ELISA常见问题

ELISA常见问题 ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。 1．样品稀释 2．试剂盒平衡 3．样品和试剂的混匀 4．加样 5．温育 6．洗板 7．边缘效应 8．显色 9．比色

ELISA实验质量控制问题

从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验 室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于 使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。 　　到70年代，实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理，推行Good Laboratory Parctice（简称GLP）。进入80年代末期，GLP的统一标准产生了，发展 到\"认证实验室\"管理阶段。 　　全面质量管理的宗旨在于预防差错的产生。质控图的统计学质控的目的是检出差错。 统计学的实验室室内质控是全面质量管理中的一个重要环节。 　　本章节主要介绍免疫学检验的统计学室内质控方法。因为ELISA是目前临床上最常用 的一种免疫学检验方法，就以ELISA检验为例，介绍一下有关问题。 　　卫生部临床检验中心免疫质控室从1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检验的质 量评价活动，一直采用这一套质量评价方法，并在实践中不断实践、提高和完善，希望能 找出一条适合中国国情的，行之有效的质量管理的道路。

酶联免疫吸附测定（ELISA）操作要点

酶联免疫吸附测定（ELISA）操作要点 1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

ELISA中的试剂－免疫吸附剂

ELISA中的试剂－免疫吸附剂 临床检验中一般采用商品盒进行测定。ELISA中有三个必要 的：免疫吸附剂、结合物和酶的底物。 完整的ELISA盒包含以下各组分： （1）已包被抗原或的固相载体（免疫吸附剂）； （2）酶标记的抗原或（结合物）； （3）酶的底物； （4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）； （5）结合物及标本的稀释液； （6）洗涤液； （7）酶反应终止液。

做好免疫组化染色必须注意的问题

做好免疫组化染色必须注意的问题 组织脱水必须彻底干净 组织块取材不能太大过厚，才能较好地完成脱水的过程。如果取材太厚，在较短的时间内脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败，或者由此反复操作，造成年人力物力的浪费，造成病理报告的延期发出等。因此，对取材的要求是除了要求要有艺术性外，即平整、外观好看，还要求适中。

ELISA原理与分类

ELISA原理与分类 1.　ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2.　ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的：（1）固相的抗菌素原或抗体，即\"免疫吸附剂\"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为\"结合物\"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型： 2.2.1　双抗体夹心法测抗原