2022/02/21 10:07
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方案摘要:
产品配置单:
上海仪电分析-L9 双光束紫外可见分光光度计(UV-VIS)
型号: L9
产地: 上海
品牌: 仪电分析
¥4.32万
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方案详情:
【仪电分析】茶叶中茶多酚的检测-分光光度法
茶多酚(Tea Polyphenols)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用。本实验参考国家标准GB/T 8313-2018《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》,适用于茶及茶制品中儿茶素类和茶多酚含量的测定。
一、方法原理
茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取,福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色,最大吸收波长 λ为765nm,用没食子酸作校正标准定量茶多酚。
二、主要仪器及试剂
a. 紫外分光光度计:L9;
b. 分析天平;
c. 水浴锅;
d. 离心机;
e. 甲醇;
f. 碳酸钠;
g. 甲醇水溶液(体积比):7+3;
h. 福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂;
i. 10%福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂(现配):将20mL福林酚(Folin-Ciocalteu)试挤(h)转移到200mL容量瓶中,用水定容并摇匀。
j. 7.5% Na2CO3(质量浓度):称取37.50g±0.01g Na2CO3,加适量水溶解,转移至500mL容量瓶中,定容至刻度,摇匀(室温下可保存1个月)。
k. 没食子酸储备溶液(1000μg/mL):称取0.110g±0.001g没食子酸(GA),相对分子量188.14),于100mL容量瓶中溶解并定容至刻度,摇匀(现配)。
l. 没食子酸工作液:用移液管分别移取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL的没食子酸标准储备溶液于100mL容量瓶中,分别用水定容至刻度,摇匀,浓度分别为10、20、30、,40、50μg/mL。
三、实验方法
3.1供试液的制备
称取0.2g(精确到0.0001g)均匀磨碎的式样于10mL离心管中,加入在70℃中预热过的70%甲醇溶液5mL,用玻璃棒充分搅拌均匀湿润,立即移入70℃水浴中,浸提10min(隔5min搅拌一次),浸提后冷却至室温,转入离心机在3500r/min转速下离心10min,将上清液转移至10mL容量瓶。残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次,重复以上操作。合并提取液定容至10mL,摇匀。
移取上述溶液1.0mL于100mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,待测。
3.2 测定
用移液管分别移取没食子酸工作液、水(用作空白对照)及测试液各1.0mL于刻度管内,在每个试管内分别加入5.0mL的福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂,摇匀,反应3min~8min内,加入4.0mL7.5% Na2CO3溶液,加水定容至刻度、摇匀。室温下放置60min。用10nm比色皿、在765nm波长下用分光光度计测定吸光度(A)。
根据没食子酸工作液的吸光度(A)与各工作液的没食子酸浓度,制作标准曲线。
四、实验结果
4.1计算公式
比较试样和标准工作液的吸光度,按下式计算:
茶多酚%=
式中:
A—样品测试吸光度;
V—样品提取液体积,10mL;
d—稀释因子(通常为1mL稀释成100mL,则其稀释因子为100);
SLOPEstd—没食子酸标准曲线的斜率;
m—样品干物质的含量,%;
A—样品测试吸光度;
m1—样品质量,单位为克(g)。
4.2 注意事项
样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内,若样品吸光度高于50μg/mL浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度,则应重新配制高浓度没食子酸标准工作液进行校准。
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