G课堂 |【基础】结合解离曲线基本指南

春天的脚步进了，又到了万物生长的季节。 G课堂带来全新专题，Biacore™！

众所周知，验证分子间相互作用是药物开发、质量控制的关键步骤，Biacore™利用表面等离子体共振（SPR）技术允许对生物分子的相互作用作实时，无标记检测，并通过响应值来描述相互作用状态的变化。

都说Biacore™的结合解离曲线是一条非常美丽的曲线，相信如果你在自己的Paper上附上一张优美无比且说服力100%的曲线，不仅能增加你整篇文章的颜值，跟能让读者和编辑对你的文章产生好感！那么这条曲线的意义以及所反映出的信心我们该如何解读呢？

如何显示表面等离子体共振数据？

         Biacore™系统监测两个分子之间的相互作用，其中一个连接到传感器表面，另一个在溶液中是自由的。传感图是响应对时间的图，显示了相互作用的进展。该曲线在分析过程中直接显示在计算机屏幕上。

传感图中显示什么？

        如下图所示吗，在样品注射期间（Sample段），可以在传感图中观察到阳性响应，因为分析物（在基于Biacore™的测定中溶液中的相互作用组分）与配体（在基于Biacore™的测定中连接到传感器表面的相互作用组分）结合。在解离期间（Running buffer重新充满通道）响应降低。分析周期完成后，再生溶液（Regeneration solution段）通过传感器芯片，去除结合的分析物，为下一个分析周期做准备。

典型的传感图，曲线下方的条表示通过传感器表面的溶液。

在相互作用的过程中我们可以获得哪些数据？

所有数据都会在传感图中呈现，可以提供一下几种数据：

l   结合力

分析物是否会和配体发生相互所用？

l   特异性

相互作用的配体在多大程度上可以和其他分子发生交叉反应？

l   浓度

有多少已知的分子是存在和有活性的？

l   动力学

结合和解离的速率是多少？

l   亲和力

分析物与配体的结合力到底有多强？

如何解释传感图？

传感图的形状给出了关于相互作用的信息。下面显示了如何解释传感图形状的几个示例。

1. 与目标分子结合/不结合

                                     与目标分子结合                              与目标分子不结合

2. 快速结合/解离与慢速结合/解离

                                          快速结合解离                             慢速结合解离 

3. 强相互作用与弱相互作用

                                          强相互作用                               弱相互作用  

4. 多步结合，响应值变化/多步结合响应值无变化

       多步结合，相应值变化                 多步结合，响应值无变化  

OK，相信现在你已经明白如何来解读Biacore™的结合解离曲线了，因为Biacore是一种通用仪器，所以将Biacore应用于何种领域，您说了算！小G会在今后不断地与您分享更多的应用案例和实验技巧，请持续关注我们G课堂。

好了，我们下期再见！Bye Bye！ 

Biacore™ 品牌简介

BIA是英语"Biomolecular Interaction Analysis"的缩写，Biacore™提供了实时观察生物分子间相互作用的技术。通过它您能观察两种分子结合的特异性，能知道两种分子的结合有多强，还能了解生物分子的结合过程共有多少个协同者和参与者。Biacore™可以让您得到用其他技术方法难以得到的结果，因为它可以实时反映分子结合过程中每一秒变化的情况。无需借助标记物进行分析使Biacore™广泛应用于各类生物体系的测定，从各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。

Biacore™ 是一个通用的仪器，因为您可以任意偶连如上所述任一种生物分子到传感片表面。因此要将Biacore™应用在哪个领域，由您决定!

        今天对生命科学奥秘的探索，已经不仅仅停留在是什么，而是要探询为什么。旨在揭示生命现象背后的机理研究，必然要理清生物分子间复杂的关系。只有Biacore™能实时反映生物分子相互作用的整个过程，而不同于其他只能提供生物分子作用后的结果的方法，为您开辟一个崭新的研究角度。

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