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G课堂 |【Tips】如何提高蛋白可溶性（下）
Hello，又和大家见面啦，看到上期有那么多人再看，小G真开心。今天我们继续介绍一下提高蛋白溶解性的方法。
4: 使用特定的宿主菌株
可以通过使用具有更加氧化的细胞质环境的宿主菌株来增加含有二硫键的蛋白质的溶解度。 以下两种菌株可商购：
AD494,在硫氧还蛋白还原酶 (trxB)有一处突变；
Origami, 在硫氧还蛋白还原酶(trxB) 和谷胱甘肽还原酶 (gor)有两处突变。
5: 添加融合伴侣
将外源蛋白的N端与经常可以有效地提高融合蛋白的可溶性。
6: 选择目的蛋白的片段进行表达
大肠杆菌对于大型蛋白（>70kDa）的表达性不是很好。如果目的蛋白的分子量很大，可以选择其中较短的片段进行表达，也可以提高可溶性。
对于难溶或者不溶的也可以只选择一个可溶的域（domain）进行表达。
7: 蛋白质体外的变性与复性。
如果你尝试了以上所有的方法，蛋白质依然主要表达在包涵体，最后的办法就只有蛋白质的复性了。可以通过三个步骤完成：
a) 包涵体的分离
目标蛋白的溶解和变性。这一步可以在还原性条件下通过变性剂（通常是胍和尿素）
b) 通过透析，稀释或色谱等技术来移除变性剂，从而达到蛋白质复性的目的。对于含有二硫键的蛋白质，必须在还原氧化条件下进行，比如还原性和氧化性的谷胱甘肽。
c) 更多关于蛋白质复兴的内容我们会在今后的G课堂·?KTA 中进行详细介绍。
下周我们将带来G课堂·Amersham，来给大家讲一讲电泳中的学问。
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