【飞诺美色谱】牛奶中β-酪蛋白 A1 和 A2 的分离

艾杰尔飞诺美

2024/09/06 15:11

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概述

β-酪蛋白主要分为两种，即A1和A2 β-酪蛋白。这两种β-酪蛋白由209个氨基酸组成，分子量在24000左右，两者仅体现在第67位氨基酸的不同，A1型在该位置上结合了一个组氨酸，A2型结合的却是脯氨酸。正是这个在分子结构上的微小差异，导致了代谢产物的不同。由于A1与A2 β-酪蛋白在色谱分离上有一定的难度，并且牛奶样本基质也对目标物造成一定的干扰。

关键词

β-酪蛋白； A1和A2； Biozen Intact XB-C8； LC-UV；

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

高效液相色谱Agilent 1260，二元泵； 3.1.2试剂材料

三氟乙酸、乙腈为色谱纯；屈臣氏蒸馏水； 3.1.3样品

客户提供；

3.2仪器检测条件

3.2.1色谱条件

色谱柱： Biozen Intact XB-C8（4.6×150mm, 3.6μm）； P/N:00F-4766-E0；

流动相： A:0.1%三氟乙酸水； B: 0.1%三氟乙酸

乙腈

流速： 0.6mL/min；柱温： 55 ℃;

进样量： 2 μL；波长： 214 nm；

梯度：

时间 (min)	流速 (mL/min)	A (%)	B (%)
0	0.6	70	30
20	0.6	60	40
25	0.6	60	40
25.1	0.6	70	30
30	0.6	70	30

3.3实验谱图

结论经过色谱柱筛选与流动相体系优化，使用Biozen Intact XB-C8在三氟乙酸体系下，β-酪蛋白A1和A2的分离度可以达到1.36，且A2牛奶样本中的杂质对目标化合物没有干扰，杂质已分离在前端出峰；优化流动相初始比例至有机相34%时，A1和A2的分离度可以达到1.69，但是此时A2中有少量其他形式酪蛋白被分离出来；经过质谱鉴定和与客户标准品确认，该标准品为β-酪蛋白标准品，除A1A2外还有其它形式，但 A1A2占多数。