Hello! 大家好，我是小G。好久不见！在这个春暖花开的季节，我们的知识储备也要更新咯！  Western Blotting作为现代生物技术最普及的技术之一，得到了生命科学界广泛的认可。但对于实验操作者而言，因为其步骤较多，一个步骤的bug会导致整个实验立题和评估的逻辑混乱。       今天，小G就搜集了一些大家可能在实验中遇到的一些问题，给大家详细地阐述一下原因，并提供一些解决建议，让大家再也不担心Western 的操作步骤！ 第一部分：转印步骤中的问题 Q1: 小G，为什么我在转印后，在膜上检测的蛋白比较少，或是根本没有我的目的蛋白呢？ A1: 其实，造成这种情况的原因可能是多种多样的，对应的解决方法如下：原因一：凝胶与膜接触不好解决方案：确保转印时滤纸、凝胶、膜摆放位置正确并接触紧密，无气泡。转印后，凝胶可以用丽春红染色或者预染marker检查转印效率。转印中使用较厚的3MM, 17CHR或GB系列转印滤纸。     原因二：转印装置正负极摆放不对解决方案：确保膜处在阳极位置，凝胶在阴极。确保转印正负电极连接位置正确。     原因三：目的蛋白被其他高丰度蛋白掩盖，如白蛋白，IgG等。解决方案：去除高丰度蛋白。Q2: 我在膜上看到蛋白条带出现smear拖尾，这种情况应该怎么解决？A2: 出现这样的现象有两种可能：     原因一：转印过程过热解决方案：① 对于湿转：首先，确保转印槽中buffer没过转印模块；Buffer可先预冷或者在低温环境下进行转印；也可以降低转印电流电压，延长转印时间。②对于半干转：降低转印电流，不要超过0.8 mA/cm2；增加转印滤纸数量。     原因二：蛋白样品过量或者有杂质干扰，如脂类、核酸、IgG、白蛋白等。解决方案：使用GE相应的样品分级及除杂试剂盒，去除杂质。 Q3: 我的目标蛋白分子量比较小，转印的效率比较低，该如何提高转印效率呢？ A3: 可以检查以下几点来解决：      原因一：小蛋白在膜上结合量少。解决方案：使用蛋白结合能力更强的膜；增大SDS-PAGE凝胶浓度；使用小孔径印迹膜，如0.1um或0.2um Protran印迹膜。      原因二：转印buffer中残留的SDS 影响蛋白与膜的结合。解决方案：转印buffer中不要有SDS，转印前凝胶与转印buffer平衡至少15min以上。      原因三：转印buffer中甲醇浓度太低。解决方案：提高甲醇的浓度（15%-20%）。      原因四：蛋白结合时间不够。解决方案：调低电压，延长转印时间。 Q4: 我的目标蛋白分子量比较大，转印的效率比较低，该如何提高转印效率呢？      A4: 可以检查以下几点来解决：      原因一：甲醇浓度太高。解决方案：降低甲醇浓度至10%（V/V）以下。。     原因二：蛋白凝胶浓度太高。解决方案：降低凝胶浓度；也可以在转印buffer中添加0.1%SDS，促进蛋白溶解。（注意：SDS可以促进蛋白的溶解，但是也会破坏蛋白与膜的结合）。      原因三：蛋白结合时间不够。解决方案：调低电压，延长转印时间。      Q5: 我在进行半干转印时，发现转印的效率比较低，该如何提高转印效率呢？      A5: 发生这种情况的主要原因是电流未经过“三明治” 印迹膜/滤纸组合，我们可以通过以下方法来解决：首先确保滤纸、凝胶和膜的尺寸大小一致；其次，PVDF膜预先用甲醇浸泡，转印三明治先用转印buffer充分浸湿，最后一点要确认三明治中间无气泡和空隙。      好了，以上就是第一部分：转印步骤中的问题。在下一期，我们将给大家解答一些我们在标记和检测信号时遇到的一些问题以及解决方案。如有问题，您也可以联系我们GE产品线的所有技术支持。      那我们下期再见，Bye Bye。Amersham™ 品牌简介      20世纪40年代，Amersham（安马西亚,GE医疗生命科学的前身）开创了放射性同位素示踪剂产品，促进分子生物学的重大进展，最终创造分子生物学史上的里程碑，如DNA测序。      接下来的几十年间，Amersham继续为科学与医学做出重要贡献，如推出世界上第一款测量糖尿病患者的胰岛素水平的放射免疫分析试剂盒。Amersham创新传统为非放射性标记的发展做出重要贡献。1990年，Amersham ECL试剂成为第一个用于Western Blotting的化学发光底物，成为“化学发光”的代名词，至今文献引用排名第一。      GE 医疗生命科学提供广泛的Amersham化学发光、化学荧光与荧光检测的成像产品组合，成为业界的高质量和高可靠性的不二选择。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：    

        Biotage公司Isolera系列快速制备色谱产品，有别于其他厂家的是其并不追求高压力，低粒径填料，而是专注于如何更高效的取代繁琐的过柱子过程，为实验室操作人员节省更多的时间，为日益紧缺的实验室面积节省更多的空间。        Isolera系列one和four两款产品的最大压力虽仅为10bar，但是对于实验室中依靠人工搭建的简易过柱装备都可分离纯化的样品来说已经绰绰有余，将几个小时的实验过程，转化为十几分钟甚至几分钟完成。1-200ml/min的流速，最大上样量75（g或ml），满足绝大多数实验室的要求。        Isolera系列全系可配固定波长检测器、可变紫外波长检测器（200-400nm）、紫外可见检测器（200-800nm），自动收集馏分和废液，13、16、18、25mm多种试管供选择，满足不同的实验需要，10.4寸液晶显示屏，界面操作简单，并可外接无线鼠标，方便用户使用。       想了解更多Biotage快速制备色谱相关内容，请关注我们的公众号，常有更新哦！北京德泉致力于为客户提供高质量、高品质的技术与服务，打造全面实验室解决方案，至臻技术，无忧服务，只为让您无忧~无虑。     

    如上图，利用流式细胞仪中前向散射光（FSC）能分辨细胞的大小。前向侧向的使用有时会被我们忽略，笔者在自我学习、追踪最新文献过程中在一篇17年最新的Nature上看到了巧用FSC的实例，分享给大家。 mTORC1是调节细胞对营养物质响应的重要蛋白复合物，在细胞“饥饿”条件下，该信号通路会受到抑制，使细胞进入“节衣缩食”的状态。这篇natrue发现细胞感受“饥饿”抑制mTORC1信号和SZT2蛋白相关，沉默这个蛋白可解除“饥饿”状态下mTORC1所受的抑制，细胞继续“暴饮暴食” - 如上图：“饥饿”状态下SZT2沉默组（sgSZT2）较对照组（sgGFP）细胞更“胖”（FSC更大）。 参考文献：[ 1 ] Min Peng, Na Yin, Ming O. Li. SZT2 dictates GATOR control of mTORC1 signalling [J]. Nature, 2017.         想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦！北京德泉致力于为客户提供高质量、高品质的技术与服务，打造全面实验室解决方案，至臻技术，无忧服务，只为让您无忧~无虑。  

