒难度很大，这也是某些Covid-19患者的SARS-CoV-2核酸检测结果呈阴性的原因。Stilla基于数字PCR（dPCR）的高灵敏核酸检测解决方案更准确、更灵敏的方法，将可能有助于减少上述情况的发生几率，降低核酸检测呈现假阴性结果的风险。Stilla Technologies联合创始人兼首席执行官Rémi Dangla说。“我们非常荣幸能参与到Covid-19的战斗。我们与中国合作伙伴艾普拜生物（Apexbio）的紧密合作，使用Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统快速开发出一种数字PCR检测Covid-19的解决方案。该解决方案于2月由艾普拜生物（Apexbio）在中国推出，3月中旬由Stilla在欧洲推出。”自Covid-19爆发以来，中国多家重点机构（中国国家疾病预防控制中心等）使用了Stilla Technologies开发的解决方案，成功地对上千份RT-PCR检测灰区的患者样本进行了SARS-CoV-2的复检。“Naica™数字PCR易于使用，具有较高的灵敏度和可靠性。中国湖南省疾控中心的用户说：“我们在3月初安装了一套Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统，并将其用于COVID-19检测。”“我们拥有一套Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统，目前将其用于COVID-19研究，以帮助战胜病毒感染。”病毒学研究所的用户说。多年来，Stilla Technologies通过于中国合作伙伴艾普拜生物（ApexBio）/深蓝云生物科技（Cycloud）和投资者启迪公司与中国建立了良好的关系，从而快速推出Naica™系统检测SARS-CoV-2解决方案成为可能。自3月底以来，Stilla Technologies还在法国多家医院测试其解决方案，包括巴黎的H?pital Europenéen Georges Pompidou（HEGP）微生物学系。H?pital Européen（HEGP）微生物学系的Hélène Père博士说：“Naica™ dPCR在灵敏度和可靠的病毒载量测量方面明显优于常规RT-PCR技术，这可能是有助于对COVID-19进行病毒学探索。”这些研究合作证实， Stilla Technologies的Naica™数字PCR系统解决方案与即用型Covid-19检测试剂，较RT-PCR检测更准确、可靠地检测Covid-19并获得病毒载量。数字PCR更高的灵敏度，提供了排除RT-PCR检测结果中可能存在的假阴性的有效方法。关于Naica™微滴芯片式数字PCR系统Naica™自动化微滴芯片数字PCR技术（Crystal Digital™ PCR）是一种高度灵敏的数字PCR核酸绝对定量解决方案，是新一代基因检测和核酸绝对定量的技术。Naica™自动化微滴芯片数字PCR系统具有三色检测能力，能够进行多重检测，和不同类型的核酸样本。操作简单，获得结果快速，2.5小时即可完成检测。这项创新专利技术与市场上的其他数字PCR系统完全不同。Naica™自动化微滴芯片数字PCR系统支持遗传检测和分子生物学检测，包括肿瘤的液体活检、病毒载量定量检测、产前筛查和转基因成分检测。Naica™自动化微滴芯片数字PCR系统的卓越性能使其成为精准医学研究和治疗监测的首选技术。关于Stilla公司Stilla Technologies成立于2013年，是一家总部位于巴黎的欧洲创新型生命科学公司，专注于通过提供革新式的灵活数字PCR (dPCR)解决方案(Naica™自动化微滴芯片数字PCR系统)，利用尖端的微流控技术，以推动新一代基因检测的发展。Stilla的目标是使dPCR成为生命科学所有领域的实验室核酸检测工具。Stilla通过其充满活力的多学科研发团队，从微流控、化学，到分子生物学和人工智能，为全球客户提供积极的建议和支持。www.stillatechnologies.com

