可以通过循序渐进地模仿关键的发育事件，被有效地诱导成不同类型的细胞，从而有巨大的潜力用于研究发育生物学、疾病模型和细胞替代疗法。尽管在过去的十年中，研究人员已经付出了很大的努力，但是还没有在体外获得完全成熟的细胞类型，这大大阻碍了这些hPSC衍生细胞的进一步应用。为了在体外能够从hPSCs获得成熟的细胞类型，有两个主要的问题仍然需要解决。首先，因为目前用于hPSC分化的最好程序，通常是以一种循序渐进的方式进行的，所以，每一个阶段（尤其是早期阶段）诱导过程中的偏差，都将会积累并可能被逐步显著放大。以前对于hPSCs定向分化为胰腺β细胞的研究表明，胰岛素（INS）生产细胞在后期的产量，对于最初两个阶段的TGF-β信号的强度和时间都很敏感。此外，每一步产生的细胞实际上是异质的。意外的细胞-细胞间相互作用和多余细胞所分泌的因子，将会掩盖所需的信号，并误导分化过程。因此，为了优化诱导条件，并由此为整个逐步分化过程的精确控制做好准备，制定某种策略让我们可以监测整个分化过程的动力学和纯化理想的细胞群，将具有很大的帮助。第二，当前hPSC分化程序的建立，在很大程度上依赖于发育学知识，主要从非人类实验模型（特别是小鼠）推论得出。在胰腺的情况中，两个物种对于胰腺发育过程中关键调节因子（如GATA6）的需求有所不同，表明发育机制可能存在较大差异。此外，即使在小鼠模型中，胰腺β细胞的发育过程还存在一些知识差距，导致缺乏定向分化的足够发育线索。因此，很有必要开发适当的工具，让体外衍生的细胞群在每个阶段进行分离，以进行仔细评估，从而揭示发育的不太为人了解的方面。总的来说，为了解决上述问题，如果有一种系统策略可监测、纯化和分析每一阶段的hPSC衍生中间细胞，将是非常可取的。此前有研究表明，遗传标记，尤其是谱系特异性转录因子，可以用于hPSCs发育和分化的研究。然而，一定程度上因为传统基因打靶技术的效率较低，这类研究主要集中在分化过程，不能为整个连续过程的研究提供一种系统的解决方案。近年来，基因打靶策略所取得的突破，使我们能够高效地进行某些细胞谱系的系统基因标记。在这项研究中，研究人员借助于转录激活因子样效应物核酸酶（TALEN），系统地标记了胰腺发育过程中的次序基因，首次覆盖了来自hESCs的胰腺β细胞的主要发育阶段。因而产生了一大组报告细胞系（reporter cell lines）；其中几个细胞是在NGN3-eGFP细胞系基础上建立的双报告细胞系。利用这种独特的平台，研究人员成功地实时可视化整个分化过程的动力学，使我们能够识别并因此分离每个分化阶段的中间细胞群，用于进一步分析。研究人员使用双报告hESC细胞系，捕获了细胞命运转变的过程，揭开了多个细胞亚群的基因表达谱。研究通过RNA测序，进一步分析了hPSC衍生的NGN3-eGFP+细胞，并将sushi domain-containing 2（SUSD2）确定为一种新型的表面蛋白，在hESC衍生的胰细胞和发育的人胰腺中，胰腺内分泌祖细胞和早期内分泌细胞都富含这种蛋白。这个平台和这些新的研究结果，将为体外从hESCs获得成熟的β细胞，铺平道路。

RNA酶抑制剂具有广谱的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白质通过非共价键与RNA酶以1：1的比例结合发挥它的抑制作用。RNA酶抑制剂与RNA酶结合的有效浓度时10-14M。而且，RNA酶抑制剂的动力学结合是非常迅速的，确保与RNA酶的迅速络合，并对其产生迅速的抑制作用。常见的RNA酶抑制剂1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂，他通过和RNA酶的活性基因团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。2、异硫氰酸胍：目前认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活，它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。3、氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形式过渡类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。4、RNA酶的蛋白质抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胚盘中提取得来的酸性糖蛋白.Rnasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。5、其他：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定的抑制作用。索莱宝RNA酶抑制剂产品是从人胎盘中提取的一种广谱的核糖核酸酶抑制剂，分子量约50KDa。它在分子生物学的实验中有着十分 广泛的应用。例如：RT-PCR，cDNA合成中mRNA的保护，体外转录和体外翻译，制备RNase-free的抗体，原位杂交和mRNA定位等，它是一个在任何应用中对付潜在RNase污染的十分有用处的试剂。CRIPTO 畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体(C端)CDKN2B 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B抗体CRIPTO 畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体CHFR 泛素连接酶蛋白CHFR抗体Cullin 1 Cullin1抗体Cofilin 肌动蛋白结合蛋白CFL抗体CDMP1 软骨衍生形态发生蛋白1抗体Beta-casein β-酪蛋白抗体c21orf63 21号染色体开放阅读框63抗体C4orf52 4号染色体开放阅读框52抗体C4orf40 4号染色体开放阅读框40抗体Cullin 3 Cullin3抗体CDC40 细胞分裂周期同源蛋白40抗体CCDC106 卷曲螺旋结构域蛋白106抗体CHMP1A 染色质修饰蛋白1A抗体CPN10 叶绿体伴侣蛋白抗体（苹果） 

研究人员们发现了破伤风神经毒素进入神经细胞的机制，阻断这一过程能够治疗破伤风。可以将这一通路开发成新型的药物递送系统，更好的治疗神经性疾病，比如运动神经元疾病和周围神经病变。破伤风是破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的疾病，死亡率较高。尽管存在有效的破伤风疫苗，但人们还没有开发出靶向性的治疗方法，也不清楚毒素是如何进入神经系统的。研究人员通过小鼠研究发现，覆盖在细胞表面的巢蛋白（nidogen），是破伤风神经毒素进入神经系统的关键。破伤风的神经毒素粘附在神经细胞表面的巢蛋白上，“穿梭”进入这些神经细胞，然后在那里扩散毒害整个神经系统。巢蛋白是一种细胞外基质蛋白，参与了多种蛋白互作，维护着许多组织的完整性，神经系统就是其中之一。“巢蛋白覆盖在神经细胞周围，吸引破伤风神经毒素在那里聚集，”研究人员说。“运动神经元末端被高水平的巢蛋白包围，因此破伤风神经毒素在那里大量聚集，结果是低量的毒素也会产生很强的毒性。”研究人员指出，人们也可以向破伤风毒素那样利用巢蛋白，将药物送入神经系统。这有点类似于病毒疗法（virotherapy），病毒疗法是一个新兴领域，主要是用修饰过的病毒将药物运送到目的地。 “治疗神经性疾病是很有挑战性的，如果能有效将药物送入神经元，那么就成功了一半，”领导这项研究的人员说。“现在我们希望模拟破伤风神经毒素的进入机制，把治疗性的药物送入运动神经元。”这项研究有助于人们进一步理解天然配体和有害物质进入神经系统的途径。研究显示，神经元周围的基质在这一过程中起到了至关重要的作用。人们可以在此基础上开发新的药物递送策略，让药物浓缩在正确的区域（运动神经元），获得低量高效的效果，减少药物的副作用。

最近一项研究表明，肠道内的微生物彼此之间可以倾听与交谈。这些微生物交流所使用的一种小分子，可改变肠道中某种细菌的数量，并恢复长期抗生素治疗造成的巨大损害。在这项研究中，研究人员发现，一种称为自诱导剂2（AI-2）的化学信号——细菌用其来进行相互交流，能促进接受抗生素治疗的小鼠肠道微生物平衡。这一研究结果为“利用细菌化学语言来促进健康肠道微生物群落”的治疗策略，奠定了基础。抗生素使用和饮食因素可以改变肠道微生物的组成，强烈减少细菌的多样性，通过增加宿主对有害菌（如沙门氏菌）的敏感性，对人类健康构成严重威胁。特别是，拟杆菌和厚壁菌——哺乳动物肠道中的两个主要门类——之间的平衡变化，与肥胖、糖尿病、慢性肠道炎症性疾病和胃肠道癌相关。通过操纵天然信号和其成员之间的相互作用，驱动这一菌群从疾病状态向健康状态转化的能力，为治疗效益提供了巨大的潜力。为了验证这个想法，研究人员专注于一个小的扩散性分子（称为AI-2）——可促进整个细菌王国的种间沟通。一个菌种产生的AI-2可以影响另一个菌种的基因表达，从而使整个菌群能够同步调整行为（如毒力和生物膜的形成）。这些特点使得AI-2成为哺乳动物肠道中介导细胞间相互作用的一个出色候选者，肠道中有数百种细菌共存和互动。为了操纵小鼠肠道中的AI-2水平，研究人员制备了大肠杆菌突变体，该突变体不能从环境中吸收AI-2。当这种突变被引入抗生素治疗小鼠的胃肠道中时，会造成肠道AI-2水平增加，改变肠道微生物的组成，以有利于厚壁菌的扩张，这种菌已经几乎被抗生素消除。研究人员表示：“这些受体可以作为新的药物作用靶点，来改变细菌间的交流。这种控制细菌的策略，可能是避免‘细菌对今天使用的抗生素产生耐药性’这个日益严重问题的一个很好选择。”

1. 器材：剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器（1ml、10ml，25ml）附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶（200ml）或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。2. 试剂：生理盐水（或PBS），弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA） Sigma F-5881，弗氏不完全佐剂（Freund’s incomplete adjuvant, FIA） Sigma F-5506，二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN33. 兔子的选择：兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。4. Pre-bleeding：抗原注射以前需要收集一些正常血清，已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。免疫用的抗原必须纯化，否则影响抗体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA，以后都用FIA。免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点注射（不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好）。每次免疫的抗原量约100μg。免疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。免疫一周后，可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫血。最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：a.家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤；b.沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌（小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血）c.用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织；d.于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住；e.用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口（勿剪断），插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱；f.松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。5. 血清的分离：如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集，37oC烘箱放置2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上离心，10000RCF，10分钟。在血清中加入 NaN3 至终浓度0.02%，分装后-20oC保存。 

        对一种关键细菌蛋白结构的解析揭开了细菌智取抗生素的生物化学秘密.研究人员们发表了他们的一系列多重药物耐受实验的结果,药物耐受性是指细菌可以休眠和忍受抗生素,之后还能苏醒并继续侵害寄主的现象.致病性细菌引发的多种疾病常常是顽固性的,这些致病菌（例如大肠杆菌、铜绿假单胞菌和结核分枝杆菌等）的药物耐受性是造成细菌性疾病反复发作的一个原因. 杜克大学生物化学系的主席Richard G. Brennan教授是本项研究的通讯作者,他说：“为何百万分之一的细菌能变成顽固性疾病反复发作的一个原因,我们还没有完全理解,当细菌变得顽固时,药物就很难有效地根除这些感染.        多重药物耐受性并不同于我们常说的多重药物抗药性 Brennan解释说：“多重药物抗药性,是指细菌通过一系列的机制,使自身变成能够抵抗越来越高浓度抗生素的菌株；而多重药物耐受性是指由于细菌是顽固性的,因此药物不能发挥作用.这种持留菌只是简单地躲避大多数药物,当环境安全时,它们又重新出来、重新感染,但是它们本身并没有发生变异.” 研究者们接下来的要做的就是继续他们的结构和生物化学研究,更进一步了解HipA蛋白在细胞中的多种靶标,以及这种持留性是如何蔓延至整个细胞的.最终我们或许可以找到一个具有高度针对性的药物疗法. Brennan说：“我们最终能找到如何抑制蛋白来关闭细菌或至少是这些类型细菌的多重抗药耐受性的方法. Schumacher和Brennan认为,该项目是解释为何基础科学对改善临床治疗和开发新疗法具有重要意义的极好例子.Brennan说：“这一研究是很好的,因为它向大家展示了：我们目前所做的基础研究对于深入了解下游疾病和开发新疗法等一系列工作具有非常广泛的影响.”       多重药物耐受性根源于一种蛋白激酶分子——HipA,它能使一些细菌细胞进入休眠状态.最终,这些占细菌总量百万分之一的“持留菌”苏醒过来,继续生长并开始新一轮的感染过程.本项研究的领导者、杜克大学的生物化学教授Maria A. Schumacher博士说：“对于它们来说,这是一种非常聪明的做法,也是它们能如此顽固地感染寄主的一个深层原因.”       通过分析HipA介导系统的结构和生物化学组分,该小组能够弄清这一蛋白的作用原理.研究小组成员之一的Schumacher是一名资深的结构生物学家,他利用X-射线晶体照像术获得了HipA原子水平的三维结构.对HipA结构的解析有助于我们更好地理解为何一种简单的修饰影响了HipA的活性.         Schumacher说：“这种简单的修饰过程名为磷酸化,它影响了调控细菌顽固性特征的其它蛋白的活性.然而,HipA过度的磷酸化可能导致细胞发生不利事件,所以HipA会通过一个异常的自我磷酸化来关闭自身表达,这将导致修饰区域完全紊乱.确切地说,这种蛋白的内部结构会暴露在外面.据我们所知,还从来没有人看到过任何蛋白以这种形式出现,HipA的作用机制是非常不同寻常的,从结构生物学的角度来看,这是一个非常激动人心的发现. Apelin 脂肪炎症因子Apelin抗体ATP4B 氢钾ATP酶通道蛋白抗体ATP5A ATP5A抗体Arg3.1 即刻早期基因ARC抗体ARF6 ADP核糖基化因子6抗体Aromatase 芳香化酶抗体Artemin Artemin抗体ADRA1A alpha 1肾上腺素能受体A抗体Angiotensin II Type 1 Receptor 血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体ATF3 活化转录因子3抗体APJ Receptor 血管紧缩素样蛋白1抗体APG7 自噬相关蛋白7抗体ANTXR2 炭疽毒素受体2抗体ATG4C 自噬相关蛋白4C抗体APG5L 自噬蛋白5/细胞凋亡的特异性蛋白抗体ARSA 芳基硫酸酯酶A抗体ACA11 拟南芥ACA11抗体AHA3 AHA3抗体（拟南芥） 