    多功能酶标仪又称多功能微孔板检测仪，可对以微孔板为体系的实验提供多种不同模式的检测。相对于单功能酶标仪来说，多功能酶标仪至少可提供"吸收光"、"荧光"、"发光"三种不同的检测模式。目前，较为热门的Biotek多功能酶标仪产品包括Synergy HTX、Synergy H1、Cytation3和Cytation5。本文首先对Synergy HTX进行简要介绍。Synergy HTX功能特点        Synergy HTX 多功能微孔板检测仪是一款小巧紧凑，高性价比的检测产品。它可以完成基于6-384孔板和Take3 微量检测板的样品检测。除了前面提到的三种基本检测模式，Synergy HTX还可完成"时间分辨荧光"、"荧光偏振"、"荧光共振能量转移"等高级荧光检测实验。由于采用了独特的双光路设计，所有检测模式都具有优异的检测性能。吸收光检测采用氙灯和单色器可以完成200-999nm，1nm步进的波长选择和检测，无需更换滤光片。荧光检测则使用卤素灯和滤光片配以PMT检测器，用以获得最好的检测灵敏度。        Synergy HTX 还配备了BioTek专利的 4-Zone 温控模块，最高温控可达50 oC,可选配的双自动加样器，可以满足快速加样分析的需求，另外线性和轨道震荡模式则能满足更为广泛的分析需求。        Synergy HTX功能强大,简单易用的 Gen5数据分析软件用于数据后采集分析和报告的导出。如果想要增加自动化工作流程的操作通量, BioTek的BioStack可以和SynergyHTX进行对接，一次最多可完成50块标准微孔板的操作。由于其便捷、多样和价格合理，SynergyHTX是您理想的多功能微孔板检测仪。Synergy HTX应用        Synergy HTX是Biotek较为初级的多功能酶标检测产品，但已足以支撑包括生物化学、活细胞分析和固定细胞样品检测在内的多种科研与生产需要:        1. 蛋白质组学研究：蛋白相互作用，酶动力学检测、酶活性相关分析等。        2. 药物研究和筛选：GPCR、激酶、核受体、cAMP和cGMP、钙流、CYP450代谢途径、药物耐受途径研究、药物毒性评估等。        3. 分子检测：动植物检验检疫、食品资源评价、临床检测、血清分析、成分测定、环境监测。        4. 功能基因组学研究：核酸/蛋白质的光吸收定量和荧光定量、基因表达调控研究、GFP、GUS、虫荧光素酶、信号转导通路研究、基因分型及突变检测等。        5. 细胞学研究：细胞浓度及细菌生长密度测定、细胞增殖、细胞毒性、细胞吞噬、细胞吸附、细胞渗透、细胞迁移、细胞凋亡、细胞转染研究等。番外篇    美国伯腾仪器有限公司成立于1968年，总部位于美国Vermont，负责全球的销售、服务和区域支持。美国伯腾仪器有限公司产品进入中国市场近20年，凭借其先进的仪器设计和过硬的产品质量一直牢牢占据所属领域的领先位置。不同要求的实验者只要涉及微孔板的实验，均可以在BioTek找到合适的工具。    欲了解更多仪器内容，欢迎来电咨询或扫描公众号二维码留言咨询，北京德泉期待您的到来！北京德泉致力于为客户提供高质量、高品质的技术与服务，打造全面实验室解决方案，至臻技术，无忧服务，只为让您无忧~无虑。  

       当当当，敲黑板上课喽。上一篇文章中我们着重地介绍了Binder二氧化碳培养箱在污染控制上的独创技术，忘记的同学可以点击这里复习哦：http://www.instrument.com.cn/netshow/sh102433/news_213157.htm       其中最大的技术特点就是独特的内腔无风扇设计，就是长这样哦，干净整洁高端大气有木有~就此，我们也留了一个课后题--箱内不使用风扇，二氧化碳该如何混匀呢？大家都有答案了么？       木有也没有关系，现在，我们来公布答案喽！答案就是文丘里二氧化碳预混头（见下图）。嗯？有点懵，文丘里原理是个什么鬼呢？看这里，有解释：文丘里效应，也称文氏效应。这种现象以其发现者，意大利物理学家文丘里（Giovanni Battista Venturi）命名。该效应表现在受限流动在通过缩小的过流断面时，流体出现流速增大的现象，其流速与过流断面成反比。而由伯努利定律知流速的增大伴随流体压力的降低，即常见的文丘里现象。通俗地讲，这种效应是指在高速流动的流体附近会产生低压，从而产生吸附作用。利用这种效应可以制作出文氏管。       对，BINDER二碳箱就是用这样一个管子，让二氧化碳气体（上图中绿色箭头）从一个口径大的开口进入一个口径小的通道。同时这个细通道左右两侧再各打一个小口，这样就产生压差从而起到吸附作用，腔体内空气就被吸引（上图中蓝色箭头）也进入通道。二氧化碳和空气相遇后进行充分混合，混合完全后直接进入腔体，从而避开了传统风扇进行混匀的方式。也就是说，彻底摆脱风扇这个污染潜力股，带来了如下好处：  q  最大程度防止了污染；  q  快速高效的通入气体，加速了CO2恢复时间 ；  q  使得CO2 均匀分布（不依赖风路）；       好吧，现在想想，为BINDER的技术点赞，为科学的魅力倾倒。德泉致力于为客户提供高质量、高品质的技术与服务，想客户之所想，急客户之所急。至臻技术，无忧服务，只为让您无忧~无虑。欲了解更多仪器内容，欢迎来电咨询或扫描公众号二维码留言咨询，北京德泉期待您的到来！ 

        众所周知，在细胞体外培养的过程中，二碳箱为其提供几个指标的保障，即如下图：     体外培养技术已经有几十年的发展，对于前几个指标如温度、CO2浓度及湿度的控制大同小异，其重点就落在在如何减少污染控制上。作为实验室箱体的世界龙头企业，Binder二碳箱在污染控制上做了很多创新和完善:第一、独特的无内置风扇设计，防震动和污染：        市场上传统的二氧化碳培养箱分水套式和气套式，通常是使用电热丝加热控制温度，通过水或气体填充箱壁周围并循环导热。为确保均一性，箱内腔会引入风扇，从而使气体温度和浓度通过风道循环达到相对均一。提到风扇，问题来了：        1. 风道残留的颗粒物无法清理，势必会带来污染；另外，腔内气体循环通过HEPA膜过滤细菌，而非杀灭细菌，即微生物仍然存在于HEPA膜中。所以，在箱体培养细胞的同时，也促进了HEPA中微生物的滋生。而HEPA过滤器内置于腔体，极易导致腔体内污染。       2. 风扇的震动，将会影响细胞静态生长；       3. HEPA也是一种昂贵的耗材，至少6个月更换一次，长期下来也是一种不低的耗材成本；       Binder二碳箱彻底移除了风扇，从源头上解决了如上一系列问题。同时，还提高了腔内使用空间，增加了一层样品摆放平台。第二、一体成型无缝焊接内腔设计，无死角，且无支架，提高清洗消毒的彻底性，防污染更强。第三、独有的180°C高温灭菌，符合多类国际灭菌标准，简单粗暴杀死孢子，为实验持续和有效性保驾护航；第四、独有Permadry™双盘加湿系统（CB系列），可100%有效防止冷凝水，有效杜绝细菌滋生环境的产生；第五、标配的IR红外感应探头（可耐180℃高温消毒），在保证数据更精确的同时，为污染再增加一道防线。 如果客户会质疑，箱内不使用风扇，二氧化碳该如何混匀呢？Binder如此专业，自然有它的套路啦。我们在下一讲中再做详细介绍，敬请期待,欢迎来电咨询。  