文章转自：Edinburgh CRF Genetics Core数字PCR（dPCR）是一种终点PCR方法，为核酸的绝对定量和稀有等位基因检测提供了一种替代传统实时qPCR的方法。该方法在反应成分（引物和标记探针检测序列特异性靶标）和随后的扩增方面与qPCR相似，但在测量样本靶点的方式上有所不同。在dPCR中，核酸样品混合物被分为许多单独的PCR反应（液滴或孔，见上图）。然后进行单个反应的扩增，每个孔或微滴对于目标分子将为正（1）或负（0）。确定阳性反应与阴性反应的数目，并对生成样品中目标分子数目的绝对计数。dPCR是一种特别有用的方法，可用于检测癌症和疾病中的稀有等位基因，准确检测小型CNV以及稀有mRNA和miRNA的基因表达分析。它也可以用于NGS文库定量以及病原体检测和微生物组分析。dPCR最近还被多家公司广泛用于检测COVID-19。艾普拜生物（ApexBio）还开发了一种与Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统兼容的3色荧光通道数字PCR试剂盒，该试剂盒可检测SARS-CoV-2正链RNA基因组的两个不同区域，并同时使用检测人类看家基因的内部参考来监控PCR的有效性。在爱丁堡大学临床研究所基因组学中心，我们最近从Stilla Technologies公司获得了Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统，该系统是一个高灵敏度的数字PCR平台。在Naica™全自动微滴芯片数字PCR系统中，数字PCR已集成到单个耗材sapphire芯片中。每个端口中的样本（每个芯片4个样本）被划分为一个2D阵列。使用Naica Geode通过限制梯度，可生成出30,000个大小均一的微滴。我们有2台这样的仪器，因此可以一次运行多达24个样品。微滴生成后，立即在芯片上对每个微滴进行热循环。最后，使用Prism3仪器和Crystal Reader软件使用三个不同的荧光通道扫描芯片。这允许对每个样本的三个不同靶标进行多路复用。最后，Crystal Miner软件自动测量每个通道中目标核酸的浓度，数据完全可视化。

2020年4月29日，由Wioletta Rut, Mikolaj Zmudzinski等人在bioRxiv期刊发表了《Activity profiling of SARS-CoV-2-PLpro protease provides structural framework for anti-COVID-19 drug design》的文章，文中使用Sappphire对B-Ub-VME标记SARS-CoV和SARS-CoV-2-PLpro蛋白进行扫描成像，并使用Azure spot软件进行数据分析。文章摘要病毒蛋白样半胱氨酸蛋白酶(PLpro, NSP3)是SARS-CoV-2抗病毒药物研发的一个潜在靶点，有助于药物研发，在这里,我们使用含有天然和多种非蛋白质的组合底物文库，并对SARS-CoV-2-PLpro进行了全面的活性分析。我们发现SARS-CoV-2-PLpro的P2位点对Gly具有高度特异性，P3位点表现出很高的非特异性，P4位点优先显示结合具有疏水性的氨基酸侧链。我们还证明了SARS-CoV-2-PLpro具有去泛素化活性，底物结合特征曲线和去泛素化活性高度相关。在定位扫描的基础上，我们设计了最佳的荧光基质和不可逆抑制剂，研究SARS PLpro变体对其他蛋白酶的选择性。总之，这项工作揭示了控制PLpro底物特异性的分子规则，并为开发具有潜在治疗价值的药物提供了框架。文中使用Sappphire对B-Ub-VME标记SARS-CoV和SARS-CoV-2-PLpro蛋白进行扫描成像，并使用Azure Spot软件进行数据分析。

2020年COVID-19新冠肺炎疫情大爆发以来，已然演变为一场全球性的事件，随着疫情的发展，我们对病毒也愈发了解。对新发病毒或病原菌没有形成免疫力以及新冠病毒起病的隐匿性、不确定的潜伏期、轻症及无症状感染者的传播风险、病毒的变异性都为疫情的治疗和防控带来难度。为了更好的了解最新的传染病、新冠肺炎等的研究趋势和解决方案。2020年5月7-8日（美东时间）将在线上举行为期两天的关于聚焦免疫学、传染病和新冠肺炎的全球生命科学会议展览，通过直观的聊天方式与全球的生命科学、制药和学术界的顶尖行业科学家针对新冠病毒研究以及传染病研究方面的最新进展等进行交流，诚邀您的参加。会议期间Stilla Technologies公司和Azure Biosystems公司也将聚焦产品进行交流互动，针对新冠病毒检测以及其他传染病进行最新技术的分享，同时Stilla Technologies应用专家Kimberley Gutierrez博士将分享有关Crystal 数字PCR平台的高灵敏度SARS-CoV-2检测试剂盒。SARS-CoV-2检测试剂盒高特异性，高灵敏度且全封闭过程确保安全性，通过一步法反转录-数字PCR-探针方法，只需加入RNA模板，即可实现高特异性、高灵敏度、全封闭地新冠病毒RNA定性检测和绝对定量。在一个样本管中同时检测新冠病毒的开放读码框1ab（ORF1ab）、核壳蛋白（N）基因区域和人内源质控基因。赶紧点击链接注册报名吧：https://conference.lsevirtualevents.com/en/registration时 间2020年5月7-8日（美东时间）会议日程