     一个科研小组最近发现，用两种化学物质能诱导老鼠胚胎干细胞发育成新的神经细胞。专家认为，如果这一方法在人体试验中获得成功，将有望解决人体受损神经组织再生这一医疗难题。       胚胎干细胞是一种“原初细胞”，它能够分化成肌细胞、血细胞、神经细胞等不同细胞，进而发育成各种器官。这种分化功能使胚胎干细胞具备了巨大的医疗应用潜力。胚胎干细胞要在分化因素的作用下，才能分化成特定的细胞。科学家过去只在细胞核层次上观察到了影响胚胎干细胞分化方向的因素，比如某些酸成分作用于老鼠胚胎干细胞核，可以使其干细胞变成造血细胞、骨细胞等。法国国家健康与医学研究所科学家在最新一期《欧洲神经科学》杂志上报告说，他们最近发现了胚胎干细胞中能与外来物质结合、影响分化方向的蛋白质受体。这是科学家首次在蛋白质层次上观察到与干细胞分化有关的因素。实验还表明，两种分别名为VIP和PACAP的肽能够与胚胎干细胞中的蛋白质受体结合，促使干细胞发育成神经细胞。       此前的研究已证实，这两种肽主要存在于人脑中，可以促进小脑的形成和发育，早期的胚胎含有这两种物质。法国科学家将这两种肽作用于老鼠胚胎干细胞中的G蛋白质受体后，发现这两种肽的含量越高，胚胎干细胞分化出的神经细胞就越多，这些神经细胞最后发展成了神经组织。专家由此认定，在蛋白质层次上，VIP和PACAP肽是影响胚胎干细胞分化为神经细胞的因素，G蛋白质受体是干细胞中负责接收这两种肽的起诱导作用的受体。专家指出，有关研究还需要进一步深入，以确定能否更有针对性地利用特定的肽，来诱导胚胎干细胞形成特定的神经细胞。 human secretory IgA 人分泌型免疫球蛋白AICA1 胰岛细胞自身抗原1抗体Islet 2 胰岛素基因增强结合蛋白2抗体IL-16 白介素-16抗体AIF1 离子钙接头蛋白抗体IRX4 Iroquois同源蛋白4抗体IFRD1 干扰素相关发育调节蛋白1抗体（神经生长因子诱导蛋白PC4）ILP2 抑制细胞凋亡样蛋白2抗体IFITM1 干扰素诱导跨膜蛋白1抗体IFI44 干扰素诱导蛋白44抗体ITPR3 5-三磷酸肌醇受体3抗体IFNW1 干扰素omega 1蛋白抗体IFNA7 干扰素alpha 7蛋白抗体IFN-Beta 干扰素β抗体ID1 DNA结合抑制因子1抗体IFI-202 γ干扰素诱导蛋白202抗体intestinal FABP/IFABP/FABP2 肠型脂肪酸结合蛋白抗体ING1 生长抑制因子基因1抗体 

目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样，常使用斑点杂交、Northern blot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。实验的关键在于制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物（提取的mRNA样品或细胞/组织标本）。核酸探针是指一段用放射性同位素或其他标记物（如生物素、地高辛等）标记并与ELISA试剂盒目的基因互补的DNA单链DNA、RNA。根据其来源可分为cDNA探针、寡核核苷酸探针、基因组基因探针及DNA探针等。其中cDNA探针和人工合成寡核苷酸探针常用于斑点杂交及Northern blot，而RNA探针因穿透性好更适用于原位杂交。核酸探针技术的应用已经程序化，近年来出现的RT-PCR检测特异性mRNA的方法也广泛用于细胞因子研究领域。该法具有灵敏、快速等优点，甚至从1～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA。上述三种方法，各有优缺点，可互相弥补，在实际应用中，可根据各自的实验目的和实验室条件进行选择。生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能，是ELISA试剂盒最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定的只代表相应细胞因子的量而不代表活性，同时敏感度也低于生物活性检测法（约低10～100倍）。分子生物学法只能检测基因表达情况，不能直接提供有关因子的浓度及活性等资料，主要用于机制探讨。在检测细胞因子时，必须考虑到细胞因子的作用具有网络性的特点，人们需明确检测方法所测定的细胞因子成分，并考虑其抑制剂和可溶性受体的水平，将各种结合使用，有可能得到较为可靠的结果。 DAT1 神经细胞特异性转录因子DAT1抗体DOK3 对接蛋白3抗体DCUN1D2 DCN1样蛋白2抗体DNAJB6 热休克蛋白J2抗体Dyrk1B 双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1B抗体DGKE 二酰基甘油激酶5抗体DNA PKcs DNA依赖蛋白激酶催化亚基抗体DUX4 双同源框蛋白4抗体DAZ1 无精症缺失基因1抗体Phospho-CHK2 (ser516) 磷酸化细胞周期检测点激酶2抗体Kv2.1 钾通道蛋白DRK1抗体DRG1 GTP发育调控结合蛋白1抗体DAL1 细胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗体DRAK2 DAP凋亡诱导蛋白激酶2抗体DAB2 信号转导功能磷蛋白DAB2抗体DACH1 细胞命运决定因子DACH1抗体DAB2IP Dab2相互作用蛋白抗体DECR1 线粒体2,4-双烯酰辅酶A还原酶1抗体DCTN3 动力蛋白激活蛋白亚基3抗体DCTN6 动力蛋白激活蛋白6抗体DIO2 脱碘酶2抗体

中国科学院微生物研究所方荣祥研究组联合中国农科院和福建农林大学的科学家发表了他们对植物病毒介体昆虫的卵传机制的研究结果。　　植物病毒大都由介体昆虫传播，该传播过程并非简单地携带和制造侵染伤口，而是具有一定的特异性，即某种病毒只能由某种或某几种昆虫传播，而某种昆虫只能传播某种或某几种病毒。根据昆虫传播的特点又将传播分为持久性传播和非持久性传播等。因此，介体昆虫在获毒和传毒过程中涉及多种互作机制。　　水稻条纹叶枯病毒引起的水稻条纹叶枯病对水稻生产造成严重的危害。该病毒由灰飞虱传播，病毒可在灰飞虱体内生存，繁殖并能经过昆虫卵传播至后代昆虫体内。霍岩等对该病毒的卵传机制进行了深入的研究，结果发现，病毒巧妙地利用昆虫的卵黄蛋白原受体进入昆虫卵巢生殖区的滋养细胞中，再通过连接滋养细胞和卵母细胞的滋养丝进入到昆虫的卵母细胞中，最终侵染后代昆虫。其它可卵传植物病毒可能具有类似的卵传途径。EFR3A EFR3A蛋白抗体ENAH ENAH蛋白抗体ETHE1 乙基丙二酸脑病蛋白抗体E2F3 转录因子E2F-3抗体E2F5 转录因子E2F-5抗体ERCC1 DNA切除修复蛋白1抗体E2F6 转录因子E2F6抗体EAAT2 胶质细胞谷氨酸运载蛋白2抗体EAAT3 胶质细胞谷氨酸运载蛋白3抗体ECE2 内皮素转化酶2抗体ECP 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白抗体EGFL7 类表皮生长因子域7抗体alpha Elastin α弹性蛋白抗体Yellow fever virus envelope glycoprotein E 黄热病毒包膜糖蛋白抗体ErbB 2 HER2受体抗体E2F4 转录因子E2F-4抗体Phospho-EGFR 磷酸化表皮生长因子受体抗体Phospho-EGFR 磷酸化表皮生长因子受体抗体Phospho-EGFR 磷酸化表皮生长因子受体抗体Phospho-Ezrin 磷酸化埃兹蛋白抗体Phospho-Ezrin 磷酸化埃兹蛋白抗体

 创造一个良好的工作环境，处在一个融洽和谐的氛围中，工作情绪高涨。工作人员应具备一个良好的思惟素质，由于我们的服务对象是人，我们的道德水平直接关系到人们的健康和生命安危，假如随随便便。良好的心理素质就是要勇于面临工作糊口中的困难，在繁忙工作中，有条不紊，冷静沉着的处理有关事务。实验室职员收到标本后应当认真查对，对不符合要求的标本和申请单要拘收，合格标本要及时分离血清，避免溶血，提取血清时不应混有大量纤维蛋白或细胞成分。再就是建立完善的质量保证体系，以书面的形式发给没位成员以及临床科室，做到人人认识人人正视影响实验结果的因素，并在操纵过程中时刻留意，将质控贯串到整个实验过程，包括待检者的预备、标本的采集与处理、操纵过程、检修结果的审核、结果的登记与保留、讲演单的发放等一系列的轨制，用轨制管人，明确责任，错误的结果仍是能够避免发生的。实验室职员的素质主要包括五个方面：思惟素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。    酶联免疫是目前检修科常用的免疫学检测方法之一，其操纵简朴，无须特殊设备，使其在各级病院都有应用。三心二意，难免会有差错事故发生，我们应该热爱专业，耐心细致。在工作中如标本搅浑、张冠李戴、讲演单发错等都有可能造成严峻后果；其次文化素质和技术素质，我们要纯熟把握本专业的基本理论和基本技术，当真学习新理论新知识，努力进步自己的业务水平，创造一个能够胜任本职工作的技术平台。从冰箱掏出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，并充分混匀再用。但是，假如忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性，因此，了解影响实验的因素，减少差错事故的发生是极其必要的。对不能及时检测的标本要妥善保留于4℃冰箱，做好原始记实，标本管上最好标上待检者姓名、日期。操作过程的影响因素（一） 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。（二） 正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。（三）手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。（四）要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。（五）显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。ELISA试剂盒的影响因素应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。

本试剂盒仅供研究使用。检测范围：       96T20μmol/L-480μmol/L 使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中游离脂肪酸（FFA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛游离脂肪酸（FFA）水平。用纯化的牛游离脂肪酸（FFA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入游离脂肪酸（FFA），再与HRP标记的游离脂肪酸（FFA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的游离脂肪酸（FFA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛游离脂肪酸（FFA）浓度。牛游离脂肪酸（FFA）酶elisa试剂盒使用说明书标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.         标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800μmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400μmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200μmol/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100μmol/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50μmol/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液  2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  4.         配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.         温育：操作同3。8.         洗涤：操作同5。9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结： 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月

ELISA试剂盒认为，传统治疗方法缺乏针对性的特性导致难以根治恶性肿瘤。“传统方法对所有的肿瘤细胞都同等对待，虽能杀死大量肿瘤细胞，却不能彻底清除肿瘤干细胞，残余的少量肿瘤干细胞又会形成新的肿瘤导致复发。"黄教授表示，在这个理论基础上，如果开发出新的方法能够有针对性地杀死肿瘤干细胞，那么治疗肿瘤也是可以实现的。elisa试剂盒知道癌症到底是怎么形成的呢？人类有什么方法可以抗癌吗？癌症发生的根源在于基因突变。基因突变会导致细胞蛋白质的变化，进而引起细胞功能表型发生异常转化，最终癌变。这些癌变的细胞的生长分化失控，形成不正常的器官和组织，即我们常说的肿瘤。原癌基因的过度激活、ELISA试剂盒控制肿瘤发生的抑癌基因失活、病毒原癌基因整合到基因组都会导致肿瘤。    恶性肿瘤容易复发转移，难以根治。传统的治疗方法不仅会杀死正常的体细胞、损伤身体而且难以彻底清除肿瘤细胞。残余的肿瘤细胞会导致恶性肿瘤的复发和转移。近10年发展起来的肿瘤干细胞理论为进一步治疗肿瘤甚至最终战胜肿瘤提供了可能性。肿瘤干细胞理论在更深层次上揭示了肿瘤细胞增殖和扩散的机理，因此，建立在肿瘤干细胞理论基础上的治疗方法比传统的治疗方法具有更高的针对性和有效性。理论研究的突破又促进应用技术的创新，针对肿瘤干细胞研究化学药物或蛋白抗体药物为根除癌症带来希望。黄教授表示，他和团队在深入研究癌症机理的基础上，取得了癌症治疗技术和药物方面的一系列创新成果。这些创新技术在癌症的预防和治疗方面均获得显著成效。Cyclooxygenase 2 环氧合酶2/前列腺素内过氧化物合成酶2抗体CD2AP 白细胞分化抗原抗体CD2AP抗体CD3E CD3/CD3-ε 抗体CHI3L1 软骨糖蛋白39抗体CEA 癌胚抗原抗体抗体CEAcam8 癌胚抗原抗体相关细胞粘附分子8抗体CNPase C型钠尿肽抗体Cathepsin K 组织蛋白酶K抗体

 酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种高敏感性、高特异性检测技术。ELISpot试剂盒能够在单细胞水平检测细胞因子的实时分泌情况。产品质量可达到国际知名公司同类产品标准，性价比高，到货周期短，技术支持及时到位。ELISpot检测主要应用于：疫苗研究开发；临床疾病的诊断、病因查找、治疗等；人体免疫学功能、肿瘤和自身免疫性疫病等的研究。本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗 氟喹诺酮抗原。检测时，加入尺度品或样品溶液，氟喹诺酮抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的氟喹诺酮竞争性地与氟喹诺酮抗体结合后，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色；加入反应终止液，在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的氟喹诺酮浓度与吸收光强度成反比。BMP9 骨形态发生蛋白9抗体Beta tubulin cofactor D 微管蛋白β辅助因子D抗体BTR1 钙粘蛋白相关蛋白受体BTR1抗体Bub3 有丝分裂蛋白BUB3抗体BHLHB9/p60TRP p60TRP蛋白抗体BLMH 博莱霉素水解酶抗体Aggrecan 短蛋白聚糖抗体BTBD3 BTB/POZ结构域蛋白3抗体BBS12 巴尔得-别德尔综合征相关蛋白12抗体BZW1 碱性亮氨酸拉链蛋白BZW1抗体BMPR1B 骨形态发生蛋白受体1B抗体BNIP1 Bcl2相互作用蛋白1抗体（转化相关基因8蛋白）BMP5 骨形态发生蛋白5抗体BMP15 骨形态发生蛋白15抗体Bcl2L2 Bcl-2样蛋白2抗体BPI 杀菌/通透性增强蛋白抗体Bcl-2 Bcl-2抗体BRN4 脑转录因子4蛋白抗体Bile salt-activated lipase 胆盐激活脂肪酶抗体

一、分子图谱的构建 分子图谱为植物基因克隆，QTL的鉴别和定位、种质资源鉴定、物种进化等研究提供了有利的研究手段。主要包括以下步骤：根据遗传材料之间的多态性确定亲本组合，建立作图群体；群体中不同植株或品系的标记基因型分析；标记间的连锁关系。二、品种、品系鉴定和杂交种纯度分析指纹图谱是鉴别品种、品系的有利工具，具有快速、准确等优点。在市场经济的条件下，指纹图谱在检测良种质量（真伪、纯度），防止伪劣种子流入市场，保护名、优、特种质及育成品种的知识产权和育种家的权益等方面均有重要意义。在国外，指纹图谱用来鉴定作物品种的DUS（Distinctness，Unformity， Stability），为品种审定、保存、保护提供依据。指纹图谱要求：分辨率高，多态性强；重复性好，稳定可靠。亲缘关系分析可为品种、品系的鉴定提供指导，从中选出能区别大多数品种的标记。Weising（1992）发现微卫星DNA（GATA）4是一个多态性好，稳定性强的探针，用该探针可以检测出15个栽培番茄品种差异。三、亲缘关系分析DNA标记所检测的是作物基因组DNA水平的差异，因而非常稳定，在分子图谱帮助下对品种之间的比较可覆盖基因组，大大提高了结果的可靠性。可用于品种资源的鉴定与保存，研究作物的起源与发展进化，杂交亲本的选择等。利用分子标记可以确定亲本之间的遗传差异和亲缘关系，从而确定亲本间遗传距离，指导杂交育种亲本选配，减少杂交组合数，有效划分杂种优势群，为提高育种效率提供依据。通过亲缘关系分析，可以纠正形态分类中一些不恰当的结论以及目前育种工作中存在的一些问题。孟祥栋通过对洋葱、胡葱、大葱的RAPD遗传分析，否定了“胡葱亲缘关系与大葱相近”的观点，而发现胡葱与洋葱亲缘关系较近，并推断胡葱可能是洋葱与大葱杂交后代逐渐进化而来的。张海英通过RAPD分析，发现生产上推广品种由于长期的定向遗传改良，遗传基础已非常狭窄，指出了目前黄瓜育种存在的问题。四、基因标记及标记辅助育种（Marker-assisted Selection，MAS）许多性状重要农艺性状表现为质量遗传特点，如抗病、抗虫、雄性不育、自交不亲和性等。质量性状虽然受少数主基因控制，但其中的许多性状仍受遗传背景、微效基因及环境因素影响，表现为数量性状特点。此外，某些病害的发病条件很难创造，某些病害为检疫对象，不允许引进，多种病害接种时可能产生拮抗作用，所有这些都给表型选择造成了困难。利用与目标性状紧密连锁的分子标记，是进行质量性状选择的有效途径。标记目标性状的方法主要有两个：（一）Young等人提出近等基因系法（Near-isogenic Lines，NILs）它是通过杂交及多代回交或自交分离而获得的（一般6-8代），除了目标基因外，控制其它性状的位点同轮回亲本（RP）基本一致，该系与原来的轮回亲本就构成了一对近等基因系。检测NIL与RP分子标记多态性的机会取决于回交供体亲本DP和轮回亲本RP的遗传距离，以及NILs中来自供体亲本染色体片段的大小。一般来讲，若DP和RP分属栽培种和野生种，检测到多态性的机率较大，转移的供体亲本的染色体片段较大，则越易检测到多态性分子标记。但回交转移的染色体片段过大则容易导致标记与目标基因连锁程度的降低，以致于出现“假阳性”。NILs的获得需要很长的时间, 至少要回交6代以上。而且会导致一些重要基因的丢失而限制了它的应用。

在最近我们和很多的医科大学和医院实验室的合作中发现许多生物实验室存在严重的污染问题，而其中又以废液废品的处理为最，ELISA试剂盒大部分实验室在进行生物实验过程中产生的大量高浓度含有害微生物的培养液、培养基，未经适当的灭菌处理而直接外排，而且许多实验室的下水道与附近居民的下水道相通，污染物通过下水道形成交叉污染，最后流入河中或者渗入地下，时间长了将造成不可估量的危害。ELISA试剂盒比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的试验，需先将板置于标准96孔的座架中，才可进行比色。最好在加底物液显色前，先将软板边缘剪净，这样，此板就可完全平妥坐入座架中。比色时应先以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记录本次试验的试剂状况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度，然后进行计算。ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中产品水平。用纯化的其抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入本产品，再与HRP标记的其抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中产品的浓度。

ELISA试剂盒实验基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。 我公司提醒广大实验家们在操作步骤过程中的几个必知项目有： 1. 温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。2. 将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 3. 洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。4. 洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温6作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。5. ELISA试剂盒实验中，液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 6. ELISA试剂盒曲线问题：  （1）OD值不正常 （2）白板 （3）无梯度 （4）线性不好 

 从样品中分离提纯同种试剂盒，是许多下游应用的关键一步，分离得到的细胞可以用于基因鉴定、大鼠小鼠ELISA试剂盒计数、生化分析、蛋白分离、宿主-病原体互作以及细胞间相互作用等研究。    一款合适的分离试剂盒可以说是实验成功的保障，因为只有获得正确的ELISA试剂盒，下游的分析结果才可能准确。目前，市面上有多种多样的分离试剂盒可供选择，它们的主要区别在于分离方法和筛选标志。那么，如何选择最适合自己的细胞分离试剂盒呢？希望本文能为你提供一些帮助。正向选择VS负向选择    试剂盒分离试剂盒的工作原理主要有两种，ELISA试剂盒正向选择和负向选择。正向选择的试剂盒直接结合的抗体来进行捕获。这种抗体通常与磁珠相连，可以利用磁铁将悬液中的抗体-磁珠-复合物提取出来，再通过二抗将磁珠与目标分开。负向选择的试剂盒也采用类似的抗体包被磁珠，不过这种试剂盒是通过去除样品中的非目的，来间接捕获目的。    这两种细胞分离试剂盒如何取舍，主要取决于目标细胞的表面是否具有特异性强的筛选标志。这样的筛选标志能够实现特异性的捕获，避免所获得的细胞被非目标细胞污染。如果你的目标细胞刚好具有这样的筛选标志，那么正向选择的细胞分离试剂盒就是最佳选择。但如果目标细胞并不具有特异性强的筛选标志，那我们最好还是选用负向选择的细胞分离试剂盒。筛选标志的确定    通过PubMed等数据库中的文献，我们一般可以确定在目标上表达的筛选标志。如果文献中找不到适合自己的表面标志，我们还可以用目标的DNA序列进行BLAST搜索。BLAST搜索结果会显示，目标细胞上可能表达的表面标志，在此基础上可以选取用于捕获的细胞表面蛋白。举例来说，对一个T进行BLAST搜索，结果会显示该是否表达CD4或CD8。在得知目标表达CD4之后，我们可以先对样品进行一个免疫实验（如ELISA），以检验BLAST搜索的结果。一旦证实目标的确表达CD4，我们就可以用相应试剂盒来筛选CD4阳性的T细胞。一般流程    对于一个旨在分离CD4阳性T的试剂盒来说小鼠ELISA试剂盒，操作流程主要有以下几步。首先，将样品与anti-CD4抗体包被的磁珠共同孵育，使抗体与CD4+ T结合。然后洗去不需要的非目标（即不表达CD4的），留下磁珠-抗体-复合物。ELISA试剂盒将上述复合物与能结合anti-CD4抗体的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗体-二抗复合物。我们可以用磁铁去除这种磁珠-抗体-二抗复合物，而所有的CD4+细胞留在上清中。最后，只需将上清转移就可以进行下游研究了。

科学家们利用试管婴儿中被遗弃的胚胎来产生正常的干细胞系，在胚胎发育到5—6天后，科学家们就能从中收集到一团特殊的细胞———内细胞团。然后在培养皿中经过培养，这些内细胞团能发育成胚胎干细胞系，在合适的条件下这些胚胎可以再生成新的干细胞，也可以分化成心脏细胞、肝脏细胞、脑细胞等不同的细胞类型。在这种干细胞形成的过程中科学家面临的最大问题是，已形成的干细胞系可能发生变异，必须不断合成新的干细胞系。而克隆干细胞的过程比获取正常胚胎干细胞更加复杂，难度也更大。科学家一般从皮肤细胞等成人细胞中提取DNA，然后将提取的DNA注入事先移去DNA的卵细胞中，于是卵细胞开始像正常胚胎那样分裂，经过一段时间的发育，内细胞团形成，再利用内细胞团培养出干细胞。科学家们已经成功地利用克隆的老鼠胚胎获得干细胞，但在人类实验中并没有获得成功。与自然受精的胚胎不同，克隆胚胎很难存活一个星期即5—6天左右，而只有活这么长时间的胚胎才能形成干细胞所需的内细胞团。了解克隆过程后，我们就会知道并不是每个卵细胞都能成功地克隆出干细胞，因此存在一个成功率的问题，而科学家们所追求的就是利用最少的卵细胞克隆出最多的干细胞系，这样的克隆效率也就最高。黄禹锡曾在论文中说，他克隆的干细胞系只用了427个卵子，但是后来的调查证实，卵子的消耗数量高达2221个。现在科学家们还不知道，成功克隆一个干细胞系到底需要多少个卵子。成人细胞中的核被移植到卵细胞后，卵细胞中某些未知的因子能将核中的生物钟回调，使它回到胚胎状态，但科学家们对这一调控过程的分子机理还一无所知，目前只知道，只有通过卵子细胞才能完成该过程。因此卵子的获得将决定干细胞治疗能否成功，这一具有抗生素一样革命意义的新疗法，正面临着卵子供应的瓶颈。卵子的捐献程序往往令捐献者非常不舒服，甚至疼痛，还有发生并发症的危险。为了刺激排卵，捐卵的女性需要接受激素注射，可能发生激素引发的并发症；为了从卵巢中取出卵细胞，往往需要将一根针通过阴道插入子宫；少数捐献者会发生卵巢高度刺激综合征，这些人中还有少数发生肾衰。科学家们对卵子的捐献争议不断。即使按照伦理章程获得卵细胞，人们对卵子捐献的看法也不一样，一些科学家坚决主张不用人类卵子，而是用动物的卵细胞进行实验。另外是否对捐献者给予报酬各方意见也不一样，有的不主张给钱，认为这样可能导致一些妇女为钱捐献卵子而忽视甚至无视捐卵子可能带来的风险；有人主张给钱，通过合同防止一些捐献者中途退出造成实验无法继续。科学家们认为，由于卵子供应的短缺以及克隆过程的效率无法知道，克隆干细胞在治疗领域的运用范围最终不会很广，它不会像开个处方药那么简单，而是像肾移植疗法一样，只是用于少数特殊病人的治疗，比如，为挽救自己的孩子，某位妈妈捐献自己的一些卵细胞来克隆出干细胞。

