【飞诺美色谱】茶叶中八种人工着色剂的分析方法

摘要： 本实验建立了茶叶中八种人工着色剂检测的实验方案，样品经 60℃水提取，Cleanert PWAX

固相萃取柱净化，Venusil XBP C18(L)色谱柱（4.6 × 150 mm，5 μm，150 Å）分离，0.02 mol/L 乙

酸铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明，当靛蓝添加量为 0.25 mg/kg，

其余七种着色剂为 0.05 mg/kg 时，回收率在 75% ~ 115%之间，能够满足检测要求。

关键词:八种着色剂；Cleanert PWAX 固相萃取柱；Venusil XBP C18(L)色谱柱

前言

人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，

再将一种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。着色剂的

添加使用在现代饲料工业和现代畜牧水产养殖业中日益普遍。通过着色剂改变饲料的

色泽。特别是在日益增加使用非传统饲料原料的情况下，添加着色剂以便掩盖某些非

传统饲料原料（如菜籽饼粕等）的不良颜色，迎合用户心理习惯，增加市场竞争力；

同时，也起到刺激食欲和诱食的作用；还可以通过着色剂改善畜、禽、水产品的色泽，

提高其商品价值。如添加着色剂使肉鸡皮肤、禽蛋卵黄、牛奶的黄油以及鱼虾等水产

品的肉质具有更鲜艳、美观的色泽和更优良的产品质量，迎合消费者的心理。生产企

业违禁添加着色剂，长期食用此类产品将严重危害人体健康。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

Agilent 1260 高效液相色谱仪；

博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。

试剂材料

甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸铵、氨水、甲酸均为分析纯；

八种着色剂混合标准品（纯度 99%）；

2%氨化甲醇溶液：量取氨水 2 mL，加甲醇溶解并稀释至 100 mL，摇匀；

0.02 mol/L 乙酸铵溶液：称取乙酸铵 1.54 g，用水溶解并稀释至 1000 mL。

一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45 μm，直径 13 mm)；

Cleanert PWAX 固相萃取柱：150 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

称取 2 g 茶叶放入 50 mL 离心管中，加入 10 mL 60℃水，浸泡 1 小时后，超声提

取 15 min，10000 r/min 离心 10 min，取上清液转移到新的离心管中，重复提取一次，

合并两次提取液，待净化。

样品净化

先将 Cleanert PWAX (150 mg/6 mL)小柱依次用 6 mL 甲醇，6 mL 水活化平衡；然

后将待净化液过柱；用 6 mL 水（pH 为 4.0）、6 mL 甲醇/甲酸（6︰4，V/V）和 6 mL

水（pH 为 7.0）洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干；最后用 6 mL 2%氨化甲

醇洗脱。收集洗脱液于 40℃氮气吹干，用 1 mL 水溶解残留物，过 0.45 µm PTFE 亲水

滤膜后待测。

实验条件

液相条件

色谱柱：Venusil XBP C18(L)，5 μm，150 Å，4.6 × 150 mm

流动相：A相-0.02 mol/L乙酸铵溶液，B相-甲醇

柱 温：30℃

进样量：20 µL

梯度洗脱：见表1

结果与讨论

实验结果

由表 2 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测八种着色剂加标回收率在 75% ~

115%之间，能够满足标准要求。

本实验建立了茶叶中八种着色剂残留量检测的实验方法，并结合高效液相色谱对

茶叶中八种着色剂残留物的含量进行了测定。对于加标量为 0.25 mg/kg 的靛蓝、0.05

mg/kg 的柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和酸性红样品，回收率在

75% ~ 115%之间，符合要求。