你想从Western Blot小白进阶到实验高手吗？想了解最先进的数字PCR绝对定量技术吗？想了解新冠病毒数字PCR检测方案吗？想知道不一样的正倒置一体荧光显微镜吗？想了解实时荧光定量PCR原理与分析方法吗？你想知道的问题都在深蓝云直播课堂。有些朋友说因时间关系，没能赶上直播讲座，没关系， 小编为您双手奉上精彩的直播视频分享~还有 “打卡送书活动”福利哦，打卡满10天即可送书，每一关都有您关注的重点，学到知识的同时还有精美小礼品赠送, 每天学习一点点！关注“深蓝云生物科技”公众号，选择 “云学院——直播课堂”即可观看直播视频回放和参加打卡送书活动！

上期小编为大家介绍了以单一看家蛋白作为定量Western Blot内参蛋白的分析方法，这次咱不得不说说以全蛋白为内参的分析方法。期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot数据要求中指出，对于半定量蛋白表达的实验，最佳的内参为全蛋白内参，如果以看家蛋白为内参，需要提供其在实验处理中表达量恒定的实验证明。全蛋白作为内参的优势在于:1、目标蛋白的相对丰度为目标蛋白强度与全蛋白强度比，不再依赖于单一蛋白强度值。2、敏感性好。3、线性范围宽。4、蛋白可视化。5、更适用于低丰度表达蛋白。如果考虑使用全蛋白作为内参，之前只有两种方法，一是使用考染胶，平行跑两块胶，问题在于很难保证重复性；二是使用丽春红染料进行印迹膜染色，问题在于稳定差，很难实现全蛋白定量，随着荧光蛋白染色技术的问世，全蛋白定量问题得以顺利解决。AzureRed全蛋白染色进行归一化“总蛋白归一化”或TPN变得越来越流行，可以避免依赖看家蛋白进行归一化的许多缺点。在该方法中，将目标蛋白的灰度值与加载在泳道中的总蛋白的灰度值进行比较。TPN比使用单一蛋白作为归一化更具有优势，例如不易受样品之间蛋白变化的影响，不是观察一种蛋白的强度，而是测量每条泳道的灰度值。由于TPN技术消除了许多与信号归一化相关的问题，因此发表文章越来越多地要求使用总蛋白信号进行归一化。AzureRed荧光蛋白染色是一种用于凝胶和印迹膜的定量总蛋白染色试剂，与下游蛋白分析兼容，包括Western Blot。AzureRed是染色应用的理想选择，包括转印后染色以确认从凝胶到膜的蛋白质转移情况，以及定量蛋白。AzureRed总蛋白和三个靶标蛋白同时成像向凝胶中加入稀释的HeLa细胞裂解物。转印后，将印迹用AzureRed染色，然后在不脱色情况下加入Tubulin，?-actin和GAPDH探针。 用Sapphire 双模式多光谱激光成像系统扫描成像。四个通道进行叠加，总蛋白质（AzureRed染色）以灰色显示;Tubulin-红色，?-actin-蓝色和GAPDH-绿色。AzureRed荧光蛋白染色是荧光Western Blot定量的理想选择。宽广的线性动态范围确保AzureRed成为解决蛋白上样变化的有效标准。AzureRed的一个关键特性是将其融入现有Western Blot工作流程的简单性。AzureRed染料可与常用荧光探针同时检测，无干扰，允许在一张印迹膜上检测多种蛋白质。使用AzureRed可以进行多色印迹的总蛋白归一化，不需要剥离和重孵育，可以在一张印迹膜上定量多种蛋白。 该方法快速，可以与感兴趣蛋白一同成像。有关AzureRed荧光蛋白染色的更多详细信息，请访问如下链接：www.azurebiosystems.com。与常见的看家蛋白相比，AzureRed具有更宽的线性动态范围单色通道图像A）AureRed染色总蛋白B）Tubulin C）β-action和D）GAPDH。AzureRed信号的优异动态范围与实际加载的蛋白量显示在图像（A）中。使用AzureSpot软件定量来自总蛋白和看家蛋白的信号，并将得到的值相对于每个样品加载的蛋白量（E）作图。与常见的看家蛋白相比，AzureRed表现出更强的相关性和更广泛的动态范围。Sapphire配合AzureRed总蛋白荧光染色剂可以做总蛋白归一化和定量三个靶标蛋白，生成可以信赖的定量Western Blot数据。Azure300带有Q模块，可激发AzureRed等染料进行全蛋白定量，最后化学发光条带和总蛋白条带同时在一张膜上成像，满足Nature，JBC等期刊杂志的总蛋白定量要求，帮助用户发表文章。专业的AzureSpot分析软件可做AzureRed总蛋白的型号：SapphireNIR-Q，SapphireRGB，SapphireRGBNIR；Azure300Q，Azure400，Azure500Q，Azure600