第一、按状态，用途还有包装，效期大致可分为这几类     1.干粉培养基效期     由于干粉培养基中不含水分，呈干燥状态，干扰微生物不易生长，因此效期较长。     国内厂商一般设定干粉培养基的效期为两年或者三年，某些添加剂的效期设为一年。     2.即用型培养基效期       这一类型的培养基省去了由干粉培养基灭菌、制作成为可用的培养基的过程，使用方便快捷，已经受到越来越多的一线实验人员的青睐，但由于处于来则可用的即用状态，其效期远远短于干粉培养基。       一般即用型平板的效期为三个月，少数如血平皿的效期为一个月；即用型液体试管培养基效期一般在三个月至六个月，少数如SC增菌液中含有易失效的成分效期仅为一个月，如果考虑运输过程保存不当，如受运输温度影响，两周内很有可能分解变色。     3.生化鉴定类培养基效期     该类培养基一般采用安瓿瓶包装，培养基多数为液态和半固态，且多数含有指示剂，通常效期设定在一年。该类型培养基失效的原因主要是玻璃中含有硅酸盐成分，呈酸性，随着保存时间的延长与培养基中成分缓慢反应，导致Ph下降，而使培养基失效。  第二、培养基的效期评价     1.有效原则：确保在所设立的有效期内微生物培养基在理化、微生物生长等各方面保持正常。     2.居中原则：由于培养基的使用者可能分布于自然气候相差很大的不同地域，因此培养基效期的设立应在考虑客户地域跨度的前提下，选取时间段的中部。     3.追踪原则：微生物培养基的制造者和使用者双方，都应对培养基质量进行定期追踪，开展质量验证实验，以监控产品质量的稳定性和保证实验效果的准确。

脐血human cord blood hcB）又称胎盘血或脐带血，是在足月胎儿娩出之后，经结扎脐带断脐，通过脐静脉穿刺或切开引流收集到的残存在胎盘和脐带中的血液。脐血中含有丰富的造血干细胞和间充质干细胞。脐血干细胞是近年发现的一类具有与骨髓干细胞，外周血干细胞相同的多向分化潜能的原始祖细胞。脐血干细胞具备自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影响或诱导下，向各种细胞或组织分化。作为骨髓及外周血干细胞的替代物，脐血干细胞在临床上的应用与脐血干细胞的生物学特性密切相关干细胞的定义及分类干细胞是能够自我更新并具有向任何组织及器官分化潜能的未分化细胞。就分子生物学技术角度而言，干细胞将会有广阔的应用前景。干细胞分为胚胎干细胞、脐血干细胞和成人干细胞。每种干细胞各有自己的特性，并可根据其基因分型及表型的标记不同进一步细分_1]。　　胚胎干细胞是无性并具有自我更新潜力的细胞，可以向任何特殊的细胞类型转化 。胚胎干细胞来源于原始胚胎的有丝分裂，被认为是全能干细胞的完美代表。大约处于5-6 d有丝分裂的人胚胎内的细胞群是多功能性胚胎干细胞的来源。这些可以向多个器官和组织分化的干细胞称为多能干细胞[23。　　有关胚胎干细胞的研究受法律及伦理约束。　　脐血干细胞分离自新生儿脐带血。脐血干细胞是具有自我更新潜力的多功能干细胞。可以分化为各种组织和器官的细胞体系，比如软骨细胞系、脂肪细胞系、成骨细胞系、骨髓组织及血液组成成分等。　　当应用于细胞移植时，脐血干细胞比成人干细胞有两大优势，一是易获得性，二是移植物抗宿主病的发病率较低，这是脐血中干细胞比较幼稚、免疫耐受性较高的结果。所以，脐血干细胞更适用于治疗损害的组织及免疫失调的疾病。　　成人干细胞也具有向多种组织及器官分化的潜力，但目前其特性及分类标准还是根据其所在组织或器官内部的自我更新及分化能力判断。　　人脐血（UCB）人脐带中平均含有60～80 mL血液，在分娩后用采血袋取血_3]，这种方法比其他采血方法的污染率降低大约15％。脐血被认为是各种干细胞的来源 ]。　　因此，UCB中含有可以分化为红细胞、白细胞及血小板的特殊干细胞，并具有外周血干细胞及骨髓干细胞所不具备的特殊选择性的能力。UCB中还富含调节T细胞，可以耐受同种免疫排斥反应。故脐血干细胞（UCB—SCs）较外周血干细胞及骨髓干细胞具有更令人振奋的应用前景人OGB—SCs鉴于人UCB的组成成分，有必要分清以下各种干细胞，如无限制成体干细胞、问充质干细胞、造血干细胞及内皮祖细胞¨5]。脐血干细胞在培养第4 5天时，显微镜下观察呈成纤维细胞样改变。人UCB含有较高比例的细胞标记物。如CD34 及CD105+_4].　　这是其具有较高再生能力的原因之一。与骨髓干细胞相比，UCB—SCs在体外培养过程中更倾向于形成集落，并需要多种不同的定向分化诱导因子。故UCB—SCs更适用于再生医学的研究。UCB—SCs高度保守的端粒，更长的端粒长度，长时间较高的稳定性及较低的致癌率使其较骨髓源基质细胞更适合于实验及临床研究 ]。　　　　一、脐血源无限制成体细胞（USSC）在人UCB中有一类CD45一及HLAⅡ一的细胞，其在脐血中含量较少，但在体外培养时表现出强大的增殖能力，即使在数目增殖至10 时，仍能保持稳定的多向分化能力。这类细胞就是USSC[ 。其可以向中胚层、内胚层及外胚层定向分化，分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂细胞及神经细胞等。在体外培养中不表达CD14，CD33，CD34。CD45，CD50和CD106，而表达CD13，CD29，CD44，CD90，CD105和波性蛋白及某些特殊标记，如Runx1，YB1及KDR等 ]。脐血中这类无限制成体细胞可能是脐血中造血祖细胞、间充质祖细胞及内皮祖细胞的来源。　　　二、脐血源间充质干细胞（CB MSOs）脐血中的CB—MSCs被认为是用于移植的最佳选择。深入研究证实，CB—MSCs可分化为软骨细胞、骨细胞、脂细胞、神经细胞及脏壁中胚层。CB.MSCs在体外培养过程中不表达CD14，CD34和CD45。而表达CD106，CD54，SH2，SH3和SH4[ 。电子光学显微镜下观察可以看到CB—MSCs中某些间质标记物表达阳性，如SMA、波形蛋白、巢蛋白及结蛋白[ 。CB.MSCs还表达一种特殊的标记H0X，尤其是HOXA9。HOXB7，HOXC10及HOXD8被称为问充质干细胞的“生物学指纹”[9]，这是从脐血中分离间充质干细胞的特异性标记之一。　　　　三、脐血源造血干细胞（CB—HSCs）目前CB—MSCs被认为是移植治疗血液系统疾病的最佳选择。正如可以分化为血液组成成分一样，CB.MSCs也可分化为骨髓组织的组成成分 ]。鉴于造血作用的传统定义，可以认为CB.MSCs与原始的造血祖细胞相似。有研究证实，CB—MSCs在培养过程中极易形成集落，并表达各种细胞因子，如P21apl／wafl，P27 pl，Stat3， ，Notch，Ⅵ t，GSK_3，H0X 家族（如Hoxb4），FoxO，pu.1，GATA一1，HIF一1仅和Rheb2d等，这些细胞因子与UCB—SCs的一系列功能，如细胞存活、细胞自我更新、增殖、分化及迁移等密切相关_】……四、脐血源内皮祖细胞（CB—EPCs）CB—EPCs最适合在血管重塑过程中整合人新生血管的再生过程并定向分化为血管内皮细胞 1 。末梢血中EPCs的数目较少，不能进行细胞疗法。脐血中有大量的具有功能并可以在体外培养增殖的EPCs。CB—EPCs的临床应用需要在可控制条件下扩增并有严格的临床前实验证实。在体外培养基培养总是以集落单位的形式存在，通过细胞磁性进行筛选。CB.EPCs表达CD1337CD34 或KDRVCD34 或相关VEGFR2和CD14一，还表达STAT3、c_kit、CXCR4和Oct4Ira]。　　UCB—SCs移植的临床应用1989年首例UCB—SCs移植成功，受者为患有范科尼贫血的男孩，供者是与其HLA匹配的姐妹_1引。　　2008年是首例UCB.SCs移植成功的20周年口 ，纵观20余年的不断发展。至今超过20 000例恶性及非恶性患者已经成功地实施了UCB.SCs移植[】 ，其中恶性疾病包括急慢性骨髓、淋巴系统疾病及脊髓发育不良综合征等一系列恶性肿瘤[1 ；非恶性疾病主要有骨髓功能衰竭和血红蛋白病、代谢性疾病、脑白质营养不良症[19 和原发性免疫缺陷性疾病等_加]。但目前脐血干细胞仍以用于移植治疗血液系统恶性疾病为主[21]。评价UCB—SCs应用于非血液系统疾病的弊与利取决于很多因素。如受者疾病的状态、供者的功能状态、供者的可行性及移植物的特性。脐血干细胞在血液系统的应用评价取决于嗜中性粒细胞及血小板数目的恢复情况。即分别连续3 d不少于500个／mm 和即使在未行血小板输入的情况下也不能少于20 000个／ram l21]。Rocha等 研究发现，与骨髓干细胞移植患者相比，UCB—SCs移植者移植后的第1个月嗜中性粒细胞及血小板恢复较慢。因此，UCB—SCs移植者的免疫功能恢复延迟，容易引发感染E23]，但UCB—SCs移植后急慢性移植物抗宿主病（GVHD）的发病率明显降低。一项多中心的前瞻性研究发现，34例脐血干细胞移植患者中90％发生了病原体的感染。2／3的患者在移植后的前6个月至少有3种病原体的感染，而移植100 d后原有疾病的复发率降低 ]。大量研究发现，脐血干细胞移植治疗血液系统疾病后可明显降低移植相关死亡率（TRM）和疾病复发率，且允许HLA的不完全匹配，故脐血干细胞已成为替代骨髓干细胞移植的新选择[2“。成人进行UCB.SCs移植后的TRM、移植失败率、总死亡率及复发率与骨髓干细胞移植相比的结果同儿童相似，但UCB—SCs移植应用于成人的最大障碍是脐血干细胞数目不足。目前研究者正在不断探索尝试新的方法及策略。~I3UCB—SCs体外扩增及移植入双份UCB—SCs等。Barker等E25]已证实双份UCB.SCs移植的安全性和有效性。国内也有双份HLA不全相合非血缘脐带血干细胞（CBT）成功治疗成人重症白血病的报道E262。　　移植的UCB—SCs通过多种细胞因子与微环境相互作用以达到彼此适应，微环境中基质细胞产生的趋化因子1（SDF一1／CXCL12）及其受体、CXCR4等对移植后干细胞的趋化、归巢、活化及存活均起着重要的作用[27-281。最新的研究证实，UCB—SCs可依靠Got介导的信号机制成功植入骨髓微环境内 ，其中转化生长因子p（TGF—p）E28]、血小板生成素及其受体和MPL是诱导干细胞减少细胞分裂而处于静止期的骨髓信号分子的候选因子。也有学者报道。Nf2／Merl可以通过影响微环境来调节移植的UCB—SCs的功能口0]。　　故移植成功与否与植入的微环境密切相关。这是UCB.SCs移植的关键所在。Broxmeyer等。 研究发现，可以通过减少微环境中抑制干细胞归巢的细胞因子数目、增加前列腺素E：含量、使移植干细胞岩藻糖基化、增加移植干细胞数目等提高移植干细胞的归巢及移植成功率。　　　　UCB—SCs移植在再生医学的应用脐血中非造血干细胞只能分离自新鲜的脐血。　　这是因为其在冻存的脐血中含量较低的缘故。理论上USSC可以在体内外增殖达lO 仍能保持自身多向分化能力的稳定性[6 3。UCB—SCs的这些特性使组织再生研究成为可能。　　一、用于心脏疾病的研究细胞培养及动物实验证明，获得自新鲜脐血的干细胞可以缓解心脏的创伤，其可以迁移至心肌梗死区，减小心肌梗死范围，提高心肌功能，增加心肌毛细血管密度。Leor等口 ]应用CD133 UCB—SC进行移植研究，发现可使MI裸鼠模型的心肌梗死可得到明显改善。体外实验研究发现，非造血干细胞可以分化为心肌细胞E34]。动物模型心肌梗死范围的缩小可能与某些细胞因子的产生密切相关。为减少心肌梗死的并发症， 自体骨髓干细胞移植已成功应用于临床实践，认为其机制仍与细胞因子的释放相关。　　UCB.SC移植治疗心肌梗死还需要大量临床试验研究。　　二、内分泌紊乱及糖尿病UCB.SCs可以移植治疗免疫缺陷性疾病。目前无论是临床前实验研究还是临床研究大都集中于UCB—SCs移植治疗l型糖尿病（Tra M）。有文献报道15例接受自体造血干细胞治疗的患者中，14例治疗后停用胰岛素，最长者已达35个月_3 。2006年南京大学医学院附属鼓楼医院进行了国内首例造血干细胞移植治疗TIDM，迄今患者已停用胰岛素20个月余，血糖一直维持在正常水平 。Haller等|37]对15例行自体UCB.SCs移植治疗的T1DM患者进行1年随访，发现患者的自身免疫性抗体滴度、CD4／CD8、其他T细胞表型无明显改变，而CD4+,CD25~.FoxP3+（Tregs）在移植后6个月明显升高；UCB—SCs移植后1年，尽管自身比较发现患者有一段时间C.肽短暂升高，但并没有与移植相关的不利事件发生。但因为缺乏对照，此结果还有待证实。UCB—SCs移植治疗T1DM的疗效仍需进一步临床试验证实。　　三、神经障碍性疾病大量的动物模型实验证实。UCB—SCs移植可以明显改善神经损伤的进展，如卒中、肌萎缩（ALS）、帕金森病、阿尔茨海默病及脊髓损伤。目前已经有诱导UCB—SCs向受损的神经组织分化的临床试验。大量临床试验证实，UCB.SCs移植是一种新的首选治疗方法[38]。　　UCB—SCs移植治疗的优缺点UCB—SCs为干细胞移植开创了新的篇章，其具有以下特点。优点：①UCB.SCs的易获得且对供者无危险。② 与骨髓及外周血干细胞相比。UCB中的造血干细胞及间充质干细胞表达的CD34 、CD105 水平较高。（~）UCB-SCs移植前宿主抗排斥反应的处理较轻。④其具有的较强的免疫耐受力。使受者GVHD的发病率较低。⑤UCB中调节T细胞具有较高效能。⑥UCB—SCs移植后受者抗移植物白血病的发病率较低。@HLA匹配的自由度较高，为那些少数民族及老年患者提供了治疗的机会。缺点：①UCB捐献者数量有限。②uCB中干细胞数目较骨髓及外周血少。③临床试验随访的时间不够长。@UCB—SCs所带有的先天性基因缺陷可能会转移给受者。