春天的脚步进了，又到了万物生长的季节。 G课堂带来全新专题，Biacore™！众所周知，验证分子间相互作用是药物开发、质量控制的关键步骤，Biacore™利用表面等离子体共振（SPR）技术允许对生物分子的相互作用作实时，无标记检测，并通过响应值来描述相互作用状态的变化。都说Biacore™的结合解离曲线是一条非常美丽的曲线，相信如果你在自己的Paper上附上一张优美无比且说服力100%的曲线，不仅能增加你整篇文章的颜值，跟能让读者和编辑对你的文章产生好感！那么这条曲线的意义以及所反映出的信心我们该如何解读呢？如何显示表面等离子体共振数据？         Biacore™系统监测两个分子之间的相互作用，其中一个连接到传感器表面，另一个在溶液中是自由的。传感图是响应对时间的图，显示了相互作用的进展。该曲线在分析过程中直接显示在计算机屏幕上。传感图中显示什么？        如下图所示吗，在样品注射期间（Sample段），可以在传感图中观察到阳性响应，因为分析物（在基于Biacore™的测定中溶液中的相互作用组分）与配体（在基于Biacore™的测定中连接到传感器表面的相互作用组分）结合。在解离期间（Running buffer重新充满通道）响应降低。分析周期完成后，再生溶液（Regeneration solution段）通过传感器芯片，去除结合的分析物，为下一个分析周期做准备。典型的传感图，曲线下方的条表示通过传感器表面的溶液。在相互作用的过程中我们可以获得哪些数据？所有数据都会在传感图中呈现，可以提供一下几种数据：l   结合力分析物是否会和配体发生相互所用？l   特异性相互作用的配体在多大程度上可以和其他分子发生交叉反应？l   浓度有多少已知的分子是存在和有活性的？l   动力学结合和解离的速率是多少？l   亲和力分析物与配体的结合力到底有多强？如何解释传感图？传感图的形状给出了关于相互作用的信息。下面显示了如何解释传感图形状的几个示例。1. 与目标分子结合/不结合                                     与目标分子结合                              与目标分子不结合2. 快速结合/解离与慢速结合/解离                                           快速结合解离                             慢速结合解离 3. 强相互作用与弱相互作用                                            强相互作用                               弱相互作用  4. 多步结合，响应值变化/多步结合响应值无变化         多步结合，相应值变化                 多步结合，响应值无变化  OK，相信现在你已经明白如何来解读Biacore™的结合解离曲线了，因为Biacore是一种通用仪器，所以将Biacore应用于何种领域，您说了算！小G会在今后不断地与您分享更多的应用案例和实验技巧，请持续关注我们G课堂。好了，我们下期再见！Bye Bye！ Biacore™ 品牌简介BIA是英语"Biomolecular Interaction Analysis"的缩写，Biacore™提供了实时观察生物分子间相互作用的技术。通过它您能观察两种分子结合的特异性，能知道两种分子的结合有多强，还能了解生物分子的结合过程共有多少个协同者和参与者。Biacore™可以让您得到用其他技术方法难以得到的结果，因为它可以实时反映分子结合过程中每一秒变化的情况。无需借助标记物进行分析使Biacore™广泛应用于各类生物体系的测定，从各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。Biacore™ 是一个通用的仪器，因为您可以任意偶连如上所述任一种生物分子到传感片表面。因此要将Biacore™应用在哪个领域，由您决定!        今天对生命科学奥秘的探索，已经不仅仅停留在是什么，而是要探询为什么。旨在揭示生命现象背后的机理研究，必然要理清生物分子间复杂的关系。只有Biacore™能实时反映生物分子相互作用的整个过程，而不同于其他只能提供生物分子作用后的结果的方法，为您开辟一个崭新的研究角度。      北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare 北京及山东科学仪器独家授权 现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：  

        德国Systec公司成立于1994年，是世界顶级的高压灭菌器生产厂商，用户含概大学、研究所、政府研究机构 、大规模实验室、制药和食品企业、政府检测部和私人实验室，产品远销世界 100多个国家。 作为Systec旗舰产品：VX、DX系列全自动多功能systec高压灭菌器，可选配脉动真空功能，快速冷却功能，夹套超干燥功能，可以满足所有企业、高校以及科研单位的高要求、高标准的灭菌需求。脉动真空功能        专门针对衣物、枪头盒以及废弃物等难于除空气的多空、中空物质的样品灭菌，具有脉动真空功能，可分次脉冲式的对腔室进行抽真空，除去灭菌物品内的空气，从而达到高效的灭菌要求（如左图所示）。     夹套超干燥功能    对灭菌物品具有非常好的超干燥功能，通过灭菌器外部的加热套对腔室进行加热，结合真空泵对腔室内样品进行真空抽湿，达到对样品的超干燥功能，特别适用于衣物、枪头盒等灭菌后难于干燥的样品灭菌（如上右图所示）。加压快速冷却功能    特别针对液体灭菌后的快速冷却设计，通过灭菌腔室外部冷却盘管通冷却水，结合无菌过滤压缩空气加压，达到液体快速冷却的效果，同时还可以避免液体的蒸发损失（如下左图所示）。                     排气过滤功能    主要针对生物危害性废弃物灭菌设计，滤芯含有一个PTFE材质滤膜，孔径0.2微米。加热及灭菌过程中的冷凝物在灭菌结束前全部保留在腔体内部灭菌，同时滤芯也完成在线灭菌。保证了所有传染致病物在灭菌前泄露，保护实验室人员及环境安全（如上右图所示）。独立蒸汽发生器    内置于仪器内部的蒸汽发生器用于产生蒸汽，这种设计具有：便于清洁、无需预热、升温快速、排气彻底等优点。保证了灭菌器的温度精度及灭菌高效性(如下左图所示）。  可移动PT-100温度探头      在仪器的顶部装有一个灵活的PT-100温度探头，可在腔室内随意移动，用于液体灭菌时，参比液体的温度测量用，灭菌锅底部的冷凝排水处也装有一个固定的PT-100探头，用于固体灭菌等的使用（如上右图所示）。创新的环形门锁设计    采用新型的环形门锁设计，当盖子 关闭时环形密封 圈在锁定的位置，当盖子打开时，环形密封圈恢复原位。打印机功能    灭菌锅配有配套的打印机，可即时打印灭菌腔体内的每个时间点对应的温度和压力，同时记录灭菌程序 错误和故障信息。          Systec灭菌器具有诸多功能满足各类灭菌工艺，可谓全球最高端的全自动多功能灭菌器。北京德泉兴业商贸有限公司作为Systec在中国授权的一级代理商，将为您提供更专业的灭菌建议及服务。   欢迎来函致电：139-1172-9620 何伟 邮箱：he_wei@dq-science.com  1、为保证内容正常显示，图片请使用本地上传。2、新闻内容不得添加电话、邮箱、QQ、网址、二维码等任何联系方式，新闻底部会自动添加联系我们的功能。