作为一个每天需要做“PCR”实验的你，听说这是你的真实写照？给在实验室的你一份表情包，戳进来对号入座！平时在实验室最常听到的一句话就是“今天实验没做好是为什么？今天实验没出结果是什么原因？今天实验为什么会是这样的呢？”做实验的日子虽然辛苦，但是依然是每天虐我千百遍，我待实验如初恋！实验没做好的伤心沮丧 ↓：没出结果的疑惑不解 ↓：结果不好时的加油打气 ↓：结果不错时对自己的鼓励 ↓：实验结果好时的开心大笑 ↓：小编为大家双手奉上来自Azure的qPCR宝宝的实验室日常表情包，欢迎下载使用哦。来啊，斗图啊，在微信端，搜索“qPCR萌萌哒”下载表情包哦！

对于做分子生物学实验的科研人员来说，引物探针是一个无比熟悉的词语。不管是普通的PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）还是灵敏度及精准度更高的数字PCR（dPCR），高质量的引物和探针都是实验成功的关键。然而想要获得优秀的引物探针，得到一个好的实验结果也并非那么容易。好的实验结果千篇一律，不好的实验结果各不相同，可能一不小心就有了非特异性产物或者扩增不出产物等等。从实验小白到大神，不断地学习和摸索是少不了的。针对不同的PCR在引物和探针设计上又有哪些不同呢？如何评估设计的引物和探针的质量呢？为了让您少走弯路，深蓝云直播间与您在线交流如何获得更优的qPCR、dPCR引物及探针，为您的实验助一份力！

定量western blot 一定要有内参质控（上）Western Blot是生物修炼的一大实验，现在不做定量Western Blot，都不敢自诩学霸的了，暗暗擦汗的有没有？在讨论如何从Western Blot中获得定量数据之前，先定义一下我们所说的“定量”是什么意思是非常有用的，何为定量，必须符合下列准则：. 使用一个定义的过程进行检测，即Western Blot。. 这个过程产生一个可重复的结果，即是精确度。. 测量反映了一个“真实”的结果，即是准确度。定量Western Blot除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，是一定要检测内参的，也就是内部参照（Internal Control），目的是校正蛋白质转印和上样过程中导致的实验误差，保证实验结果的准确性。对于哺乳动物细胞表达来说，内参通常指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用其作为参照物。在发表文章时，Western Blot实验结果需内参进行校正，但仍有一些科研人员在实验中忽略内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范是比较各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限性，例如BCA方法对还原性试剂兼容性差，Bradford方法对去垢剂兼容性差，A280方法影响因素比较多，不能完全准确的确定各种样品的蛋白浓度。在Western Blot实验时使用内参，即可简便地对转印和上样步骤产生的误差进行校正。谁能看出这是“GAPDH”那么如何实现Western Blot实验中内参的检测呢？简单讲就是在WB过程中，除加入靶标蛋白的抗体外，也加入内参蛋白的抗体，同时实现靶标蛋白和内参蛋白的检测。通过归一化，可以校正上样误差和转印误差，从而获得比较准确的Western Blot结果。使用荧光方法进行定量Western Blot检测，可进行多重检测，荧光信号稳定，持久，影响因素少，不用剥离膜和剪膜，实验条件一致，更容易获得定量Western Blot的数据。Azure600可以同时进行4通道荧光成像，无需剥离和重孵育，靶标蛋白和内参蛋白同时在一张印迹膜上成像，更容易被期刊杂志接收。如果蛋白表达是高丰度的，可见荧光方法也可以尝试，如果是3色RGB可见荧光，能够同时检测两种靶标蛋白和一个内参蛋白。小编列出了常见蛋白质内参，供参考哈：想了解更多关于内参选择的小伙伴敬请期待下期精彩内容。

