概述
mRNA聚集体检测是指使用特定的分析技术来识
别、量化并表征mRNA分子在生产或存储过程中可能
形成的聚集体。mRNA(信使核糖核酸)是一种单链
RNA分子,它携带遗传信息,指导细胞合成特定的蛋
白质。在mRNA疫苗或药物的生产过程中,mRNA分子
可能会因为多种因素(如温度变化、pH值波动、物理
或化学应力等)而形成聚集体。
聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性、活性
以及最终的疫苗或药物效果。因此,检测mRNA聚集
体对于确保产品质量、安全性和有效性至关重要。
本应用采用全新推出的Biozen dSEC-7建立了一种
分析mRNA聚集体的方法,并评估加热处理对聚集体
的影响。通过分子排阻色谱法(SEC-HPLC)研究人员
可以更好地理解和控制mRNA聚集体的形成,从而优
化mRNA疫苗和药物的生产工艺,提高产品质量。
致谢
本应用特别感谢云舟生物科技(广州)股份有限公司提
供此次样品,云舟生物以其卓越的产品和服务,为科研
工作者以及相关企业提供了宝贵的支持,他们提供的样
品不仅质量上乘,而且种类繁多,能够满足不同研究需
求。
关键词
mRNA;dSEC-7;聚集体
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
Agilent1260
3.1.2试剂材料
磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、Tris、乙酸
钠为分析纯,超纯水
3.1.3样品
EGFP IVT mRNA(998 nt),浓度为1129 ng/μL;
3.2色谱条件
色谱柱:Biozen dSEC-7(4.6×300 mm, 3 μm,
700 Å);P/N: 00H-4789-E0
流动相:如下所示
流 速:0.3 mL/min
柱 温:30 ℃;
波 长:260 nm;
上样量:1 μL
梯度方法:等度
3.3结果与讨论
3.3.1不同盐浓度对分离的影响
比较了在相同浓度PB缓冲液下,三种不同氯化
钠浓度对该mRNA聚集体分离的影响,发现并不是盐
浓度越高,分离越好,最优氯化钠浓度为100 mM,
分离度能接近1.5。
3.3.2 不同盐流动相对分离的影响
保持其他条件不变的情况下,对比不同种类盐
对该mRNA聚集体分离的影响,采用的是较低浓度的
Tris加乙酸钠体系和最优磷酸盐体系,发现在不同体
系下,聚集体的形式是不同的,分离度也是有差别
的。
3.3.3不同流速对分离的影响
在15 mMTris+15 mM乙酸钠 PH=7低盐流动相体
系下,优化分离,从表3数据可以看出,当降低流速
时,分离度更好,也能接近1.5。
3.3.4热处理前后对比
当使用70°高温加热mRNA 5min后,mRNA会变
性,聚集体会转变为单体形式,实验发现,当加热
处理后,聚集体响应明显降低,同时主峰响应明显
增加。
结论
对以上数据分析,结果表明,无论是在常规SEC
分析的磷酸盐体系下,还是较低浓度的Tris缓冲盐
体系,dSEC-7对于大小在1000 nt左右的mRNA样
品聚集体表现出了较好的分离趋势,基本能达到
基线分离,而且在上样量较少的情况下,也能达
到一个很好的响应,原因在于dSEC-7采用了优异
的孔控制技术以及BioTiTM生物惰性硬件。通过该实
验的研究,确定了dSEC-7在分析mRNA分子及其
聚集体场合有很好的实际应用。
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