脐血human cord blood hcB）又称胎盘血或脐带血，是在足月胎儿娩出之后，经结扎脐带断脐，通过脐静脉穿刺或切开引流收集到的残存在胎盘和脐带中的血液。脐血中含有丰富的造血干细胞和间充质干细胞。脐血干细胞是近年发现的一类具有与骨髓干细胞，外周血干细胞相同的多向分化潜能的原始祖细胞。脐血干细胞具备自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影响或诱导下，向各种细胞或组织分化。作为骨髓及外周血干细胞的替代物，脐血干细胞在临床上的应用与脐血干细胞的生物学特性密切相关干细胞的定义及分类干细胞是能够自我更新并具有向任何组织及器官分化潜能的未分化细胞。就分子生物学技术角度而言，干细胞将会有广阔的应用前景。干细胞分为胚胎干细胞、脐血干细胞和成人干细胞。每种干细胞各有自己的特性，并可根据其基因分型及表型的标记不同进一步细分_1]。　　胚胎干细胞是无性并具有自我更新潜力的细胞，可以向任何特殊的细胞类型转化 。胚胎干细胞来源于原始胚胎的有丝分裂，被认为是全能干细胞的完美代表。大约处于5-6 d有丝分裂的人胚胎内的细胞群是多功能性胚胎干细胞的来源。这些可以向多个器官和组织分化的干细胞称为多能干细胞[23。　　有关胚胎干细胞的研究受法律及伦理约束。　　脐血干细胞分离自新生儿脐带血。脐血干细胞是具有自我更新潜力的多功能干细胞。可以分化为各种组织和器官的细胞体系，比如软骨细胞系、脂肪细胞系、成骨细胞系、骨髓组织及血液组成成分等。　　当应用于细胞移植时，脐血干细胞比成人干细胞有两大优势，一是易获得性，二是移植物抗宿主病的发病率较低，这是脐血中干细胞比较幼稚、免疫耐受性较高的结果。所以，脐血干细胞更适用于治疗损害的组织及免疫失调的疾病。　　成人干细胞也具有向多种组织及器官分化的潜力，但目前其特性及分类标准还是根据其所在组织或器官内部的自我更新及分化能力判断。　　人脐血（UCB）人脐带中平均含有60～80 mL血液，在分娩后用采血袋取血_3]，这种方法比其他采血方法的污染率降低大约15％。脐血被认为是各种干细胞的来源 ]。　　因此，UCB中含有可以分化为红细胞、白细胞及血小板的特殊干细胞，并具有外周血干细胞及骨髓干细胞所不具备的特殊选择性的能力。UCB中还富含调节T细胞，可以耐受同种免疫排斥反应。故脐血干细胞（UCB—SCs）较外周血干细胞及骨髓干细胞具有更令人振奋的应用前景人OGB—SCs鉴于人UCB的组成成分，有必要分清以下各种干细胞，如无限制成体干细胞、问充质干细胞、造血干细胞及内皮祖细胞¨5]。脐血干细胞在培养第4 5天时，显微镜下观察呈成纤维细胞样改变。人UCB含有较高比例的细胞标记物。如CD34 及CD105+_4].　　这是其具有较高再生能力的原因之一。与骨髓干细胞相比，UCB—SCs在体外培养过程中更倾向于形成集落，并需要多种不同的定向分化诱导因子。故UCB—SCs更适用于再生医学的研究。UCB—SCs高度保守的端粒，更长的端粒长度，长时间较高的稳定性及较低的致癌率使其较骨髓源基质细胞更适合于实验及临床研究 ]。　　　　一、脐血源无限制成体细胞（USSC）在人UCB中有一类CD45一及HLAⅡ一的细胞，其在脐血中含量较少，但在体外培养时表现出强大的增殖能力，即使在数目增殖至10 时，仍能保持稳定的多向分化能力。这类细胞就是USSC[ 。其可以向中胚层、内胚层及外胚层定向分化，分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂细胞及神经细胞等。在体外培养中不表达CD14，CD33，CD34。CD45，CD50和CD106，而表达CD13，CD29，CD44，CD90，CD105和波性蛋白及某些特殊标记，如Runx1，YB1及KDR等 ]。脐血中这类无限制成体细胞可能是脐血中造血祖细胞、间充质祖细胞及内皮祖细胞的来源。　　　二、脐血源间充质干细胞（CB MSOs）脐血中的CB—MSCs被认为是用于移植的最佳选择。深入研究证实，CB—MSCs可分化为软骨细胞、骨细胞、脂细胞、神经细胞及脏壁中胚层。CB.MSCs在体外培养过程中不表达CD14，CD34和CD45。而表达CD106，CD54，SH2，SH3和SH4[ 。电子光学显微镜下观察可以看到CB—MSCs中某些间质标记物表达阳性，如SMA、波形蛋白、巢蛋白及结蛋白[ 。CB.MSCs还表达一种特殊的标记H0X，尤其是HOXA9。HOXB7，HOXC10及HOXD8被称为问充质干细胞的“生物学指纹”[9]，这是从脐血中分离间充质干细胞的特异性标记之一。　　　　三、脐血源造血干细胞（CB—HSCs）目前CB—MSCs被认为是移植治疗血液系统疾病的最佳选择。正如可以分化为血液组成成分一样，CB.MSCs也可分化为骨髓组织的组成成分 ]。鉴于造血作用的传统定义，可以认为CB.MSCs与原始的造血祖细胞相似。有研究证实，CB—MSCs在培养过程中极易形成集落，并表达各种细胞因子，如P21apl／wafl，P27 pl，Stat3， ，Notch，Ⅵ t，GSK_3，H0X 家族（如Hoxb4），FoxO，pu.1，GATA一1，HIF一1仅和Rheb2d等，这些细胞因子与UCB—SCs的一系列功能，如细胞存活、细胞自我更新、增殖、分化及迁移等密切相关_】……四、脐血源内皮祖细胞（CB—EPCs）CB—EPCs最适合在血管重塑过程中整合人新生血管的再生过程并定向分化为血管内皮细胞 1 。末梢血中EPCs的数目较少，不能进行细胞疗法。脐血中有大量的具有功能并可以在体外培养增殖的EPCs。CB—EPCs的临床应用需要在可控制条件下扩增并有严格的临床前实验证实。在体外培养基培养总是以集落单位的形式存在，通过细胞磁性进行筛选。CB.EPCs表达CD1337CD34 或KDRVCD34 或相关VEGFR2和CD14一，还表达STAT3、c_kit、CXCR4和Oct4Ira]。　　UCB—SCs移植的临床应用1989年首例UCB—SCs移植成功，受者为患有范科尼贫血的男孩，供者是与其HLA匹配的姐妹_1引。　　2008年是首例UCB.SCs移植成功的20周年口 ，纵观20余年的不断发展。至今超过20 000例恶性及非恶性患者已经成功地实施了UCB.SCs移植[】 ，其中恶性疾病包括急慢性骨髓、淋巴系统疾病及脊髓发育不良综合征等一系列恶性肿瘤[1 ；非恶性疾病主要有骨髓功能衰竭和血红蛋白病、代谢性疾病、脑白质营养不良症[19 和原发性免疫缺陷性疾病等_加]。但目前脐血干细胞仍以用于移植治疗血液系统恶性疾病为主[21]。评价UCB—SCs应用于非血液系统疾病的弊与利取决于很多因素。如受者疾病的状态、供者的功能状态、供者的可行性及移植物的特性。脐血干细胞在血液系统的应用评价取决于嗜中性粒细胞及血小板数目的恢复情况。即分别连续3 d不少于500个／mm 和即使在未行血小板输入的情况下也不能少于20 000个／ram l21]。Rocha等 研究发现，与骨髓干细胞移植患者相比，UCB—SCs移植者移植后的第1个月嗜中性粒细胞及血小板恢复较慢。因此，UCB—SCs移植者的免疫功能恢复延迟，容易引发感染E23]，但UCB—SCs移植后急慢性移植物抗宿主病（GVHD）的发病率明显降低。一项多中心的前瞻性研究发现，34例脐血干细胞移植患者中90％发生了病原体的感染。2／3的患者在移植后的前6个月至少有3种病原体的感染，而移植100 d后原有疾病的复发率降低 ]。大量研究发现，脐血干细胞移植治疗血液系统疾病后可明显降低移植相关死亡率（TRM）和疾病复发率，且允许HLA的不完全匹配，故脐血干细胞已成为替代骨髓干细胞移植的新选择[2“。成人进行UCB.SCs移植后的TRM、移植失败率、总死亡率及复发率与骨髓干细胞移植相比的结果同儿童相似，但UCB—SCs移植应用于成人的最大障碍是脐血干细胞数目不足。目前研究者正在不断探索尝试新的方法及策略。~I3UCB—SCs体外扩增及移植入双份UCB—SCs等。Barker等E25]已证实双份UCB.SCs移植的安全性和有效性。国内也有双份HLA不全相合非血缘脐带血干细胞（CBT）成功治疗成人重症白血病的报道E262。　　移植的UCB—SCs通过多种细胞因子与微环境相互作用以达到彼此适应，微环境中基质细胞产生的趋化因子1（SDF一1／CXCL12）及其受体、CXCR4等对移植后干细胞的趋化、归巢、活化及存活均起着重要的作用[27-281。最新的研究证实，UCB—SCs可依靠Got介导的信号机制成功植入骨髓微环境内 ，其中转化生长因子p（TGF—p）E28]、血小板生成素及其受体和MPL是诱导干细胞减少细胞分裂而处于静止期的骨髓信号分子的候选因子。也有学者报道。Nf2／Merl可以通过影响微环境来调节移植的UCB—SCs的功能口0]。　　故移植成功与否与植入的微环境密切相关。这是UCB.SCs移植的关键所在。Broxmeyer等。 研究发现，可以通过减少微环境中抑制干细胞归巢的细胞因子数目、增加前列腺素E：含量、使移植干细胞岩藻糖基化、增加移植干细胞数目等提高移植干细胞的归巢及移植成功率。　　　　UCB—SCs移植在再生医学的应用脐血中非造血干细胞只能分离自新鲜的脐血。　　这是因为其在冻存的脐血中含量较低的缘故。理论上USSC可以在体内外增殖达lO 仍能保持自身多向分化能力的稳定性[6 3。UCB—SCs的这些特性使组织再生研究成为可能。　　一、用于心脏疾病的研究细胞培养及动物实验证明，获得自新鲜脐血的干细胞可以缓解心脏的创伤，其可以迁移至心肌梗死区，减小心肌梗死范围，提高心肌功能，增加心肌毛细血管密度。Leor等口 ]应用CD133 UCB—SC进行移植研究，发现可使MI裸鼠模型的心肌梗死可得到明显改善。体外实验研究发现，非造血干细胞可以分化为心肌细胞E34]。动物模型心肌梗死范围的缩小可能与某些细胞因子的产生密切相关。为减少心肌梗死的并发症， 自体骨髓干细胞移植已成功应用于临床实践，认为其机制仍与细胞因子的释放相关。　　UCB.SC移植治疗心肌梗死还需要大量临床试验研究。　　二、内分泌紊乱及糖尿病UCB.SCs可以移植治疗免疫缺陷性疾病。目前无论是临床前实验研究还是临床研究大都集中于UCB—SCs移植治疗l型糖尿病（Tra M）。有文献报道15例接受自体造血干细胞治疗的患者中，14例治疗后停用胰岛素，最长者已达35个月_3 。2006年南京大学医学院附属鼓楼医院进行了国内首例造血干细胞移植治疗TIDM，迄今患者已停用胰岛素20个月余，血糖一直维持在正常水平 。Haller等|37]对15例行自体UCB.SCs移植治疗的T1DM患者进行1年随访，发现患者的自身免疫性抗体滴度、CD4／CD8、其他T细胞表型无明显改变，而CD4+,CD25~.FoxP3+（Tregs）在移植后6个月明显升高；UCB—SCs移植后1年，尽管自身比较发现患者有一段时间C.肽短暂升高，但并没有与移植相关的不利事件发生。但因为缺乏对照，此结果还有待证实。UCB—SCs移植治疗T1DM的疗效仍需进一步临床试验证实。　　三、神经障碍性疾病大量的动物模型实验证实。UCB—SCs移植可以明显改善神经损伤的进展，如卒中、肌萎缩（ALS）、帕金森病、阿尔茨海默病及脊髓损伤。目前已经有诱导UCB—SCs向受损的神经组织分化的临床试验。大量临床试验证实，UCB.SCs移植是一种新的首选治疗方法[38]。　　UCB—SCs移植治疗的优缺点UCB—SCs为干细胞移植开创了新的篇章，其具有以下特点。优点：①UCB.SCs的易获得且对供者无危险。② 与骨髓及外周血干细胞相比。UCB中的造血干细胞及间充质干细胞表达的CD34 、CD105 水平较高。（~）UCB-SCs移植前宿主抗排斥反应的处理较轻。④其具有的较强的免疫耐受力。使受者GVHD的发病率较低。⑤UCB中调节T细胞具有较高效能。⑥UCB—SCs移植后受者抗移植物白血病的发病率较低。@HLA匹配的自由度较高，为那些少数民族及老年患者提供了治疗的机会。缺点：①UCB捐献者数量有限。②uCB中干细胞数目较骨髓及外周血少。③临床试验随访的时间不够长。@UCB—SCs所带有的先天性基因缺陷可能会转移给受者。