What is 21 CFR Part 11?21 CFR Part 11是指《联邦法规21章》第11款，主要内容涉及电子记录和电子签名。实际应用常以符合FDA 21 CFR Part 11 方式表达，此法规确保了电子数据的有效性和可靠性。食品、医药制造行业多遵照此标准。那么Azure Imager如何符合21 CFR Part 11？不同用户进入界面设置界面：可进行图片输出设置，染料添加设置等。增加新用户及设置用户权限，密码复杂性，不活动锁屏等设置。日志查看和打印Azure Imager和Azure Sapphire都有符合21 CFR Part 11的软件哦，有需要的可以通过以下方式进行订购。订购信息

第三代PCR技术即数字PCR（digtal PCR）技术，可以实现对起始样品核酸的绝对定量。在反应体系中加入荧光染料的同时将反应体系进行分区，实现单分子模板扩增，最后通过阳性反应器数直接读出目标序列的拷贝数，可以对低拷贝基因进行检测，弥补了荧光PCR的不足。因其出色的灵敏度和精确度，数字PCR在检测微量核酸样本，稀有突变，拷贝数变异，复杂样品检测等方面均有广泛的应用前景。如果您想了解更多有关数字PCR的知识，快来参加深蓝云数字PCR知识打卡吧! 每一关都有您关注的重点，学到知识的同时还有精美小礼品赠送哦。赶紧报名参加吧，扫描下方二维码或点击阅读原文即可报名。数字PCR课堂为了方便大家更好的学习数字PCR技术，由法国Stilla Technologies公司开发的Gene-π数字PCR学堂为您全方位解读数字PCR技术，可以实现从新手到专家的进阶，适用于所有对数字PCR技术感兴趣的科学家。该平台为用户提供最新的数字PCR技术信息，使用户能够学习数字PCR技术的基本知识。详细信息可登陆网站或扫描二维码查看。除了数字PCR，还有Western Blot解决方案打卡送书供大家学习，请登录深蓝云生物网站，尽快报名参加吧。

您是否有过长时间观察显微镜而眼睛酸涩？您是否有过为观察玻片和培养皿而在两台显微镜之间奔波？您是否有过为观察传统显微镜繁冗操作而愁苦？不必说明场全视野观察，高清晰显示，极简化操作；也不必说荧光模块自动转换，多通道荧光叠加，图像辅助编辑；单是正倒置一体式观察，就备受科研工作者的青睐。尊重传统，勇于创新，来自ECHO公司的显微镜REVOLVE采用IPAD替代传统目镜，释放您的双眼；明场/荧光双相机双光源，提高观察效果；APP软件控制，简化显微操作；给您带来不一样的观察体验！大家知道显微观察中，正置显微镜更适合于玻片观察、油镜观察；倒置显微镜则更适合于培养皿/培养瓶观察、孔板观察，不仅如此，往往还需要明场与荧光观察。因此，一台显微镜满足以上所有需要，就显得弥足珍贵。直播课