  和其他的技术领域一样，纯化师也有着属于他们自己的专属词汇。每一个词都以通俗易懂的方式来表述学术目含义。虽然相同的术语可能也应用于其他学科，但是他们的含义确是千差万别的。   今天，小g在此列出了纯化过程中必须了解的10个词语。如果你是个最近才开始接触纯化的小白， 对这些术语还不够熟悉，那么这10个词语有助于你理解和看懂与纯化过程相关的内容。如果你是一个经验丰富的纯化老手，这些标准定义会在你指导他人显得格外顺手。 1. chromatogram色谱图一张反应检测器响应值的图表。如图是一个典型的吸光度值（280nm）对时间（min）的色谱图。当一个响应被记录下来时，在色谱图上即会出现峰。 2. resolution分辨率这个分辨率可不是屏幕的分辨率哦。而是对封装好的色谱柱分离两种溶质（eg. 蛋白质）能力的评价术语。溶质用检测器来进行监测，比较常用的是uv值。分辨率越好，说明色谱柱对于这两种溶质的分离能力越强。  3. columnefficiency柱效指从装好的柱床中洗脱窄而对称峰的能力。是柱上发生谱峰加宽的重要影响因素，常常与色谱柱的理论塔板数（theoretical plates, n）相关。相较于低理论塔板数的色谱柱而言，高理论塔板数的色谱柱更有利于在特定的保留时间内生成更窄的峰。4. seletivity选择性指同一根色谱柱中两种溶质（eg. 蛋白质）的相关保持力（retention）。选择性和两峰出现时间的距离相关。距离越宽，选择性越好。5. peak broadening谱峰加宽指当一种溶质流经一个色谱柱或色谱纯化系统时扩散的区域。可致降低分辨率从而稀释溶质。这种现象也被称为带加宽（band broadening）或区域加宽（zone broadening）。对于此现象的扩展理论解释有很多因素组成，如在固定相与流动相中的纵向扩散（longitudinal diffusion），涡流扩散（eddy diffusion）以及传质阻力（masstransport）。 6. flowrate容积流速流经色谱柱和/或色谱系统的容积流量，单位为毫升/分钟（ml/min）。7.flowvelocity线性流速流经色谱柱和/或色谱系统的线性流量，单位为厘米/小时（cm/h），公式为体积流速除以横截面积。在放大工艺上十分重要。8. cv flow 柱体积流速容积流速用柱体积来表达。单位为柱体积/小时（cv/h），在比例缩放上是个很有用的单位。9. delayvolume 延迟体积指在样品分离收集的时候，延迟体积指在监测器和组分收集器间的系统组件与管路的体积。梯度延迟体积与溶液混合器和色谱柱两点间的容积相关。10. deadvolume 死体积指从进样器至检测器之间除掉色谱柱体积的容积。这部分体积一般是无法改变的。 想了解更多么？您可以登陆gehealthcare官网或发送邮件至德泉蛋白质纯化支持邮箱：liu_tianyu@dq-science.com索取最新的?kta™系统手册（the ?kta™ system handbook）。  ?kta™ 品牌简介    ?kta™在瑞典语里是真实或纯正的意思，是ge healthcare 层析系统的品牌，全球超过 100,000 科学家选用该系统在蛋白分离和纯化领域取得突破和进展。这个高贵的血统正飞速进入新一代：?kta™avant与?kta™ pure。自1996引入以来，?kta™对全世界科学家意味着卓越的纯化性能。    几乎可以纯化任何生物分子，使?kta™蛋白纯化系统可以应对最简单和最艰难的挑战。?kta™平台涵盖了从科研实验室到工艺开发再到大规模生产所有层析和切向流过滤技术。    ?kta™系统由智能可扩展的unicorn软件操作，使您更容易控制纯化工艺的每个阶段。    广泛的预装层析柱、层析介质、切向流过滤、?kta™系统和unicorn软件一起提供完整的解决方案，获得更好的结果。     北京德泉兴业商贸有限公司为ge healthcare 北京及山东科学仪器独家授 现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电： 

活动时间：2017/2/1—2017/4/30                   兑换时间：2017/2/1—2017/4/30                   活动规则：                                                        活动期间内，同一客户合同金额（含税）                达到人民币2.5万赠送kindle paperwhite一台； 达到人民币7.5万赠送惠人原汁机一台；                 达到人民币12.5万赠送ipad mini一台。                 活动细则：1.本次活动只针对终端客户；2.兑换礼品时需出示与终端客户的盖章合同；3.合同时间必须在活动时间内；4.每份合同不可重复计算；  5.兑换合同金额可累计，累计合同抬头必须为同一科室或课题组；6.特价型号同样参加此次活动；7.招标和申请特价的项目不参加此次活动。

和其他的技术领域一样，纯化师也有着属于他们自己的专属词汇。每一个词都以通俗易懂的方式来表述学术目含义。虽然相同的术语可能也应用于其他学科，但是他们的含义确是千差万别的。    今天，小G在此列出了纯化过程中必须了解的10个词语。如果你是个最近才开始接触纯化的小白，对这些术语还不够熟悉，那么这10个词语有助于你理解和看懂与纯化过程相关的内容。如果你是一个经验丰富的纯化老手，这些标准定义会在你指导他人显得格外顺手。1. Chromatogram 色谱图一张反应检测器响应值的图表。如图是一个典型的吸光度值（280nm）对时间（min）的色谱图。当一个响应被记录下来时，在色谱图上即会出现峰。2. Resolution分辨率这个分辨率可不是屏幕的分辨率哦。而是对封装好的色谱柱分离两种溶质（eg. 蛋白质）能力的评价术语。溶质用检测器来进行监测，比较常用的是UV值。分辨率越好，说明色谱柱对于这两种溶质的分离能力越强。3. Column efficiency 柱效指从装好的柱床中洗脱窄而对称峰的能力。是柱上发生谱峰加宽的重要影响因素，常常与色谱柱的理论塔板数（Theoretical plates, N）相关。相较于低理论塔板数的色谱柱而言，高理论塔板数的色谱柱更有利于在特定的保留时间内生成更窄的峰。4. Seletivity选择性指同一根色谱柱中两种溶质（eg. 蛋白质）的相关保持力（Retention）。选择性和两峰出现时间的距离相关。距离越宽，选择性越好。5. Peak broadening谱峰加宽指当一种溶质流经一个色谱柱或色谱纯化系统时扩散的区域。可致降低分辨率从而稀释溶质。这种现象也被称为带加宽（Band broadening）或区域加宽（Zone broadening）。对于此现象的扩展理论解释有很多因素组成，如在固定相与流动相中的纵向扩散（Longitudinal diffusion），涡流扩散（Eddy diffusion）以及传质阻力（Mass transport）。6. Flow rate容积流速流经色谱柱和/或色谱系统的容积流量，单位为毫升/分钟（mL/min）。7. Flow velocity线性流速流经色谱柱和/或色谱系统的线性流量，单位为厘米/小时（cm/h），公式为体积流速除以横截面积。在放大工艺上十分重要。8. CV flow 柱体积流速容积流速用柱体积来表达。单位为柱体积/小时（CV/h），在比例缩放上是个很有用的单位。9. Delay Volume 延迟体积指在样品分离收集的时候，延迟体积指在监测器和组分收集器间的系统组件与管路的体积。梯度延迟体积与溶液混合器和色谱柱两点间的容积相关。10. Dead Volume 死体积指从进样器至检测器之间除掉色谱柱体积的容积。这部分体积一般是无法改变的。想了解更多么？您可以登陆GE healthcare官网或发送邮件至德泉蛋白质纯化支持邮箱：liu_tianyu@dq-science.com 索取最新的?KTA™系统手册（The ?KTA™ system handbook）。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare 北京及山东科学仪器独家授权现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：