脐血human cord blood hcB）又称胎盘血或脐带血，是在足月胎儿娩出之后，经结扎脐带断脐，通过脐静脉穿刺或切开引流收集到的残存在胎盘和脐带中的血液。脐血中含有丰富的造血干细胞和间充质干细胞。脐血干细胞是近年发现的一类具有与骨髓干细胞，外周血干细胞相同的多向分化潜能的原始祖细胞。脐血干细胞具备自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影响或诱导下，向各种细胞或组织分化。作为骨髓及外周血干细胞的替代物，脐血干细胞在临床上的应用与脐血干细胞的生物学特性密切相关干细胞的定义及分类干细胞是能够自我更新并具有向任何组织及器官分化潜能的未分化细胞。就分子生物学技术角度而言，干细胞将会有广阔的应用前景。干细胞分为胚胎干细胞、脐血干细胞和成人干细胞。每种干细胞各有自己的特性，并可根据其基因分型及表型的标记不同进一步细分_1]。　　胚胎干细胞是无性并具有自我更新潜力的细胞，可以向任何特殊的细胞类型转化 。胚胎干细胞来源于原始胚胎的有丝分裂，被认为是全能干细胞的完美代表。大约处于5-6 d有丝分裂的人胚胎内的细胞群是多功能性胚胎干细胞的来源。这些可以向多个器官和组织分化的干细胞称为多能干细胞[23。　　有关胚胎干细胞的研究受法律及伦理约束。　　脐血干细胞分离自新生儿脐带血。脐血干细胞是具有自我更新潜力的多功能干细胞。可以分化为各种组织和器官的细胞体系，比如软骨细胞系、脂肪细胞系、成骨细胞系、骨髓组织及血液组成成分等。　　当应用于细胞移植时，脐血干细胞比成人干细胞有两大优势，一是易获得性，二是移植物抗宿主病的发病率较低，这是脐血中干细胞比较幼稚、免疫耐受性较高的结果。所以，脐血干细胞更适用于治疗损害的组织及免疫失调的疾病。　　成人干细胞也具有向多种组织及器官分化的潜力，但目前其特性及分类标准还是根据其所在组织或器官内部的自我更新及分化能力判断。　　人脐血（UCB）人脐带中平均含有60～80 mL血液，在分娩后用采血袋取血_3]，这种方法比其他采血方法的污染率降低大约15％。脐血被认为是各种干细胞的来源 ]。　　因此，UCB中含有可以分化为红细胞、白细胞及血小板的特殊干细胞，并具有外周血干细胞及骨髓干细胞所不具备的特殊选择性的能力。UCB中还富含调节T细胞，可以耐受同种免疫排斥反应。故脐血干细胞（UCB—SCs）较外周血干细胞及骨髓干细胞具有更令人振奋的应用前景人OGB—SCs鉴于人UCB的组成成分，有必要分清以下各种干细胞，如无限制成体干细胞、问充质干细胞、造血干细胞及内皮祖细胞¨5]。脐血干细胞在培养第4 5天时，显微镜下观察呈成纤维细胞样改变。人UCB含有较高比例的细胞标记物。如CD34 及CD105+_4].　　这是其具有较高再生能力的原因之一。与骨髓干细胞相比，UCB—SCs在体外培养过程中更倾向于形成集落，并需要多种不同的定向分化诱导因子。故UCB—SCs更适用于再生医学的研究。UCB—SCs高度保守的端粒，更长的端粒长度，长时间较高的稳定性及较低的致癌率使其较骨髓源基质细胞更适合于实验及临床研究 ]。　　　　一、脐血源无限制成体细胞（USSC）在人UCB中有一类CD45一及HLAⅡ一的细胞，其在脐血中含量较少，但在体外培养时表现出强大的增殖能力，即使在数目增殖至10 时，仍能保持稳定的多向分化能力。这类细胞就是USSC[ 。其可以向中胚层、内胚层及外胚层定向分化，分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂细胞及神经细胞等。在体外培养中不表达CD14，CD33，CD34。CD45，CD50和CD106，而表达CD13，CD29，CD44，CD90，CD105和波性蛋白及某些特殊标记，如Runx1，YB1及KDR等 ]。脐血中这类无限制成体细胞可能是脐血中造血祖细胞、间充质祖细胞及内皮祖细胞的来源。　　　二、脐血源间充质干细胞（CB MSOs）脐血中的CB—MSCs被认为是用于移植的最佳选择。深入研究证实，CB—MSCs可分化为软骨细胞、骨细胞、脂细胞、神经细胞及脏壁中胚层。CB.MSCs在体外培养过程中不表达CD14，CD34和CD45。而表达CD106，CD54，SH2，SH3和SH4[ 。电子光学显微镜下观察可以看到CB—MSCs中某些间质标记物表达阳性，如SMA、波形蛋白、巢蛋白及结蛋白[ 。CB.MSCs还表达一种特殊的标记H0X，尤其是HOXA9。HOXB7，HOXC10及HOXD8被称为问充质干细胞的“生物学指纹”[9]，这是从脐血中分离间充质干细胞的特异性标记之一。　　　　三、脐血源造血干细胞（CB—HSCs）目前CB—MSCs被认为是移植治疗血液系统疾病的最佳选择。正如可以分化为血液组成成分一样，CB.MSCs也可分化为骨髓组织的组成成分 ]。鉴于造血作用的传统定义，可以认为CB.MSCs与原始的造血祖细胞相似。有研究证实，CB—MSCs在培养过程中极易形成集落，并表达各种细胞因子，如P21apl／wafl，P27 pl，Stat3， ，Notch，Ⅵ t，GSK_3，H0X 家族（如Hoxb4），FoxO，pu.1，GATA一1，HIF一1仅和Rheb2d等，这些细胞因子与UCB—SCs的一系列功能，如细胞存活、细胞自我更新、增殖、分化及迁移等密切相关_】……四、脐血源内皮祖细胞（CB—EPCs）CB—EPCs最适合在血管重塑过程中整合人新生血管的再生过程并定向分化为血管内皮细胞 1 。末梢血中EPCs的数目较少，不能进行细胞疗法。脐血中有大量的具有功能并可以在体外培养增殖的EPCs。CB—EPCs的临床应用需要在可控制条件下扩增并有严格的临床前实验证实。在体外培养基培养总是以集落单位的形式存在，通过细胞磁性进行筛选。CB.EPCs表达CD1337CD34 或KDRVCD34 或相关VEGFR2和CD14一，还表达STAT3、c_kit、CXCR4和Oct4Ira]。　　UCB—SCs移植的临床应用1989年首例UCB—SCs移植成功，受者为患有范科尼贫血的男孩，供者是与其HLA匹配的姐妹_1引。　　2008年是首例UCB.SCs移植成功的20周年口 ，纵观20余年的不断发展。至今超过20 000例恶性及非恶性患者已经成功地实施了UCB.SCs移植[】 ，其中恶性疾病包括急慢性骨髓、淋巴系统疾病及脊髓发育不良综合征等一系列恶性肿瘤[1 ；非恶性疾病主要有骨髓功能衰竭和血红蛋白病、代谢性疾病、脑白质营养不良症[19 和原发性免疫缺陷性疾病等_加]。但目前脐血干细胞仍以用于移植治疗血液系统恶性疾病为主[21]。评价UCB—SCs应用于非血液系统疾病的弊与利取决于很多因素。如受者疾病的状态、供者的功能状态、供者的可行性及移植物的特性。脐血干细胞在血液系统的应用评价取决于嗜中性粒细胞及血小板数目的恢复情况。即分别连续3 d不少于500个／mm 和即使在未行血小板输入的情况下也不能少于20 000个／ram l21]。Rocha等 研究发现，与骨髓干细胞移植患者相比，UCB—SCs移植者移植后的第1个月嗜中性粒细胞及血小板恢复较慢。因此，UCB—SCs移植者的免疫功能恢复延迟，容易引发感染E23]，但UCB—SCs移植后急慢性移植物抗宿主病（GVHD）的发病率明显降低。一项多中心的前瞻性研究发现，34例脐血干细胞移植患者中90％发生了病原体的感染。2／3的患者在移植后的前6个月至少有3种病原体的感染，而移植100 d后原有疾病的复发率降低 ]。大量研究发现，脐血干细胞移植治疗血液系统疾病后可明显降低移植相关死亡率（TRM）和疾病复发率，且允许HLA的不完全匹配，故脐血干细胞已成为替代骨髓干细胞移植的新选择[2“。成人进行UCB.SCs移植后的TRM、移植失败率、总死亡率及复发率与骨髓干细胞移植相比的结果同儿童相似，但UCB—SCs移植应用于成人的最大障碍是脐血干细胞数目不足。目前研究者正在不断探索尝试新的方法及策略。~I3UCB—SCs体外扩增及移植入双份UCB—SCs等。Barker等E25]已证实双份UCB.SCs移植的安全性和有效性。国内也有双份HLA不全相合非血缘脐带血干细胞（CBT）成功治疗成人重症白血病的报道E262。　　移植的UCB—SCs通过多种细胞因子与微环境相互作用以达到彼此适应，微环境中基质细胞产生的趋化因子1（SDF一1／CXCL12）及其受体、CXCR4等对移植后干细胞的趋化、归巢、活化及存活均起着重要的作用[27-281。最新的研究证实，UCB—SCs可依靠Got介导的信号机制成功植入骨髓微环境内 ，其中转化生长因子p（TGF—p）E28]、血小板生成素及其受体和MPL是诱导干细胞减少细胞分裂而处于静止期的骨髓信号分子的候选因子。也有学者报道。Nf2／Merl可以通过影响微环境来调节移植的UCB—SCs的功能口0]。　　故移植成功与否与植入的微环境密切相关。这是UCB.SCs移植的关键所在。Broxmeyer等。 研究发现，可以通过减少微环境中抑制干细胞归巢的细胞因子数目、增加前列腺素E：含量、使移植干细胞岩藻糖基化、增加移植干细胞数目等提高移植干细胞的归巢及移植成功率。　　　　UCB—SCs移植在再生医学的应用脐血中非造血干细胞只能分离自新鲜的脐血。　　这是因为其在冻存的脐血中含量较低的缘故。理论上USSC可以在体内外增殖达lO 仍能保持自身多向分化能力的稳定性[6 3。UCB—SCs的这些特性使组织再生研究成为可能。　　一、用于心脏疾病的研究细胞培养及动物实验证明，获得自新鲜脐血的干细胞可以缓解心脏的创伤，其可以迁移至心肌梗死区，减小心肌梗死范围，提高心肌功能，增加心肌毛细血管密度。Leor等口 ]应用CD133 UCB—SC进行移植研究，发现可使MI裸鼠模型的心肌梗死可得到明显改善。体外实验研究发现，非造血干细胞可以分化为心肌细胞E34]。动物模型心肌梗死范围的缩小可能与某些细胞因子的产生密切相关。为减少心肌梗死的并发症， 自体骨髓干细胞移植已成功应用于临床实践，认为其机制仍与细胞因子的释放相关。　　UCB.SC移植治疗心肌梗死还需要大量临床试验研究。　　二、内分泌紊乱及糖尿病UCB.SCs可以移植治疗免疫缺陷性疾病。目前无论是临床前实验研究还是临床研究大都集中于UCB—SCs移植治疗l型糖尿病（Tra M）。有文献报道15例接受自体造血干细胞治疗的患者中，14例治疗后停用胰岛素，最长者已达35个月_3 。2006年南京大学医学院附属鼓楼医院进行了国内首例造血干细胞移植治疗TIDM，迄今患者已停用胰岛素20个月余，血糖一直维持在正常水平 。Haller等|37]对15例行自体UCB.SCs移植治疗的T1DM患者进行1年随访，发现患者的自身免疫性抗体滴度、CD4／CD8、其他T细胞表型无明显改变，而CD4+,CD25~.FoxP3+（Tregs）在移植后6个月明显升高；UCB—SCs移植后1年，尽管自身比较发现患者有一段时间C.肽短暂升高，但并没有与移植相关的不利事件发生。但因为缺乏对照，此结果还有待证实。UCB—SCs移植治疗T1DM的疗效仍需进一步临床试验证实。　　三、神经障碍性疾病大量的动物模型实验证实。UCB—SCs移植可以明显改善神经损伤的进展，如卒中、肌萎缩（ALS）、帕金森病、阿尔茨海默病及脊髓损伤。目前已经有诱导UCB—SCs向受损的神经组织分化的临床试验。大量临床试验证实，UCB.SCs移植是一种新的首选治疗方法[38]。　　UCB—SCs移植治疗的优缺点UCB—SCs为干细胞移植开创了新的篇章，其具有以下特点。优点：①UCB.SCs的易获得且对供者无危险。② 与骨髓及外周血干细胞相比。UCB中的造血干细胞及间充质干细胞表达的CD34 、CD105 水平较高。（~）UCB-SCs移植前宿主抗排斥反应的处理较轻。④其具有的较强的免疫耐受力。使受者GVHD的发病率较低。⑤UCB中调节T细胞具有较高效能。⑥UCB—SCs移植后受者抗移植物白血病的发病率较低。@HLA匹配的自由度较高，为那些少数民族及老年患者提供了治疗的机会。缺点：①UCB捐献者数量有限。②uCB中干细胞数目较骨髓及外周血少。③临床试验随访的时间不够长。@UCB—SCs所带有的先天性基因缺陷可能会转移给受者。