你想知道现在期刊杂志对WB数据提交的要求吗？想知道荧光Western与化学发光的不同吗？想知道如何进行数据质控吗？想知道用什么内参最合理吗？想知道定量WB如何做吗？想知道WB常见问题如何解决吗？你想知道的问题都在这里，快来参加深蓝云知识打卡，每一关都有您关注的重点，既能得到WB应用指南，还有小礼品赠送哦。赶紧报名参加吧，扫描下方二维码或点击阅读原文即可报名。

做蛋白研究的小伙伴都知道，一个完整的Western Blot包括了很多个步骤，从蛋白提取到配胶、上样电泳，再到转膜、封闭，最后孵育一抗二抗后才能去进行检测。时间跨度非常长，而且这中间的每一步都包含了很多的小细节，稍有不慎就会导致结果出错，然后又得从头来过。所以，关于WB，几乎每一位经验丰富的实验老手都有着一本厚厚的血泪史。今天，小编就带领大家简要梳理一遍WB流程中的一些细节，避免因某一环节出现差错而导致实验重做。一：样品的获取与制备一般来说我们检测的样品主要为细胞或者是组织，制备过程中尽量保持低温。其次在制备时一定要根据目的蛋白的特性选择合适的裂解液，比如对膜蛋白的提取、胞浆蛋白的提取和组织蛋白的提取等。二：配胶、上样及蛋白电泳配置凝胶时一定要将胶板清洗干净，用ddH2O或者无水乙醇润洗。晾干后根据蛋白分子量进行不同浓度凝胶配制。上样时需对蛋白进行煮沸变性，如果进行定量分析一定要将所有蛋白上样量调至相同。电泳时低压（80V）跑浓缩胶，高压（120v）跑分离胶，至溴酚蓝即将跑出胶面时终止电泳。三：转膜及封闭转膜时需提前配置好转膜液并低温放置。关于印迹膜来说，目前大多实验室用的是PVDF膜，根据目的蛋白大小选择合适的孔径，大于20KDa的蛋白选用0.45μm的膜，小于20KDa的蛋白选用0.2μm的膜。PVDF膜在使用时需用甲醇处理活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。转膜时一定要注意膜和凝胶的正反问题，除此之外一定要注意凝胶和转印膜间不要留有气泡。封闭液可选择5%的BSA或5%的脱脂奶粉，可以室温封闭1-2h或者4℃过夜封闭。封闭时一定要注意对磷酸化的抗体或生物素标记的抗体不能用脱脂奶粉封闭膜，只能用5%BSA。四：抗体的孵育和检测一抗二抗的选择一定要注意种属来源问题，如果这一步出错那前面的努力就相当于白费了。检测方法可以选择灵敏度超高的化学发光方法或者现在比较流行的荧光WB法。相较于传统的化学发光方法，荧光WB能够实现更精准的定量，还可以进行多重检测，只需要将不同的目的蛋白标记上不同的荧光就可以了。基于目前各大期刊杂志对WB发表的要求，全蛋白定量是一种新的趋势，荧光WB同样可以实现全蛋白归一化。Azure600多功能分子成像如何帮助您获得定量WB数据• Azure600可同时在一张印迹膜上进行4通道荧光成像 ，同时也具有高灵敏化学发光检测功能，灵敏度可达fg级。• Azure600近红外采用激光光源，激发强度大，单色性好，减少光泄漏，在更短的时间内达到更好的信噪比，Western Blot精准定量的金标准。• Azure600配合AzureRed总蛋白荧光染色剂可以做总蛋白归一化和定量三个靶标蛋白，生成可以信赖的定量Western Blot数据。• Azure600标配9.1MP的高分辨CCD，动态范围可达4.8OD，保证结果的准确性。• Azure600可做彩色Marker与化学发光条带的自动整合，分子量查看更直观。• Azure600提供原始数据16bit的tiff图给到期刊，这里的tiff原始数据是指未经裁剪，像素修改，对比度调整等任何操作的图，保证结果的真实性和可靠性。Azure600除了进行荧光印迹膜，化学发光印迹膜检测外，还可以进行普通凝胶成像，EMSA检测，菌落筛选，小动物成像，植物成像等。注：更多分享可扫描下方二维码回看直播

