2013-04-08 19:54
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ELISA常见问题 ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。 1.样品稀释 2.试剂盒平衡 3.样品和试剂的混匀 4.加样 5.温育 6.洗板 7.边缘效应 8.显色 9.比色
从1949年美国College of American Pathologists(简称CAP)首先开始研究临床实验 室室内质量控制(简称质控)问题,美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于 使用质控图的实验室室内质控,临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。 到70年代,实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理,推行Good Laboratory Parctice(简称GLP)。进入80年代末期,GLP的统一标准产生了,发展 到\"认证实验室\"管理阶段。 全面质量管理的宗旨在于预防差错的产生。质控图的统计学质控的目的是检出差错。 统计学的实验室室内质控是全面质量管理中的一个重要环节。 本章节主要介绍免疫学检验的统计学室内质控方法。因为ELISA是目前临床上最常用 的一种免疫学检验方法,就以ELISA检验为例,介绍一下有关问题。 卫生部临床检验中心免疫质控室从1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检验的质 量评价活动,一直采用这一套质量评价方法,并在实践中不断实践、提高和完善,希望能 找出一条适合中国国情的,行之有效的质量管理的道路。
酶联免疫吸附测定(ELISA)操作要点 1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
ELISA中的试剂-免疫吸附剂 临床检验中一般采用商品盒进行测定。ELISA中有三个必要 的:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。 完整的ELISA盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或的固相载体(免疫吸附剂); (2)酶标记的抗原或(结合物); (3)酶的底物; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液; (7)酶反应终止液。