第一代β-受体激动剂：其特点是选择性低，对α、β1和β2受体均有一定兴奋作用。作用时间短，应用剂量大，心血管系统副作用大。主要有如下一些药物：①肾上腺素：可兴奋α受体及β-受体，可产生平喘作用，使支气管粘膜充血水肿减轻。同时可使心肌收缩力增强，心率加快，心排血量增加，血压升高，基础代谢率增加。对支气管的作用强而迅速，但较短暂，且副作用较大，临床很少应用。②异丙肾上腺素：对β-受体作用强。对α受体几乎无作用，因对心脏的兴奋性较大，且易产生耐药性，目前临床上也较少应用。③异丙喘宁：对支气管平滑肌的β2受体有一定的选择性，能显著缓解组胺、5羟色胺和乙酰胆碱诱发的支气管哮喘，产生较好的支气管舒张效应。④氯喘通：选择性激动β2受体，有较显著的支气管扩张作用，对心脏的副作用较小。对组胺和乙酰胆碱诱发的支气管哮喘有良好的缓解作用。临床适宜治疗支气管哮喘、喘息型支气管炎等。⑤喘速宁：主要作用于β2受体，同时具有罂粟碱样直接松弛支气管平滑肌作用。其对支气管平滑肌扩张效应的强度为异丙肾上腺素的5～10倍，对心血管中枢神经系统的影响较小。不良反应较少，主要为心悸、头重感、口干、胃肠道反应等。第二代β-受体激动剂：特点为对β2受体的选择性提高，兴奋作用增强，作用时间延长，对心血管的副作用减少。常用的药物如下：①舒喘宁：具有高选择性的强效β2受体激动剂。是目前临床应用最广泛的平喘药物之一，其对支气管平滑肌的舒张作用强而持久，对心血管和中枢神经系统影响很小，被认为是目前比较安全有效的平喘药。临床适用于支气管哮喘、喘息型支气管炎、支气管痉挛等。对严重支气管哮喘患者或哮喘持续状态，可考虑用静滴给药。②叔丁喘宁：高选择性兴奋β2受体，对支气管的舒张作用较异丙喘宁大2倍，同时可抑制炎性生物介质的释放，减轻粘膜水肿，增加粘膜纤毛廓清能力，在应用推荐剂量时很少引起心血管不良反应。③六甲双喘定：高选择性兴奋β2受体，对支气管平滑肌兴奋性较小，但对心脏兴奋作用极弱，作用时间较长，适用于急慢性哮喘，不良反应有心悸、手指震颤、头痛等。④其他：包括双甲苯喘定、茶丙喘宁、酚丙喘宁、吡丁喘宁等，均属此类药物。第三代β-受体激动剂：其特点为对β2受体选择性更高，效应更强。不良反应减少，作用时间达8小时以上。用量一般较小，为微克水平。主要产品如下：①氨双氯喘通：为强效高选择性β2受体激动剂，具有明显的支气管扩张作用，而对心血管系统影响很小。可口服、雾化及直肠给药，适用于治疗支气管哮喘、喘息性支气管炎及某些肺气肿等引起支气管痉挛的病症。不良反应有短暂头昏、轻度震颤等，但比其他品种为轻。②异丙喹喘宁、叔丁氯喘通、息克平、福摩特罗等药，均属此类。哮喘的药物有很多，其中最重要的莫过于β-受体激动剂，相信通过上述的一些介绍，大家对于治疗哮喘的药物有了一定的了解。

    细胞污染主要是指细胞培养液中混入对细胞生存有害的成分或细胞成分不纯。细胞培养时的污染主要包括3个方面：①微生物污染：如支原体、病毒、细菌和真菌。②化学污染：如重金属或其他非培养必需化学试剂。③细胞交叉污染。一、细胞污染的检测(一)真菌污染    在微生物污染中，以真菌污染最多。最常见真菌：烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌种类繁多，形态各异，但污染后很容易发现。肉眼可见，大多呈白色或最黄色小点漂浮于培养液表面；镜下观察呈丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错穿行于细胞之间。但是念珠菌和酵母菌呈卵圆形态，散在于细胞周边和细胞之间牛长。(二)细菌污染及其检测    大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞菌和葡萄球菌等是较常见的污染细菌。细菌污染后大多能改变培养液pH使培养液变混浊；多数情况下培养液短期内颜色变黄，出现明显污浊现象。也有的对培养液无肉眼可见影响，只在镜下观察发现菌体时才能感知污染。(三)支原体污染    支原体污染是细胞培养中最常见、不易被察觉并可以干扰实验结果的一种污染。细胞受支原体污染后，多数细胞无明显变化，或有微细变化却由于传代和换液而被缓解。外观上往往给人以“正常”的感觉，实则污染细胞会受到多方面潜在的影响，如细胞变形、抑制细胞生长。    不同的微生物污染对细胞的影响有差别，检测方法也不尽相同：可以通过目测、显微镜观察、电镜检查、微生物培养实验、免疫学和分子生物学等方法进行确定。二、细胞污染的排除    培养的细胞一旦被微生物污染，应及时处理。通常选高压灭菌被污染的细胞，然后弃掉。如果有价值的细胞被污染，并且污染程度比较轻，可通过及时排除污染物，挽救细胞恢复正常。常用的排除微生物污染方法有如下几种：(一)抗生素排除法    抗生素是细胞培养中杀灭微生物的主要手段。一些有价值的细胞被污染后，需用抗生素挽救，在这种情况下，可采用5～lO倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换人常规培养液。 (二)加温除茵    根据支原体耐热性能差的特点。有人将受支原体污染的细胞置于4l℃中作用5～10h(最长可达18h)以杀灭支原体。但41℃对培养细胞本身也有较大影响，故在处理前，应先进行预试验。确定m限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间。(三)动物体内接种    受微生物污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔，借动物体内免疫系统消灭污染的微生物，肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出再进行培养繁殖。(四)与巨噬细胞共培养    在良好的体外培养条件下巨噬细胞可存活7～10d，并可分泌一些细胞生长因子支持其他细胞的克隆生长。与体内的情况相似，巨噬细胞在体外培养条件下仍然可吞噬微生物并将其消化。利用96孔培养板将极少量的培养细胞与巨噬细胞共培养，可以在高度稀释培养细胞、极大地降低微生物污染程度的同时，更有效地发挥巨噬细胞清除污染的效能。本方法与抗生素联合应用效果更佳。

目前国内外均有成功分离羊水来源干细胞的报导，ELISA试剂盒大多是利用羊水细胞贴壁的特点通过多次传代的方法获得干细胞。Tsai MS 等采用两步培养法从孕中期羊水中成功分离出具有MSCs 特征的干细胞。随后De Coppi 等通过免疫磁珠方法分离出c － Kit （ CD117） 阳性细胞，这些细胞在体外增殖迅速，可以形成稳定的细胞系，他将这些细胞命名为羊水干细胞。此外通过克隆化培养的方法也可以从羊水中获得干细胞。ELISA试剂盒从现有研究情况看来，目前尚未形成统一的羊水干细胞培养体系。本实验采用贴壁法分离获得羊水细胞，培养细胞使用低糖DMEM 培养基。收集的20 例羊水标本中有17 例原代培养成功，并获得可以持续传代的稳定细胞系。培养的羊水细胞体外增长迅速，ELISA试剂盒倍增时间约36h。流式细胞仪检测显示细胞表达CD29、CD44、CD105 等间充质干细胞表面标志，不表达造血干细胞表面标志CD45 和CD133。RT － PCR 的结果表明分离获得的干细胞表达Oct － 4 和Nanog 基因，且不同代的细胞间均有表达。Oct － 4 和Nanog 被认为是干细胞多能分化的主要调节因子，干细胞分化后其表达立即下调。以上结果与文献报道一致，表明羊水细胞经体外培养扩增可以得到具有MSCs 性质的干细胞。

1．IGSF的结构特点 IGSF的成员均含有1～7个Ig样功能区，第个Ig样功能区约含100（70～110）个氨基酸残基，功能区的二级结构是由3～5个股反平行β折叠股各自形成两个平行β片层的平面（anti-paralle β-pleatedsheet），每个反平行β折叠股由5～10个氨基酸基组成，β片层内侧的疏水性氨基酸起到稳定Ig折叠的作用，大多数功能区内有一个二硫键，垂直连接两个β片层，形成二硫键的两个半胱氨酸间有55～75个氨基酸残基，使之成为一个球形结构，肽链的这种折叠方式称为免疫球蛋折叠（Ig fold）。根据IGSF功能区中Ig折叠方式、两个半胱氨酸之间氨基酸残基的数目以及与IgV区或C区同源性的程度，IGSF功能区可分为V组、C1组和C2组。（1）V组：V组功能区的两个半胱氨酸之间含65～75个氨基酸残基，有9个反平行β折叠股，如IgH链和L链V区，TCRα、β、γ、δ链V区，CD4v区，CD8α、β链V区，Thy-1,pIgR和分泌成分（SC）N端四个功能区，CEAN端第一个功能区，PDGFR靠近胞膜的功能区等。（2）C1组：又称C组。C1组功能区二个半胱氨酸之间约含50～60个氨基酸残基，有7个β折叠股，如IgH链和L链C区（γ、δ和α链的CH1～CH3或μ和ε链的CH1～CH4），TCRα、β、γ、δ链C区，MHc Ⅰ类分子重链α3功能区，β2M，MHCⅡ类分子α2和β2功能区，CD1、Qa和TL靠近胞膜功能区等。（3）C2组：又称H组。C2组功能区的氨基酸排列的顺序类似V组，但形成二硫键的两个半胱氨酸之间所含氨基酸残基数约为50～60，有7个β折叠股，这种结构介于V组和C1组之间，如CD3γ、δ和ε链，CD2和LFA-3（CD58），pIgR靠近胞膜功能区，FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ、FcεRⅠα链、FcαR，ICAM-1，CEA第2至7个功能区，IL-6R、M-CSFR、G-CSFR、SCFR。PDGFR第1至4功能区，以及N-CAM、CD22、CD48分子等。

乳腺癌晚期疼痛治疗有哪些妙招？癌症的主要症状之一是疼痛。晚期乳腺癌患者的疼痛很严重。那么你知道日常生活中，对于晚期乳腺癌有哪些止痛妙招呢？乳腺癌最佳治疗方法有哪些？晚期乳腺癌患者的疼痛很严重，止痛的方法很多，如药物控制、手术、神经阻滞、针灸、放松技术、皮肤刺激等。一。药物治疗1首先应考虑阿斯匹林、扑尔息痛等普通镇痛药。这些药物多数足以止住患者的疼痛，尤其定时服用，可避免疼痛的发生。2一般镇痛药无效时，可用杜冷丁和吗啡等麻醉剂，最近国家已对使用此类药的剂量有所放松，可有效地止癌痛。二。手术治疗手术止痛法是切断那些向大脑传递疼痛刺激的神经通路。做法是脊神经根切断术或脊髓束切断术。手术后，疼痛消失，冷热感和压力感也随之消失。手术时，必须向患者及家属交待清楚。三。神经阻滞止痛将药物注入神经或神经周围，阻止神经传导疼痛。局部麻醉剂加皮质激素应用于暂时止痛，酚和乙醇注射后，止痛时间可延续较久。其副作用是患区失去一切知觉。四。针灸针刺有一定的麻醉作用，对晚期乳腺癌患者也有一定的止痛作用。五。注意力分散法调动患者的积极性，把注意力分散、转移到其他方面，而不去注意疼痛。这种方法有时能止住最剧烈的疼痛。六。皮肤刺激法运用摩擦、温度变化、加压等方法刺激皮肤，使皮肤神经末梢兴奋起来，以使痛感受到阻滞而减轻。