 Hello!大家好，我是小G。今天的主题是大名鼎鼎的Amersham™！小G也和今天的主题一样，变了个装，给大家带来一些关于电泳实验的小技巧。让我们速速进入正题吧~做蛋白相关实验时，我们在前期会对已知蛋白，利用软件来计算他们的分子量大小。但是对于一个未知蛋白，我们应该怎样来预估它的大小呢？最常用的方法就是利用SDS-PAGE。尽管还有许多其他的方法（i.e. 分析超离，光散射）来计算未知蛋白的分子量，但是都需要大量的高纯度的蛋白或贵重的仪器，所以并不常用。那么，怎样利用SDS-PAGE来确定未知蛋白的分子量呢？ 利用SDS-PAGE测定蛋白分子量：实验过程总览若想确定一个未知蛋白的分子量，首先你要在一块SDS-PAGE胶上随一组Marker对你的样品进行分离。然后利用适当的染色方法进行染色，清洗后即可得到可见的、清晰的蛋白质条带。在此，你可以利用Amersham Imager 600清晰地对你的凝胶进行成像，所得到的图像可直接用于接下来的分析（如图1）。当然，你也可以利用胶尺或普通的尺子进行手工测量。图1：典型的SDS-PAGE凝胶电泳图 在得到胶的图片后，需要确定分子量标准（Standards）以及未知蛋白的相对迁移率（relativemigration distance, Rf），相对迁移率可以跟据如下公式进行计算图1的测量数据见表1。如表所示的迁移距离在电脑测量，以像素为单位。你可以使用胶尺或者尺子进行测量（长度单位）。 表1：图1凝胶测量结果根据表1中每个条带迁移距离，我们可以求出每个条带的迁移率。之后我们再以每个条带大小的对数为纵轴，迁移率为横轴作图，即可绘出如图二所示的线形图。如果样品完全变性且测量准确，我们可以得到一条较为吻合的趋势线，并求出其中的趋势线方程。如果你得到了一条S形的曲线，则说明由于凝胶的筛型效应过强而限制了分子的穿透力或凝胶的筛型效应太弱导致了分子几乎可以在凝胶中自由迁移。 图2：表1结果线形图 最后，你可以在图中插入未知蛋白的测量值（迁移率Rf），即可得到未知蛋白的测量大小。记住，这种方法测量出的蛋白大小的误差在±5%左右。由于一些多肽（如二醇类或脂蛋白）不能完全被SDS包被，所以会出现结果不够准确的情况。如果想得到最准确的结果，可通过质谱进行进一步地证明。在本文的案例中，未知蛋白的迁移率为0.50584380，带入公式我们可以得到Log(未知蛋白MW)=1.6612，最后求出目标蛋白分子量为45.83。这个蛋白的软件预测大小为45.29。所以我们得到的结果还是比较准确的。 为你的分子量测量实验创造理想缓冲液环境：简单又必要的条件。如果你想通过SDS-PAGE来测量你的目标蛋白质的分子量大小，你应该确以下几方面基本因素来创造合理的实验条件以降低外部因素对你结果的影响。这些因素虽然简单，但却非常必要。1）目标蛋白与分子量标准必须在相同条件下的同一张凝胶上进行实验；2）利用更多的数据来获得更准确的结果。尝试使用三次以上的重复实验来计算；3）溶解蛋白时，应加入还原性试剂来彻底打开二硫键。二硫键会影响二级结构的迁移率；4）样品缓冲液中必须含有SDS。SDS会与蛋白质二级结构，三级结构以及四级结构的疏水区域结合，给予蛋白质净负电荷。而且，SDS在变性过程中的表现也较为温和，可以在不改变初级结构的条件下改变蛋白质的生物性质。最好需要注意的是，良好的线性范围是得到准确结果的必要条件，如果可以对样品进行定量，请加入与分子标准相同量的样品，以保证结果的准确性。好了，相信现在你对利用SDS-PAGE对未知蛋白分子量的测量方法有了更深的了解，小G也希望这些实验技巧可以切实地帮助所有在实验室奋斗的同学。此时，春节已经临近，小G在此先给大家拜一个早年，祝愿大家在新的一年里，实验顺利！健康平安！心想事成！万事如意！我们新年再见啦！ Amersham™品牌简介20世纪40年代，Amersham™（安马西亚,GE医疗生命科学的前身）开创了放射性同位素示踪剂产品，促进分子生物学的重大进展，最终创造分子生物学史上的里程碑，如DNA测序。接下来的几十年间，Amersham™继续为科学与医学做出重要贡献，如推出世界上第一款测量糖尿病患者的胰岛素水平的放射免疫分析试剂盒。Amersham™创新传统为非放射性标记的发展做出重要贡献。1990年，Amersham™ECL试剂成为第一个用于Western Blotting的化学发光底物，成为“化学发光”的代名词，至今文献引用排名第一。GE医疗生命科学提供广泛的Amersham™化学发光、化学荧光与荧光检测的成像产品组合，成为业界的高质量和高可靠性的不二选择。   北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。 现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：

真核生物的基因组dna以染色质的形式存在。因此，研究蛋白质与dna在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, chip )是目前唯一研究体内dna与蛋白质相互作用的方法。染色质免疫共沉淀（chip）的原理：   是在活细胞状态下固定蛋白质-dna复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的dna片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。   染色质免疫共沉淀（chip）应用：l  检测体内反式因子与dna的动态作用l  研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系l  chip与基因芯片相结合建立的chip-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶细胞的高通量筛选l  chip与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点l  rna-chip用于研究rna在基因表达调控中的作用。l  chipseq获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的dna区段信息  diagenodebioruptor非接触式超声波破碎仪以最全新的技术为chip的样品处理保驾护航 l  宽广的dna超声范围，保证处理样品的均匀一致l  持续旋转式样本处理，保证绝佳的chromatin shearing 结果重复性l  快速的超声波破碎速度，缩短枯燥的等待时间l  密闭式样本处理，不产生感染性飞沫，确保操作人员安全l  样本完全不产生气泡，保证了蛋白活性l  一次样品最大处理量可达12支，提高实验的速率

     Hello，又和大家见面啦，看到上期有那么多人再看，小G真开心。今天我们继续介绍一下提高蛋白溶解性的方法。4:   使用特定的宿主菌株可以通过使用具有更加氧化的细胞质环境的宿主菌株来增加含有二硫键的蛋白质的溶解度。 以下两种菌株可商购：   AD494,在硫氧还蛋白还原酶 (trxB)有一处突变；Origami, 在硫氧还蛋白还原酶(trxB) 和谷胱甘肽还原酶 (gor)有两处突变。5: 添加融合伴侣   将外源蛋白的N端与经常可以有效地提高融合蛋白的可溶性。6: 选择目的蛋白的片段进行表达大肠杆菌对于大型蛋白（>70kDa）的表达性不是很好。如果目的蛋白的分子量很大，可以选择其中较短的片段进行表达，也可以提高可溶性。对于难溶或者不溶的也可以只选择一个可溶的域（domain）进行表达。7: 蛋白质体外的变性与复性。如果你尝试了以上所有的方法，蛋白质依然主要表达在包涵体，最后的办法就只有蛋白质的复性了。可以通过三个步骤完成：a) 包涵体的分离目标蛋白的溶解和变性。这一步可以在还原性条件下通过变性剂（通常是胍和尿素）b) 通过透析，稀释或色谱等技术来移除变性剂，从而达到蛋白质复性的目的。对于含有二硫键的蛋白质，必须在还原氧化条件下进行，比如还原性和氧化性的谷胱甘肽。c) 更多关于蛋白质复兴的内容我们会在今后的G课堂·?KTA 中进行详细介绍。下周我们将带来G课堂·Amersham，来给大家讲一讲电泳中的学问。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：

