【飞诺美色谱】动物源性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法

摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱建立了一种动物源性食品中碘醚柳胺残留量的检

测方法。牛、羊组织样品经乙腈提取，Cleanert® PAX固相萃取柱净化后采用Venusil® Durashell C18

色谱柱（4.6 × 150 mm，5 µm，100 Å）分离，乙腈︰水（用磷酸调 pH 至 2.5） = 85︰15 为流

动相洗脱，282nm 波长下检测，外标法定量，取得了较好的实验结果。结果表明：该方法简单

快速，准确度高，当碘醚柳胺的加标量在 15 μg/kg ~ 500 μg/kg 范围内时，回收率在 64% ~ 101%

之间，满足检测要求。

关键词：高效液相色谱法；动物源性食品；碘醚柳胺；Cleanert® PAX； Venusil® Durashell C18

前言

碘醚柳胺（rafoxanide，CAS 号：22662-39-1）又名重碘柳胺，为灰白色至棕色

粉末。在丙酮中溶解，在氯仿或乙酸乙酯中略溶，在甲醇中微溶，在水中不溶。相

对分子质量为 626.01，结构式如图 1 所示。碘醚柳胺属卤化水杨酰苯胺类吸虫药，

它主要是通过阻断肝片吸虫的氧化磷酸化过程，而使虫体麻痹、死亡，达到杀虫的

目的，在世界范围内被广泛用于牛羊的肝片吸虫病的治疗，疗效显著。有研究表明

该物质可致小鼠畸变，欧盟也对动物源性食品中碘醚柳胺的临时性最大残留量做了

规定。因此通过有效的实验技术手段，对动物源性食品中碘醚柳胺进行监控，具有

重要意义。本实验采用固相萃取结合高效液相色谱法建立了一种快速、有效的牛、

羊组织中碘醚柳胺的检测方法。

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

Agilent 1260 高效液相色谱仪；

博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。

试剂材料

碘醚柳胺标准品（纯度 99%），乙腈溶解；

乙腈、甲酸为色谱纯；实验用水为超纯水；

1%甲酸酸化乙腈：量取甲酸 1 mL，加乙腈溶解并稀释至 100 mL，摇匀；

一次性无菌注射器；Nylon 针式过滤器(0.45 μm，直径 13 mm)；

Cleanert® PAX 固相萃取柱：150 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

准确称取绞碎的样品 10 g 于 50 mL 离心管中，加乙腈 20 mL，10000 r/min 涡旋

均质 1 min，4000 r/min 离心 5 min，移取上清液。残渣再用 10 mL 乙腈重复提取一

次，合并上清液。

样品净化

Cleanert® PAX固相萃取小柱先用5 mL乙腈活化，之后将上述提取液以1 mL/min

的流速全部上样过柱。用 5 mL 乙腈淋洗小柱，真空抽干，用 10 mL 1%甲酸酸化乙

腈洗脱并收集。洗脱液于 40℃下氮气吹干，残留物用乙腈溶解并定容至 0.5 mL，过

0.45 μm 滤膜，待测。

注：上述操作步骤可在 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成。

色谱条件

色谱柱：Durashell C18，5 μm，100 Å，4.6 × 150 mm；

流动相：磷酸水溶液（PH 2.5）︰乙腈 = 15︰85；

柱 温：30℃；

波 长：282 nm；

进样量：20 μL；

结果与讨论

线性关系

分别配制浓度为 0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL 的碘

醚柳胺标准工作液，按上述液相色谱条件检测，测定结果经线性回归，线性范围是

0.05 - 10 μg/mL，回归方程、相关系数详见表 1。

检测方法稳定性

使用 15 μg/mL 的标准溶液，连续进样 6 针，记录每针碘醚柳胺的保留时间和峰

面积，计算其相对标准偏差，结果见表 2。

实验结果

从表 3 可知，采用 Cleanert® PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱法检测牛肉、

牛肾、羊肉、羊肾和羊油基质中的碘醚柳胺，当牛肉基质中加标浓度在 15 μg/kg ~ 60

μg/kg 时，回收率在 91% ~ 101%之间；牛肾基质中加标浓度在 20 μg/kg ~ 80 μg/kg

时，回收率在 76% ~ 81%之间；羊肉基质中加标浓度在 100 μg/kg ~ 400 μg/kg 时，回

收率在 74% ~ 95%之间；羊肾基质中加标浓度在 75 μg/kg ~ 300 μg/kg 时，回收率在

78% ~ 92%之间；羊油基质中加标浓度在 100 μg/kg ~ 500 μg/kg 时，回收率在 64% ~

77%之间；且各基质的最低定量限均小于欧盟规定的最大残留限量（MRL），满足检

测要求。

结论

本实验采用 Cleanert® PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱建立了动物源性食

品中碘醚柳胺的检测方法，并采用外标法定量，当碘醚柳胺的加标量在 15 μg/kg ~

500 μg/kg 时，回收率在 64% ~ 101%之间，且该方法对样品基质中的碘醚柳胺的定

量限小于欧盟的 MRL 要求，满足检测要求。