【飞诺美色谱】Cleanert MAS-MAW 应用于萃取小鼠粪便中胆汁酸

一 背景

胆汁酸（bile acid, BA）为胆固醇的系列衍生物，体内约有 50%胆固醇是以胆汁酸形式

排泄，是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实

主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明，粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病

进展程度相关，建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。

本实验采用 Cleanert MAS-MAW 进行样品净化处理，考察胆汁酸在粪便样品中的加标

回收率，建立 SPE 方法对粪便样品进行净化处理。

二 目标物信息

表 1 目标物信息

三 材料及仪器

Cleanert MAS-MAW；PTFE 滤头；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮

吹浓缩仪；96 孔接收板；Venusil MP C18（2.1*150mm，3μm，100Å）；API 4000+.

四 样品处理方法

4.1 样品预处理

称取 10mg 粪便样品至样品瓶中，并加入 3mL 甲醇，涡旋 2min，超声 15min，8000rpm

离心 5min，将上清液转移至干净样品瓶中，向样品残渣中再加入 3mL 甲醇，重复提取一次，

将上清液合并，并用 PTFE 过滤头进行过滤，将滤液于 45℃下氮吹干，使用 1mL 1%甲酸甲

醇/水（1：1，v/v）溶液重新溶解，待净化。

4.2 SPE 过程

活化：2ml 乙腈，2ml 3%甲酸水溶液

上样：将待净化液全部上样

淋洗：4mL 50%甲醇水，淋洗液弃去

洗脱：先用 2mL 甲醇进行洗脱，再用 2ml 三乙胺-水-甲醇混合液（2%-10%-88%）洗脱，

将洗脱液合并，在 40℃下氮吹干，残渣用 100μL 甲醇/水（7:3，v/v）溶解。

注：粪便样品中部分胆汁酸的含量较高，可将溶液进一步稀释再进行检测。

五 仪器检测条件

5.1 HPLC 条件

色谱柱：Durashell C18-AM（2.1*100mm，3μm，100Å）

流速：200μL/min

柱温：30℃；进样量：5μL

表 2 梯度条件

5.2 质谱条件

扫描模式：电喷雾电离负模式

采集模式：多反应监测（MRM）

表 3 参数信息

六 结果

表 4 样品加标回收率

图 1 8 组分出峰顺序图（简称见表 1）

七 结论

本实验采用 Cleanert MAS-MAW 96 孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实

验结果表明 Cleanert MAS-MAW 能够有效除去粪便中的干扰物，对 8 种胆汁酸进行定量萃

取，绝对回收率范围为 83%~114%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。

八 订货信息表