Hello！小G终于和大家见面啦！从今天起，小G每周将分享一些实验技巧，旨在解决大家在实验过程中遇到的各种问题。         在很多情况下，我们辛辛苦苦表达的蛋白往往是不可溶的，并积聚在一种叫“包涵体”的物质当中。这种情况在高表达量的条件下尤为明显。        今天，小G就介绍一些方法，可以有效地提高蛋白的可溶性。1：降低蛋白合成速率既然高表达量容易导致不可溶蛋白的形成和积聚，那么只要降低蛋白合成速率，就有很大几率提高蛋白质折叠的正确率。其中包括：a)  降低培养温度（这个方法可以有效的减缓蛋白合成/折叠的速率，通常可以获得多一些的可溶性蛋白）；  b) 尝试更弱的启动子（e.g. trc代替T7）；  c) 尝试低拷贝质粒；  d) 降低诱导剂浓度；2：优化或更换培养基        a) 添加对所表达蛋白正确折叠及稳定性必要的辅助集团或辅助因子；        b) 在表达过程中添加缓冲液来缓解pH的波动；        c) 添加1%的葡萄糖来阻遏乳糖对lac启动子的诱导；        d) 添加适量多元醇（例如山梨醇）和蔗糖      * 这个添加剂可引起细胞渗透压增加导致渗透保护(osmoprotectants)剂在细胞中的积累，而渗透保护剂有助于蛋白质天然结构的折叠        e) 加入乙醇，低分子量硫醇与二硫化物和NaCl[1]。3：分子伴侣和/或折叠酶的共表达。分子伴侣和折叠酶，这两种蛋白质在蛋白质折叠中起着重要作用。其中：    a) 分子伴侣通过与折叠中间体的瞬时相互作用来促进适当的异构化和细胞靶向，促进正确的折叠。其中最佳表征的大肠杆菌系统是：       1. GroES-GroEL       2. DnaK-DnaJ-GrpE       3. ClpB               b) 折叠酶主要加速折叠通路中的限速步骤。其中三种类型的折叠酶起重要作用：       1. 肽基脯氨酰顺/反异构酶（peptidyl prolyl cis/trans isomerases, PPI）；       2. 二硫键氧化还原酶 (disulfide oxidoreductase, DsbA) 和二硫键异构酶（disulfide isomerase, DsbC）；       3. 蛋白二硫键异构酶（protein disulfide isomerase, PDI）。* 一种催化蛋白半胱氨酸氧化和二硫键异构化的真核蛋白，还可以同时展现伴侣活性。       将一种或多种这些蛋白与靶蛋白进行共表达可有效提高靶蛋白的可溶性。不同伴侣/折叠酶的共表达水平必须针对每个实例进行优化。当用作融合伴侣时，DsbA和DsbC也对表达水平显示出积极作用。       那么，除此之外，还有什么方法可以提高我们表达蛋白的可溶性呢？       敬请期待下周四更新的《G课堂 |【Tips】如何提高蛋白可溶性（下）》参考文献：[1]  Georgiou, G. & Valax, P. Expression of correctly folded proteins in Escherichia coli. Curr. Opin. Biotechnol. 7, 190-197北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：

细胞是一台精密的分子机器，上次讲到的通过JC-1检测线粒体膜电位相较经典的Annexin V/PI法能识别凋亡的早期，Annexin V/PI（包括我们之前讲过的FSC结合SSC识别凋亡细胞的形态学改变）所识别的是一系列“分子齿轮”转动、传递之后的效应-是果，不是因！它之所以经典、被广泛使用的原因在其识别凋亡的特异性以及染色的便利性（PS在胞外，易于染色。做科研的人是最聪明的-保证检测特异性，同时也是最“懒”的-追求简便、效率）。高水平的期刊（CNS）检测凋亡绝不是仅仅就看Annexin V/PI一个指标，而是循着下图的脉络，对各个节点都进行分析检测！凋亡分线粒体途径（内源性）和死亡受体途径（外源性途径），两条途径最终都会落到凋亡效应分子Caspase 3，Caspase 3会去“切割”胞内一系列分子，如actin-引起细胞形态变化（FSC结合SSC识别，PS外翻似乎也和这个有关），再比如染色体（下集讲）。下图是流式检测Caspase 3激活的实例：

上次讲到：“流式细胞仪的fsc结合ssc就能识别凋亡细胞这一形态学上的变化！尽管基于fsc、ssc对凋亡细胞的分辨特异性并不像annexin v - fitc / pi那么强，但两个散射光参数的组合不失为一种简单、快速且经济（无需对样品进行过多处理、不需要额外购买试剂）的初步评估实验变量引起细胞凋亡的参考方法！”这个方法不严谨、缺陷的地方在于fsc、ssc发生变化的群体实际对应的是坏死细胞（下图中红色群体），之所以说它能用来初步评估凋亡的依据在于体外培养细胞ps外翻后并没有其他细胞识别吞噬，细胞只能启动二级坏死，即体外培养细胞凋亡之后的下一阶段是二级坏死！需知凋亡现象的发现是得过诺贝尔奖的！当年几位科学家在模式生物线虫上发现并阐明了凋亡现象及机制，恰逢人类基因组计划完成，科学家将线虫凋亡相关基因与人类基因图谱进行比对发现：凋亡这一现象在进化上是高度保守的（线虫上ced对应人类的caspase）！ps外翻实际上是凋亡相对后期的一个分子行为，那么凋亡是如何启动的？在内源性通路中bcl家族促凋亡蛋白bax、bak形成复合物后结合到线粒体膜表面，使线粒体膜通透性改变，线粒体中一系列氧化还原反应电子转移“中间物”细胞色素c释放（王晓东教授所发现），引起线粒体膜电位发生变化，流式细胞仪结合jc-1即可观察这一现象（如下图），从图上也可以看出随线粒体膜电位变化（凋亡进行），fsc、ssc的变化！   50 μm槲皮素诱导细胞凋亡：a ( 0 ), b ( 6h ), c ( 12h ), d ( 24h )

 annexin v - fitc / pi之所以成为检测凋亡的金标准是因其在凋亡细胞识别特异性及磷脂酰丝氨酸（ps）外翻到细胞膜表面后识别、染色的便利性！但需知，细胞凋亡这一生理现象的发现绝不是通过关注某一胞内分子的变化而实现的！人们最早发现凋亡是基于对细胞的形态学特征- 细胞皱缩、发泡（如下图）！ 流式细胞仪的fsc结合ssc就能识别凋亡细胞这一形态学上的变化（如下图中红色群体）！尽管基于fsc、ssc对凋亡细胞的分辨特异性并不像annexin v- fitc / pi那么强，但两个散射光参数的组合不失为一种简单、快速且经济（无需对样品进行过多处理、不需要额外购买试剂）的初步评估实验变量引起细胞凋亡的参考方法！

流式分析细胞凋亡续 - annexin v识别的磷脂酰丝氨酸（ps）是什么鬼？什么叫二级坏死？贴壁细胞如何准确检测凋亡？ 细胞凋亡引起磷脂酰丝氨酸（ps）外翻，在生理条件下ps是供免疫细胞识别引发吞噬避免细胞内物质释放引起炎症反应的！那么在体外培养条件下，没有细胞吞噬凋亡细胞，凋亡细胞何去何从？答案是二级坏死！二级坏死细胞会出现在上图q2象限！    贴壁细胞在收集、消化过程中细胞膜会收到伤害，ps会受到影响，造成凋亡检测假阳性！贴壁细胞如何准确检测细胞凋亡？？？

促销形式：年终促销折上折，好礼相送促销时间：2016年12月16日-2017年3月31日促销活动说明：为感谢广大科研工作者对zaelway品牌的信任和厚爱，德泉公司特推出年终促销：1. 活动期间，购买以下系列产品在原来折扣的基础上享受95折上折.2. 活动期间，下单前20名（合同为准）可享受精美礼品一份。3. 本活动仅限于京、冀、晋、蒙地区有效开展，更多惊喜等您来询。

AI600（超灵敏多功能成像仪）是最先进的高感光通量及灵敏度的科研多功能成像系统。基于旋转45°合并蜂窝状感光单元的超大CCD和最大开口50mm直径的自动定焦镜头，这种超级蜂窝CCD同以前的CCD相比，单位面积的聚光更多，达到了与胶片同等的高灵敏度。AI600能够快速、自动的捕获微弱信号，化学发光模式可以同时成像化学发光样品和彩色分子量标记物，成像结束即可获得目标条带表达情况，无需第三方软件分析。AI600具有最大的感光单元（10.75 μm×10.75 μm）和最高的光通量镜头（F0.85 43mm），可提供最高灵敏度的数据。

      2016年09月20日德泉市场团队的小伙伴们奔赴首都医科大学，给中医药学学院的师生带去了精心准备的讲座。此次活动在首都医科大学中医药学实验教学中心的鼎力支持下，在梅特勒-托利多和ika厂家的配合下完美收官。       ika高级产品经理讲解了ika产品使用、维护常识，产品皆是学院内经常使用的通用仪器，常常被忽略的问题在这里都可以得到解答。       m.t销售工程师讲解了m.t天平产品使用、维护常识，如何才能获得准确的称量结果？简单的称量其实并不简单，讲解内容虽然基础却不容忽视。师生们将日常遇到的问题踊跃提了出来，工程师一一进行解答，决不让小问题破坏大实验。?首医师生们有序来到了会场 ?附赠精心准备的使用维护指南 ?开讲啦！感谢首都医科大学中医药学实验教学中心、梅特勒-托利多、ika对此次活动的大力支持！       如果您也心动了，有问题德泉愿意随时为您解答，快来联系我们吧！