目前在临床中使用最多的细胞免疫治疗疗法主要是DC治疗和CIK治疗：DC治疗对肿瘤治疗的原理　　①DC细胞可以高表达MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子，MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽-MHC分子复合物，并递呈给T细胞，从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+Thl反应。同时，DC还通过其高表达的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T细胞活化所必须的第二信号，启动了免疫应答。　　②DC与T细胞结合可大量分泌IL-12、IL-18激活T细胞增殖，诱导CTL生成，主导Th1型免疫应答，利于肿瘤清除;激活穿孔素P颗粒酶B和FasL/Fas介导的途径增强NK细胞毒作用;　　③DC分泌趋化因子(Chemotactic Cytokines， CCK)专一趋化初始型T细胞促进T细胞聚集，增强了T细胞的激发。保持效应T细胞在肿瘤部位长期存在，可能通过释放某些抗血管生成物质(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影响肿瘤血管的形成。上述CCK进一步以正反馈旁分泌的方式活化DC，上调IL-12及CD80、CD86的表达;同时DC 也直接向CD8+T细胞呈递抗原肽，在活化的CD4+ T细胞辅助下使CD8+ T细胞活化，CD4+ 和CD8+T细胞还可以进一步通过分泌细胞因子或直接杀伤，增强机体抗肿瘤免疫应答。　　CIK治疗对肿瘤治疗的原理　　①CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐.实现对肿瘤细胞的裂解;　　②通过诱导肿瘤细胞凋亡杀伤肿瘤细胞;　　③CIK细胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子;　　④CIK细胞回输后可以激活机体免疫系统，提高机体的免疫功能。

 在不久的将来，医生们或许可以用个体化疫苗来治疗某些癌症患者，刺激他们的免疫系统攻击恶性肿瘤。一项新研究，让这种疗法向着现实又迈近了一步。    像流感疫苗一样，开发中的癌症疫苗目的在于能够向免疫系统发出警报，使之警戒危险入侵者。并非让免疫系统为潜在的病原体攻击做好准备，这些疫苗将帮助关键免疫系统识别已存在于人体中的癌细胞的独有特征。    临床试验中，对黑色素瘤患者进行个体化癌症疫苗评估。此外，研究人员也在致力于利用这些疫苗来对抗乳腺癌、脑癌、肺癌和头颈部癌症，在未来的一到两年内预计还将启动其他的临床试验。     新研究将焦点放在了癌症和免疫系统上，科学家们在计算机模拟、细胞培养物和动物模型中测试了这些研究阶段的疫苗。结果显示，这些疫苗能够使免疫系统破坏或缓解相当数量的肿瘤。例如，疫苗治愈了近90%罹患一种晚期肌肉癌症的小鼠。    构建个体化疫苗从获得来自患者肿瘤和正常组织的DNA样本开始。研究人员对DNA进行测序鉴别出一些突变癌基因，这些基因生成的蛋白质版本只存在于肿瘤细胞之中。随后他们对这些蛋白质进行分析确定哪些最有可能被T 细胞识别及攻击。再将这些蛋白质的部分整合到给予患者的疫苗中。    多年来对于癌症遗传学以及免疫系统与癌症互作的研究，使得这一疫苗策略变为可能。     这一技术是受到科学家们称之为检查点阻断（checkpoint blockade）的一种疗法的启发。这种以免疫为基础的癌症治疗方法利用了存在于许多肿瘤但却被癌细胞关闭的免疫T细胞，其曾在一些临床实验中成功地对抗了晚期肺癌和皮肤癌。    癌细胞通过激活称作为检查点系统的安全机制来关闭T细胞。这一系统可帮助阻止免疫系统攻击机体自身的组织。     检测点阻断可松开T细胞的刹车，释放它们对肿瘤的破坏能力。但这种方法也提高了相同的免疫系统错误攻击健康组织的机会，可导致严重的自身免疫疾病。    研究人员认为找到一些途径鉴别出突变肿瘤蛋白，以它们作为重激活的T细胞的特异靶标来攻击肿瘤更为安全。我们相信将这些蛋白质整合到疫苗中只会释放T细胞去攻击肿瘤，到目前为止，我们的测试非常的成功。

1 气象节律　　影响健康和致人生病的因素,包括内与外两个方面,中医称为内伤而外感.人是大自然长期发展变化的产物,"以天地之所生,四时之法成.",其健康与自然、气象密切相关.先人很早就提出"天人相通"、"天人相应"、"天人合一"的思想.气象、四季的寒暑更替,一日的昼夜循环等,无不对人的生命及健康产生或隐或显、或大或小的影响.因此,人须遵古人所教,"提挈天地"、"和与阴阳,调与四时"、"制天命而用之",趋利避害,顺应天气的规律,与自然统一起来.　　关于气象与健康的关系,古今中外多有论述.吴珂等[2]曾着专文介绍医疗气象学,将近代医疗气象学的肇始大致确定在 20 世纪 30 年代,同时强调中国医学气象学理论萌芽于春秋战国时代.《黄帝内经》是其集大成之作.　　《辞海》对医疗气象学解释为:"由于病原微生物的形成、传播和人体抗病能力等均与气象和季节性有关,因此,研究医疗气象学对分析病因、预防 或治疗气候 性或 季节性疾病 有重要意义."[3],上述不太长的描述中竟两次涉及到"季节性"一词.　　古人很早就发现,自然界、天气现象丰富多彩、千变万化,但其中有联系、有规律、有循环.　　如中国民间久有"发尽桃花水,必是旱黄梅"、"腊月下雪少,来年雨水多"等谚语.中医认为,天气的不同与变化源于不断运动的"六气",即风、寒、暑、湿、燥、火,它们按照四季和昼夜的规律变化,春温、夏热、秋凉、冬寒、昼温夜凉等,往复循环,有节有律.一般称相距一定时间的某些天气现象过程中的联系与规律为"气象节律".　　"一定时间"可以是四季、十二个月,也可以是一昼夜十二时辰,也可以是更长时间的所谓"环流型节律"等.气象节律反映了医疗气象学与时间病理学之间的密切关系,在中医中,气象医学与时间医学也在本质上同根同源.　　中医中的很多认识,正如《研究》所说"缺乏现代科学理论",例如着名的"五运六气"与子午流注学说等,本源自中国哲学、易学的象数或谶纬理论,没有高深的天文、易学等造诣的医家难以推算和应用,在古代就褒贬不一,甚至被称为"杂学混滥,贻误后人",需要当代人批判地吸收.　　2 四季与健康　　以春季食疗为例.《内经·灵枢·本神篇》说:　　"智者之养生也,必须四时而适寒暑."这里四时是指四季.《四气调神大论》论述了春夏秋冬四季怎样调摄身体精神情绪,广泛涉及起居、劳动、处世、行为等方面,例如春季,书中具体说:"春三月,此谓发陈,天地俱生,万物以荣,夜卧早起,广步于庭,被发缓形."如果违背这一原则,就会"逆之则伤肝,夏为寒变,奉长者少."当代医疗气象学认为,春天是各种疾病的好发季节,除了伤风感冒、支气管炎,还有肺炎、流脑、白喉等流行病.春天鲜花盛开,还要防止"花粉病",花粉可引起过敏性皮肤病、上呼吸道炎症等.　　如得了感冒,春夏秋冬处方也不一样.如春季多用桑菊饮、银翘散,而夏季多用藿香正气散,秋天多用桑杏汤,冬季多用麻黄汤、桂枝汤等.　　宋代刘词《混俗颐生录》说:"凡春中,宜发汗、吐利、针灸,宜服续命汤、薯药丸甚妙."药当然是疗病与促进健康的重要手段,但不是唯一手段,甚至在一定条件下也不是最佳手段.如古医书《老老恒言》中"以方药治已病,不若以起居饮食调摄于未病"的论述,充分阐述了饮食调理的优越性."中国早在周代就设有"食医"的官职,专门负责以食物来养生和治病.《内经·素问·五常政大论》中也讲到:以药(毒)治病,病可去少或多,但"谷肉果菜,食养尽之,"后人称此为食疗.食与疗皆与气象、四季相关,例如:春季植物生长较快,果蔬渐多,多食新鲜的果蔬,有益健康.如苜蓿、柑橘富含大量维生素、 植物纤维和多种微量元素;枸杞的嫩头具有补肝明目、滋阴清热作用,功同枸杞子,尤其适宜于肝肾阴亏、目糊便秘,内热较重的人.当然进食亦如服药,要讲"辨证",因人而异,如竹笋和毛笋鲜美可口,可以开胃通便,但有过敏性疾病如哮喘、皮肤过敏的人,就要慎食.　　3 月、日与健康　　以夏秋食疗为例.饮食营养是人气血生化之源,历代医家都重视食疗,如唐代大医家孙思邈提出"安身之本,必资于食,不知食宜者,不足以存生"的论断.他的主要思想包括饮食有节,少荤多菜和注意饮食卫生等.　　饮食有节,即不暴饮暴食,"不欲饥而食,不欲渴而饮";少荤多菜,即多吃蔬菜,肉食必新鲜无异味,乳酪、酥、蜜最益于人,可以长期服用.特别是牛奶,因其性平,补血脉,益心气,长肌肉,可令人身体健康,皮肤润泽,面目光悦,正气充足,精力充沛;注意饮食卫生即吃饭时应当细嚼,不粗吞食生物,食后应多次漱口,保持牙齿清洁.进食时应除去烦恼忧愁,心情愉快.　　食物还要冷热适度,热无灼灼,冷无冷齿等.如果四季如一年中的四个乐章,那么每季中的三个月则如其中的段落,孙氏着有《孙真人摄养论》,继承和发展《内经》与《月令》中的观点,详细地说明了一年四季中每月的食疗法,开后世逐月疗养的先河.其主要内容大多切实可行(其中也有个别不尽科学之处).例如:夏季,四月肝气渐衰,心气渐盛.宜多酸少苦,补肾助肝,调养胃气.少食鸡肉,鳝鱼、大蒜、生薤等物.五月肝气衰弱,心气正旺.宜少酸多苦,补肝益肾.　　同时宜早睡早起,固密精气不使发泄.慎避北风,勿居湿地.六月肝气微,脾气独旺.宜少苦多咸,节制肥甘,补肝助肾,益筋骨.同时避免冷水浸泡手足,勿食葵及茱萸,防止气壅发生.　　继孙氏以后,以月为段落讲健康方法的着作,还有宋代韦行规的《保生月录》、姜蜕的《养生月录》、姚称的《摄生月令》,元代瞿佑的《四时宜忌》、周守忠的《养生月览》等.　　至明代,很多医家则将气象节律与健康的关系具体到了每一天,如罗洪先编《万寿仙书》:"季秋之月,草木零落,众物伏蛰,气清风暴,为朗无犯,朗节约生冷,以防疠病.九日采菜梗插鬓,群恶气而御初寒"、"二十一日,取枸杞煎汤淋浴,令人光泽不老"等.　　4 十二时辰与健康　　以辰时为例.气象节律的变化,更短的周期是一天中的昼夜交替与二十四小时,古人一般将其分为十二时辰,《内经》中已有"旦慧、昼安、夕加、夜甚"的说法:"春生、夏长、秋收、冬藏,是气之常也,人亦应之.以一日分为四时,朝则为春,日中为夏,日入为秋,夜半为冬.朝则人气始生,病气衰;故旦慧;日中人气长,长则胜邪,故安;夕则人气始衰,邪气始生,故加;夜半人气入脏,邪气独居于身,故甚也".　　明代道士、养生学家程羽文(石室道人)所着《二六功课》则专论一天十二时辰的健康方法,可谓独具一格:"但令二六时中,随方作课,使真气流行,身无奇病".具体如辰时:"夙兴,整衣襟正坐,明窗中调息受天气,进白汤一瓯,勿饮茶,栉发百余遍,能疏风清肝明目,去脑中热.　　盥漱毕,早餐宜粥、宜淡、素、饱,徐行百步,以手摩腹,令速下食.天气者,亥子以来之真气也.静而清,喧而浊,故天气至巳午而微矣".　　无论是年、季、月或日时的周期性,此文都是基于其变化的规律性、有序性而立论,而实际上这只是气象的一个方面.大家都知道一个简单的事实,气象预报所面对的最大难题和挑战之一是:大气变化的难以预测性.如《研究》所说:"为了对未来气候变化的影响作出评估,必须预测全球气候变化的趋势.由于这种预测包含有许多不确定性,只能在一定条件或假设下分析平均的变化趋势,这也被称为气候变化情景或预估"[1]100.　　另外,影响健康的除外在气象这一重要因素外,另一个同样重要的因素是人体自身内在因素,它们同外因一样,也有正常有序的节律,同时也会出现反常和失律,如内伤七情而变化无常、疲劳过度而力乏气耗等.　　上述内外失律与人体健康的关系可能更复杂,但这些已不属于此文探讨的问题.　　5 结语　　气象节律与健康关系本质上是天人关系,"学不究天人,不足以谓之学".作为一名气象医务工作者,只有从一定高度上认识和把握普遍关系,知天知人,才能真正履行好本职,进而向"与天地合其德,与日月合其明,与四时合其序"的境界和"天人气象"方面努力.