【飞诺美色谱】咖啡中丙烯酰胺的分析方法

摘要：本实验建立了咖啡中丙烯酰胺的前处理方法，样品经水提取，正己烷液液萃取除油后，

用 Cleanert ACA 固相萃取小柱净化，Venusil MP C18 色谱柱（3.0 × 50 mm，3 µm，100 Å）

分离，0.1%的甲酸水溶液作为流动相洗脱，LC-MS/MS 检测，内标法进行定量，结果表明，

当丙烯酰胺的加标量为 0.1 mg/kg 时，回收率在 80%以上，可以满足检测要求。

关键词：丙烯酰胺；咖啡；Cleanert ACA； Venusil MP C18；LC-MS/MS；

样品信息

表 1.丙烯酰胺样品信息

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCIEX API 4000+液相质谱联用仪；

试剂材料

甲酸、甲醇、正己烷均为色谱纯；

丙烯酰胺标准品（纯度 > 99%），水溶解；

D3-丙烯酰胺标准溶液；

0.1%甲酸溶液：移取 100 µL 甲酸，加水溶解定容至 100 mL，摇匀；

Cleanert ACA 固相萃取柱：200 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

准确称取 1 g 粉碎后的咖啡样品置于 50 mL 离心管中，加入 200 µL D3-丙烯

酰胺内标（1 mg/L），再加入 10 mL 水，超声振荡 30 min 后，于 8000 r/min 离心

5 min，将上清液转移到 15 mL 离心管中，加入 5 mL 正己烷，涡旋振荡 1 min，

6000 r/min 离心 5 min，除去上层有机相，再用 5 mL 正己烷重复萃取一次，取 5

mL 水相作为待净化液。

样品净化

Cleanert ACA 固相萃取柱（200 mg/6 mL）使用前依次用 5 mL 甲醇和 5 mL

水活化，将待净化液上样于 Cleanert ACA 固相萃取柱，并用 5 mL 水洗涤，真空

抽干小柱，用 5 mL 甲醇洗脱，收集全部洗脱液置于 50℃下氮吹浓缩至近干，用

水定容至 1 mL，待 LC-MS/MS 检测。

色谱条件

液相条件

色谱柱：Venusil MP C18，3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm；

流动相：0.1%甲酸水溶液；

柱 温：26℃；

流 速：0.2 mL/min；

进样量：5 µL。

质谱条件

离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：45 psi；气帘气压力：10

psi；辅助气压力：45 psi；离子源温度：330℃；采集方式：多反应监测(MRM)。

表2. 丙烯酰胺质谱参数

结果与讨论

实验结果

由表 3 可知，采用 Cleanert ACA 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 法检测丙烯酰

胺，当丙烯酰胺的加标量分别为 0.1 mg/kg 时，回收率均在 80%以上，满足检测

要求。由图 1 ~ 图 3 可知，用 Venusil MP C18 色谱柱检测丙烯酰胺，峰形良好，

保留时间稳定。

表 3. 丙烯酰胺加标回收实验结果(n=3，添加水平 0.1 mg/kg)

图 1. 0.05 µg/mL 丙烯酰胺标准溶液色谱图

图 2. 0.1 mg/kg 现磨咖啡基质加标色谱图

图3. 0.1 mg/kg 速溶咖啡基质加标色谱图

结论

本实验建立了咖啡中丙烯酰胺的前处理方法，并用内标法结合 LC-MS/MS

对咖啡中丙烯酰胺含量进行了测定。当加标量为 0.1 mg/kg 时，丙烯酰胺的回收

率在 80%以上，能够满足检测要求。说明 Cleanert ACA 小柱可用于咖啡中丙烯

酰胺的检测。

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