在实验过程中，由于样品的各种性质差异，只有选择了正确的离心方法，才能获得预期的分离纯化结果。常用的离心方法主要有差速离心法、密度梯度离心法。其中密度梯度离心法又可细分为速率区带离心和等密度梯度离心法。小贝离心学堂将分三期对这三种常用的离心分离方法分别进行专题介绍。离心方法 之 差速离心差速离心法(differential velocity centrifugation method)又称离心力差分离法。原理是利用样品中各组分沉降系数的差异，对不同的微粒施以不同的离心力，经过多次离心，离心速度逐步加大，将不同的微 粒依次沉降，从而实现离心分离。如果分离样品中有大中小三种不同粒径的微粒，对它们施以不同的离心力，大粒径的微粒，其质量较大，首先沉降。分离上清液， 以更大转速对上清液进行第二次离心，中颗粒被分离出来。再取上清以更大离心力，更高的转速，最后沉降小颗粒，以达到不同颗粒的分离，如图5-1所示。由于 在每种颗粒的沉淀物中总含有部分次级颗粒，如想将某种颗粒提纯，需对该颗粒的沉淀物进行稀释后再离心沉淀，最终可制备出理想纯度的颗粒。 图1差速离心由于小粒径的微粒质量小，分离时所需离心力大。为满足大离心力的需要，必需提高其旋转速度，方可分离。以不同的离心力分离不同粒径的微粒是动力学的分离方法。特别是沉降速度差别较大的微粒多采用此种分离方法。差速离心原理可用离心力表达式说明。 差 速离心主要用于分离直径和密度差异较大的颗粒。差速离心法的优点是分离时间短、重复性高，样品处理量大，可用于大量样品的初分离。其缺点是分离复杂样品和 要求分离纯度较高时，离心次数多，操作繁杂。由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀，容易引起中间损失，所以离心分辨力差。实际分离时由于离心时的对流、扩散 和收取沉淀时的污染，对于一些沉降系数相差不大的组分无法进行完全的分离提纯。样品的纯度和回收率都不理想，因此差速离心法主要用于大量样品的初步分离提 纯。例如，我们可以对动物肝组织匀浆液进行多次的不同相对离心力和时间的离心和沉淀/上清分步收集，得到样品的细胞核、线粒体、溶酶体和核糖体等的初步分离富集沉淀，用于下一步的其他检测或者精细纯化实验。具体的处理流程如下：

    细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用；它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。      流式细胞术是检测细胞凋亡的金标准，检测程序如下：     如感兴趣，欢迎来电咨询，北京德泉期待您的来电！ 

        亲爱的小伙们，此刻的你正在实验室里埋头实验？是否想给你忙碌又苦燥的科研工作增添一些乐趣？机会来了！Rainin“枪”王之争马上就要开始啦！放下手中的实验，环顾你的四周，看看你的实验室有多少支Rainin移液器？活动规则        在活动指定时间内，向Rainin指定邮箱发送您与Rainin移液器的合影，即可参加Rainin“枪”王之争。我们会将图片上移液器支数进行排名，排名前十的参赛图片会通过MT微信公示进入最后“枪”王之争，届时根据投票数评选出1名“枪”王，5名最佳“枪”手，枪王枪手们将会获得以下精美大奖，和实验室小伙伴一起分享喜悦！奖品设置        “枪”王（1名）：电影卡一张（价值500元），邀请实验里的小伙伴一起嗨电影！        “枪”手（5名）：小米体重秤一台（价值99元），邀请实验室的小伙伴每天关注健康！活动时间：2016.11.15-2016.12.31图片接收邮箱：Mtchina.raininpipettes@mt.com图片要求：       1. 图片中需要有Rainin移液器与实验室小伙伴合影，合影人数超过3人以上;       2. 参赛移液器需是Rainin品牌；       3. 图片中移液器支数清晰可辨；       4. 发送图片命名方式：移液器支数+公司名称+联系人+联系方式赛程安排：      2016.11.15-2016.12.31:收集挑战图片       2017.1.1-2017.1.5：公示支数前十名的入围图片       2017.1.6-2017.1.13：选手拉票及投票       2017.1.14-2017.1.20：公示投票结果       2017.1.21-2017.1.25：发放奖品 小伙伴们，赶紧行动起来吧！Rainin“枪”王之位等你来争！ 

国庆假期结束啦，各位小伙伴们完成了探亲访友之旅还是美食之旅，亦或是宅在家里的放空？节前小编放给大家的福利现在一大波陆续来临，希望大家一起积极参与哦！德泉特色促销日--第一篇梅特勒托利多-分析天平型号：ME204E参数：220g/0.1mgRANIN瑞宁-手动单道移液器型号：SL-PL系列参数：0.1~1000ul可选欢迎咨询：010-83834948

 密度梯度离心（isodensity centrifugation method） 又称为区带离心。离心时先将样品溶液置于一个由惰性梯度材料形成的密度梯度液体柱中，离心后被分离组分以区带层分布于梯度柱中。该方法的优点是可以同时使 样品中几种或全部组分分离，具有良好的分辨率，分离效果好，可一次获得较纯组分。缺点是离心时间较长，需制备梯度液，操作要求高。 按照离心分离原理，密度梯度离心又可分为速率区带离心法（rate zonal centrifugation method，R-Z）又称连续密度梯度离心法和等密度离心法(isopycnic centrifugation method)又称不连续密度梯度离心法。  速率区带离心 速率区带离心也可称为等区密度离心，是根据样品中不同组分粒子所具有的不同的体积大小和不同的沉降系数将混合样品进行离心分离提纯。离心时将需要分离的样品溶液置于由密度梯度材料，如蔗糖、氯化铯(CsCI)、溴化钠等形成的梯度液柱上面，样品粒子的密度必须大于梯度液柱中任一点的密度，否则得不到理想的区带离心效果。 离 心时，混合样品中不同的组分将在梯度液柱的不同位置分别形成各自的区带，选择适合的转速和时间进行离心，当各组分区带距离拉得最远时，结束离心，然后将区 带取出。这样只需通过一次离心就可以把混合样品中的各组分分离提纯，其纯度和回收率均可满足要求。优点是一次分离纯化，组分的沉降系数相差20%以上的即可选用此法，分辨力高，操作熟练可以将组分沉降系数相差5%～10%的样品很好的分离。缺点是材料的条件限制，样品液浓度不能太高，否则操作条件很难控制，同时此法与差速离心法相比，处理样品的量要小的多。  图2速率区带离心  速率区带离心的时间必须严格控制，不能太短，否则样品区带不清，时间也不能太长，否则待分离组分可能沉底。需要分离的样品颗粒的沉降速度取决丁颗粒形状、大小、密度及离心力等因素。离心前后样品的状态如图2所示。 速率区带离心最经典的应用就是通过蔗糖密度梯度离心，进行各种亚细胞器（核糖体、线粒体、Exosome等）和病毒颗粒（病毒载体、疫苗等）的纯化。例如，我们在上一期中得到的70S核糖体沉淀，经过水解后，可利用蔗糖密度梯度离心，进一步分离纯化得到50S和30S的两个亚基。具体的实验流程如下： 

