高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2

高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2

高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 全自动的筛选流程可以在更短时间内筛选更多克隆。经过已有用户证明，可以显著提高筛选效率、克隆产量，并节省时间和成本。

主要特性：

1.更短时间筛选更多克隆

2.优质图像结合智能化分析软件

3.准确、自动化克隆挑选，避免有限稀释,

4.增加生物治疗药物细胞系的产量

创新的筛选流程更少时间筛选更多克隆：

缩短细胞系和抗体开发时间：

挑取表达水平更优的细胞克隆：

1.使用半固体培养基培养细胞，获得独立的单个细胞克隆

2.高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以快速筛选上万个克隆

  - 大大增加找到更优克隆的概率

  - 白光成像用于识别克隆位置

  - 荧光成像用于定量表达水平

3.多种检测方法可选

  - 不用标记，直接检测杂交瘤分泌的 IgG 或抗原特异性 MAbs

  - 检测加入标记的重组蛋白或表达的荧光标记蛋白

4.客观的成像分析，使用户可以准确筛选到更优表达水平的克隆，并尽可能早的排除表达水平低的干扰克隆

5.根据克隆表达水平自动排序，并准确、自动化挑取克隆，避免有限稀释的繁琐和出错几率。

满足药品监管的要求：

针对人 IgG 的项目，使用不含动物源成份的试剂：CloneMedia，CloneMatrix，Recombinant CloneDetect 以及 XP media。

确保形成独立的单克隆：

使用 CloneMedia 半固体培养基培养细胞，有利于增加铺板效率和形成独立单个克隆，有利于克隆识别和挑取。

1.基于多种基础培养基，针对 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 的应用进行专门优化

2.适用于多种细胞，经过优化和验证的专用培养基可选：Per.C6，CHO-s，CHO DG44，HEK，CHOK1SV，杂交瘤以及骨髓瘤细胞等

3.有标准成份，无动物源成份以及无谷氨酰胺成份等多种培养基可选,

4.使用 CloneMatrix 甲基纤维素浓缩液，用户自己配制特殊用途培养基

CloneMedia 培养基获得的克隆，使用 CloneSelect Imager 成像

不同于传统的培养方法，半固体培养基的细胞铺板密度更高，并且可以保证形成独立的单个克隆，有利于下一步单克隆的挑取。

一个成熟的培养方法

使用半固体培养基培养细胞形成克隆，这种方法已经非常完善：

“EASIER TO PLATE OUT LARGE NUMBERS OF CELLS AND TO RECOVER MANY INDEPENDENT HYBRIDOMA CLONES”

A simple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas for the production of monoclonal antibodies (J. Immun. Methods (1982) 50, 161-171)

目标蛋白检测：

使用基于荧光的方法检测分泌蛋白

荧光耦联的 CloneDetect 检测试剂可以原位检测分泌表达的人、小鼠以及大鼠抗体。因为克隆本身不需要产生荧光，所以不需要对目标蛋白加入额外荧光标记分子。

1.根据实验检测要求以及表达蛋白类型，选择合适的检测试剂，比如 FITC 标记抗人检测试剂

2.加入液体检测试剂到半固体培养基

3.高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 对克隆进行成像、分析并根据所有克隆的荧光信号水平进行排序

检测方法的选择

检测分泌 IgG 的单克隆抗体

高质量成像，智能化分析：

成像

1.白光和荧光成像可以用于计算克隆的大小以及荧光强度（代表目标蛋白的表达量）。

数据显示：

1.软件根据克隆的荧光强度、大小等物理参数对克隆自动进行排序，得到所有克隆的 2D 柱状图表。

2.克隆的筛选和选取主要依据以下参数：

- 大小，边缘圆度以及克隆距离

- 根据荧光强度排序

- 用户可以通过软件中设置“proximity”的值，去掉距离太近的克隆

数据追踪：

1.软件自动将所有克隆的统计信息排列成表，可以随时导出想要克隆的信息

2.软件按照用户自定义的顺序挑取克隆到 96 孔板，并自动记录克隆来源、位置信息以及荧光强度等统计学参数

克隆挑取和转移：

1.用户可以根据成像数据和统计分析的结果自定义最终要挑取的克隆数目和挑取顺序

2.系统自动选择用户自定义的克隆，并将每个克隆转移到 96 孔目标微孔板，用于培养后进一步分析或克隆扩大培养

3.XP Medi a CHO Growth A 是针对 CloneMedi a CHO Growth A 半固体培养基专门优化，适用于挑取克隆进一步放大培养的液体培养基，可以获得更好的挑取后生长效果。

快速筛选特异性抗体克隆：

高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以从融合后自动化筛选，一步找到目标杂交瘤克隆；是一个高效的自动化筛选方法。

1.筛选更多克隆——发现更多的阳性克隆

2.实验过程更加快速高效，e.g.7-10 天可以筛选到 100-500 个特异性杂交瘤克隆

3.通过避免阳性克隆的丢失以及早期排除阴性克隆，大大节省下游工作时间和成本

4.原位筛选抗原特异性或者分泌 IgG 杂交瘤——适用于多种类型抗原分子（从 160 KD 的复合体蛋白到 2.6 KD 的磷酸肽）

快速检测抗原特异性IgG克隆

FITC 标记 60 KD 抗原

快速从退化克隆中筛选高产克隆

一些杂交瘤细胞系在 MAb 的产量方面退化严重，或者分泌性比较差。已有用户使用 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 从退化的克隆中成功恢复了高产克隆株。

增加生物药物细胞系的产量

高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 相比传统方法，可以在短时间内筛选更多的克隆，能够大大增加找到稀少的高产克隆的概率。通过下面的实例 (MedImmune LLC)，比较了传统的有限稀释和 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 的有效性。

更短时间筛选更多克隆

原位荧光显示高产细胞株，早期排除不需要的克隆

在工艺进一步优化前即获得高产克隆 (NS/O: 4-5 g/L，CHO: 5-6 g/L)

细胞系稳定性

表达量不稳定是细胞系筛选早期阶段的主要问题。高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以直观分析克隆的稳定性。

把筛选到的克隆铺到半固体培养基，4-7 天培养后，使用高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 进行成像分析，比较子代克隆和亲代克隆的表达量，验证克隆稳定性。也可以培养 7-14 天后，重新对亚克隆进行筛选。

经过两轮筛选之后稳定性细胞系数据