当前，新冠肺炎疫情已在全球流行，确诊人数已超80万人，核酸检测人数已超千万。不管是中国新冠诊疗指南还是世卫组织发布的文件，核酸检测仍然是新冠病毒确诊的金标准。由于是一项新的检测, 在开展核酸检测过程中研究人员遇到了各种各样的问题。比如，如何保证核酸检测结果的准确性？目前最灵敏的新冠病毒检测方法是什么？新冠检测的流程和阳性判读标准是什么？你想知道的，都在深蓝云直播间。本次深蓝云直播课堂，我们邀请到了艾普拜生物科技（苏州）有限公司的应用专家，届时将会为大家带来基于三荧光通道NaicaTM微滴芯片式数字PCR系统的新冠病毒检测流程和结果判读的相关知识。

全球范围内，生物药，尤其是抗体类药物，经过多年的基础研究和技术积累，已经开始迸发其生命力，成为药物领域中最有活力和前景的一个分支。在全球范围已经获批上市的抗体类抗体药至少有80多个，在新冠肺炎抗体药研发中， 现在现已确立了7个抗冠状病毒靶点，同时也是药物筛选靶点。包括：(1) 病毒配体Spike蛋白；(2) 病毒受体ACE2蛋白；(3) 毒蛋白酶PLpro(papain-like protease)；(4) Mpro(3C-like protease或main protease）；(5) 介导病毒RNA帽子的甲基化修饰的nsp16；(6) 毒转录复制相关的RdRp(RNA-dependent RNA polymerase)；(7) 和潜在的病毒用于干扰宿主免疫的X domain蛋白。另外新发现一个靶点丝氨酸蛋白酶TMPRSS2(Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP))。新冠肺炎的靶点与抗癌药比较相对较少。抗体药的研发策略药物靶点筛选中需要在基因水平、转录水平和蛋白水平上进行检测Sapphire的分辨率可达10μm 、分辨率更高、可进行DNA、蛋白阵列等扫描成像、面积可达25X25cm可进行多张芯片的扫描。Sapphire可进行多重荧光定量Western Blot检测定量Western Blot是RNAi干扰技术研究中必不可少的检测方法。使用定量Western Blot可以：• 确定靶基因的敲低水平。• 确定靶基因敲低对表型的影响，例如细胞增殖，细胞迁移，细胞周期或细胞信号通路。* Sapphire能够同时检测四种蛋白，大大提高了Western Blot的效率。* 荧光信号稳定，影响因素少，定量精准。* 大平台，可同时进行多张印迹膜的检测。抗体药药效评价抗体药在进行药效评价时，主要进行细胞凋亡，细胞增殖，毒性等等分析。In Cell Western（ICW）分析是在微孔板中进行的定量免疫荧光分析（可进行96或384孔），结合了Western印迹的特异性和ELISA的可重复性和通量。抗体药生产和质控-HCP ELISA抗体覆盖率的检测疫苗、抗体、重组蛋白药物等生物制品的生产主要利用某些细胞诸如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，大肠杆菌等，这些细胞称为宿主细胞，在纯化工艺中会有宿主细胞分泌至培养基中的蛋白质或死亡破碎细胞结构蛋白残留在生物制品中，HCP ELISA的存在的风险：* ELISA酶标板包被的抗体结合量低，会限制HCP检出限。* 不是所有HCPs都可以作为抗原产生抗体，因此会有“漏检”，所以需要评估HCP ELISA抗体的覆盖率（Coverage）。HCP ELISA抗体覆盖率的评估方法一般会采用双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）和蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）技术结合的办法或者2D DIGE的方法。Saphire扫描面积大，多达四激光光源，分辨率可在10μm-1000μm可调，通过Sapphire对2D胶进行扫描，灵敏度高，图像质量好，软件操作步骤少，实验人员上手操作快。

做蛋白研究的小伙伴都知道，一个完整的Western Blot包括了很多个步骤，从蛋白提取到配胶、上样电泳，再到转膜、封闭，最后孵育一抗二抗后才能进行检测。时间跨度非常长，而且这中间的每一步都包含了很多的小细节，稍有不慎就会导致结果出错，然后又得从头来过。所以，关于WB，几乎每一经验丰富的实验老手都有着一本厚厚的血泪史。