(GB/T24800.2-2009) 化妆品中11种糖皮质激素的测定SPE-LC-MS/MS法

【飞诺美色谱】

1. 实验材料

1.1 糖皮质激素类药物标准品

1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置

分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品，用甲醇溶

解定容，分别配制成 1000 µg/mL 的贮备液。-20℃ 以下保存。

混合标准工作液：准确量取糖皮质激素类药物标准贮

备液适量，用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准

工作液，现配现用。

1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置

a) 10% 亚铁氰化钾溶液：称量 2.3 g

K4Fe(CN)6•3H2O，用水溶解定容至 20 mL；

b) 20% 乙酸锌溶液：称量 4.78 g C4H6O4Zn•2H2O，

用水溶解定容至 20 mL；

c) 定容液：量取 70 mL水 和 30 mL 乙腈，混匀后加入

100 µL 甲酸混匀。

2. 样品提取

霜膏类化妆品：称取 0.2 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50

mL 离心管，混匀。加入 3 mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混合

使样品分散，加入 3 mL 乙腈，超声提取 5 min，8000 r/min

离心 5 min，吸取上层清液于另一 50 mL 离心管中，下层

氯化钠溶液用 2 mL 乙腈重复提取一次，合并二次乙腈提

取液，往提取液加入 40 mL 去离子水，混匀，加入亚铁氰

化钾溶液 0.2 mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.2 mL，混匀，

8000 r/min 离心 10 min，作为待净化液。

精油类样品：称取 0.5 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50 mL离

心管，混匀。加入 4 mL 正己烷，涡旋混合使样品分散，加

入4 mL 50%乙腈水溶液，涡旋提取2 min，8000 r/min离心5

min，吸取下层提取液，上层正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液

重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腈提取液，往提取

液加入36 mL去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液0.1 mL，

混匀，加入乙酸锌溶液 0.1 mL，混匀，8000 r/min 离心 10

min，作为待净化液。

3. 固相萃取柱净化

将 Cleanert® PEP-2 固相萃取小柱置于 Qdaura® 卓睿全自

动固相萃取仪，上样液转移至上样管中，溶剂置于相应的溶

剂瓶中，设定操作程序如下：用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。

将上样管中溶液全部上样，然后以 10 mL 10% 乙腈水溶液淋

洗小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)。最后以 6 mL 甲

醇洗脱小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)，以上操作流

速均设定为 1 mL/min。取出收集瓶，于 40℃氮气吹干，用 1

mL 定容液溶解定容，过 0.22 µm Nylon 滤器，待测。

4. 检测条件

4.1 液相色谱条件

色谱柱：Venusil® ASB C18，3 µm，150 Å，2.1 × 150 mm；

柱温：30℃；

进样量：10 µL。

流动相：A 相：含 0.1% 甲酸的水溶液；

B 相：含 0.1% 甲酸的乙腈溶液；

梯度洗脱程序见表4

4.2 液相色谱条件

离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应监测； IS：-4500V；

GS1：55Psi； GS2：55Psi；

TEM：550℃；

表 3 糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数

图 1 11 种糖皮质激素液相色谱 - 串联质谱图

5. 结果与讨论

以市售玫瑰精油和护手霜为基质，进行添加回收实

验，进行0.1 µg/g 和 0.05 µg/g 添加浓度的实验，11 种糖皮

质激素的回收率和重现性如下：

实验结论：使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18，

API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了

一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在

高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-

120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快

速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。

表 4 玫瑰精油 0.1 µg/g 添加回收实验结果

表 5 玫瑰精油 0.05 µg/g 添加回收实验结果

实验结论：使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18，

API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了

一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在

高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-

120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快

速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。

6. 订货信息