 离心方法 之 等密度梯度离心法 等 密度梯度离心也称为平衡密度梯度离心。等密度梯度离心是根据样品中各组分的浮力密度差不同进行分离。在离心立场中，溶液中颗粒浮力密度小则上浮，浮力密度 大则下沉，上浮和下沉的颗粒会一直延梯度液移动到与其浮力密度恰好相等的位置上，该位置也称颗粒的等密度点，离心时样品各组分颗粒将按其密度大小分别移至 等密度点形成区带，形成的区带不会因离心时间长而发生变化。离心后收集所需区带颗粒即为纯化组分。离心前后样品的状态如图5-3所示。图3 等密度区带离心 因此，在离心前，样品可置于梯度液的任意位置，一般是均匀分布在梯度液中。等密度区带离心法的离心效果取决于样品颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效果越显著，与样品颗粒的大小与现状无关。 速 率区带离心和等密度区带离心都需预准备梯度液。速率区带离心的梯度液密度必须小于待分离组分中最小颗粒的浮力密度。利用颗粒形状和大小差异而形成的沉降速 率不同达到分离目的。等密度区带离心是一种平衡离心方法，利用颗粒密度差进行分离，与颗粒形状和大小无关，处理量比差速离心法大。 等密度梯度离心经常使用的梯度液包括氯化铯(CsCI)、溴化钠等，典型的应用包括质粒DNA（或者其他DNA、RNA核酸片段）的大规模高纯度纯化，脂蛋白的分离纯化等。 质粒DNA的氯化铯等密度梯度离心分离纯化流程如下： 脂蛋白溴化钠等密度梯度离心分离纯化流程如下：1)人全血1000 g离心10分钟去除各种血细胞，上清为血清。2)血清加入NaBr密度梯度液（不连续梯度）的底部，往上依次铺浓度变小的梯度液。3)然后在水平转头中，260,000 g离心力14℃下离心24小时，各种密度的脂蛋白从管底浮向它们自己的等密度区形成了纯的各种密度脂蛋白区。而离心管底部保留着各种血清蛋白。4)用上排法从离心管中抽出格层液体，经DU核酸蛋白分析仪测定，定位各种不同密度血清脂蛋白。

离心转头的分类离心转头（也叫转子）是离心机分离样品的核心部件，它的转速与转头的材料及强度有关。要达到良好的分离效果，转头的选择非常重要。离心机的转头有四种常见类 型，分别是定角转头、水平转头、垂直转头、近垂直转头，此外，还有一些针对特殊应用的特殊转头，主要包括连续流转头、区带转头和淘洗转头等。1.定角转头：在离心过程中，离心管与轴之间的角度是固定的，通常在20度到45度之间。离心时，样品会首先沉淀到离心管侧壁，然后下滑至离心管的外侧底部聚集。定角转头的沉降效率高，有非常好的适用性，容量范围也很广。主要用于各种不同体积的样品的沉淀离心。定角转头是应用最广泛的转头。图1定角转头2.水平转头：在离心过程中，离心管与轴之间的角度从开始0度变成90度，停止时又成为0度。由于其长的通径，可以得到最好的纯度；可以使用开口离心管，装卸样品量较大。水平转头主要用于大体积样品分离及密度梯度离心。自我平衡修正技术在水平转头上的应用给一些特殊样品的分离带来了方便（如临床上离心采血管），自我修正平衡范围可达50-100g。图2水平转头3.垂直转头：分离机理与固定转头相似，但与轴之间的角度为0度。其分离效率最高，样品密度可达1.7g/ml，两个小时就可以完成质粒DNA的分离。垂直转头用于超速离心机中，可用于等密度的质粒DNA的分离、亚细胞器片段的等密度分离、受体和酶的速率区带分离、脂蛋白的等密度分离等。图3垂直转头4.近垂直转头：其设计基于垂直转头，弥补沉淀回收率的不足，离心管与轴之间的角度小于10度。近垂直转头可承受与垂直转头同样的速度，但可以达到固定转头所能达到的分离样品的纯度。分离较快，而且密度可达1.7g/ml。可应用于等密度的DNA分离及等密度的脂蛋白分离等。图4近垂直转头四种常见的转头类型在样品的分离纯度和离心效率上各有取舍优劣，大家可根据实验的需要选择最合适的转头。一般来说，台式离心机和落地高速离心机都以定角转头 和水平转头为主，超速离心机上如果涉及一些需要超长离心时间的实验（例如等密度梯度离心，详见小贝离心学堂前几期介绍），则可选择垂直或近垂直转头来提高 实验的效率。

“中国药典通则0401：紫外-可见分光光度法”紫外-可见分光光度法是在190-800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。 当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。可以用于鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较求算出样品溶液的浓度。酶标仪，即酶联免疫检测仪又称微孔板检测器。根据检测功能不同，分为单功能酶标仪和多功能酶标仪。单功能酶标仪一般用于检测样品吸光度。一款单功能全波长酶标仪可以实现紫外-可见分光光度法的试验。区别于常规的紫外-可见分光光度计，酶标仪拥有低体积、高通量的优势。以下内容中，BioTek分别从2015年版药典的各部中悉心总结了紫外-可见分光光度法的应用。中药成分往往比较复杂，检测方法主要为液相、气相、TLC等。紫外-可见分光光度法以其操作简单、结果重复性好，也在中药的检测中占有一席之地。1.中药鉴定 2.含量测定当然，不仅仅可以进行中药材鉴定和含量测定。酶标仪还可以应用在中成药的检测。小小酶标仪还能够对中成药质量把关喔！从小儿用药：小儿七星茶、小儿宝泰康颗粒，到跌打必备的风湿骨通贴膏，感冒常用消咳喘糖浆，都是需要酶标仪进行质量控制。另外，还有保心片、新血宝胶囊、夏枯草口服液、猴头健胃灵片等中成药。化学药品：紫外-可见分光光度法在化学药品的检测非常广泛，几乎每个化药都需要用到！1.吸光度检查尤其是注射液，药典中规定需要进行澄清度检查。药典中会规定吸光度或者透光率的范围。2.含量测定杂质检查 生物制品指以微生物、细胞、动物或人源组织和体液为原始材料，用生物学技术制成，用于预防、治疗和诊断人类疾病的制剂，如疫苗、血液制品、生物技术药物、微生态制剂、免疫调节剂、诊断制品等。紫外-可见分光光度法可以用于检测以下项目：1.生物活性测定需要做体外相对效力检查的有以下疫苗：重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗、重组人表皮生长因子、重组人白介素-2、干扰素等。2.含量测定组胺人免疫球蛋白、免疫球蛋白3.化学残留物测定聚山梨酯80、碳二亚胺、游离甲醛、羟胺等。生物制品，很多都是采用注射液的给药形式。药典中规定注射液需要进行细菌内毒素检查，外源性DNA残留检测（荧光法）。以上方法都可以通过酶标仪进行检测的，特别是细菌内毒素检测，BioTek的 ELx808进行基于鲎试剂的动态浊度法已经是行业检测的金标准。 通则：主要是方法的总结，而不是针对某个中药或者化学药品的检测。应用到紫外-分光光度法的检测也是非常多！通则中，还包含了之前三部中提到的针对注射剂需要检测澄清度检查、生物制品的含量检测、生物测定、化学残留物测定等。 紫外-可见分光光度法在药典中的应用如此广泛。有了一台全波长酶标仪，就不需要进行繁琐的单管操作，能够轻松地在微孔板中完成高通量国标检测！ BioTek推出Epoch2能够完成高通量国标检测！Epoch2产品特点1. 波长范围200-999nm，1nm步进2. 超大彩色触控屏3. 具有Wifi、蓝牙和USB闪存 4. 机载Gen5软件控制或选配Gen5PC软件,5. 4-Zone温控模块，可达65度 6. 线性、轨道、双轨道震荡模块7. 6-384孔板检测、可选Take3微量板、可选独立比色杯模块 Epoch2，轻轻松松完成高通量国标检测！