【飞诺美色谱】豆芽中植物生长调节剂的分析方法

摘要：本实验采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱的方法，建立了豆芽中植物生长调节剂的检测方法。样品经酸化乙腈提取，Cleanert MCS 固相萃取柱净化，DA-5MS（30 m × 0.25 mm × 0.25µm）和 Venusil MP C18 色谱柱（3 µm，100 Å；3.0 × 50 mm）分离，采用水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，样品添加量为 0.1 mg/kg 和 0.004 mg/kg 时，回收率在 60%~ 100%之间，能够满足检测要求。

关键词：植物生长调节剂；Cleanert MCS 固相萃取柱；Venusil MP C18 色谱柱

前言

植物生长调节剂 ，是用于调节植物生长发育的一类农药，包括人工合成的具有天然 植物激素 相似作用的化合物和从生物中提取的天然 植物激素 。是人们在了解天然 植物激素 的结构和作用机制后，通过人工合成与植物激素具有类似生理和生物学效应的物质，在农业生产上使用，有效调节作物的生育过程，达到稳产增产、改善品质、增强作物抗逆性等目的。按照登记批准标签上标明的使用剂量、时期和方法，使用 植物生长调节剂 对人体健康一般不会产生危害。如果使用上出现不规范，可能会使作物过快增长，或者使生长受到抑制，甚至死亡。对农产品的品质会有一定影响，并且对人体健康产生危害。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCIEX API 4000 + 液相质谱联用仪

试剂材料

甲醇、乙腈为色谱纯；实验用水为超纯水；氯化钠、无水硫酸钠、氨水为分析纯；

40 mmol/L 的盐酸溶液：吸取 0.33 mL 的盐酸与 100 mL 纯水混合配成浓度为 40mmol/L 的盐酸溶液

5%氨化甲醇：量取 95 mL 甲醇，加入 5 mL 氨水，混匀

农药混合标准工作液：0.1 µg/mL，甲醇溶解；

Cleanert MCS：500 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

称取试样 10 g 于 50 mL 离心管中，加入 40 µL 甲酸，再加入 20 mL 乙腈，涡旋混匀 1 min，然后超声 30 min，超声结束冷却后，8000 r/min 离心 5 min，上清液转移至新的 50 mL 离心管中，然后加入 3.0 g 氯化钠，涡旋混匀 1 min，超声 10 min，冷却后 8000 r/min 离心 5 min，吸出乙腈层，用无水硫酸钠脱水过滤至 40 mL 玻璃瓶中，用氮气吹至近干，加入 2 mL 甲醇超声溶解，待净化。

样品净化

净化一：

取上述待净化液 1 mL，加入到 QuEChERS 净化管中，混匀，静止 5 min，进一步混匀，然后 8000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后，进行 GC-MS 分析测定 2,4-D-乙酯和 2,4-D-丁酯。

净化二：

另外取 1 mL 待净化液，加入 9 mL 40 mmol/L 的盐酸溶液，然后超声混匀，转移至 15 mL 离心管后，8000 r/min 离心 5 min，上清液待净化。先将 MCS（500 mg/6mL）小柱依次用 5 mL 甲醇，5 mL 水和 5 mL 40 mmol/L 的盐酸溶液活化平衡；然后将待净化液转移到小柱内，待样品过柱后，用 5 mL 水淋洗小柱并抽干；最后用 5mL 甲醇洗脱收集，抽干得洗脱液 1；再用 5 mL 5%氨化甲醇（V/V）洗脱收集，抽干得洗脱液 2。洗脱液 1、2 于 45℃氮气吹干，用 1 mL 20%乙腈水（V/V）溶解定容，过 0.22 µm PTFE-Q 针式过滤器后，进行 LC-MS/MS 检测。洗脱液 1 用于分析赤霉素、2,4-D、4-氯苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2-萘乙酸 6 种植物生长调节剂；洗脱液 2 用于分析氯吡脲、噻苯隆、6-BA、多效唑 4 种植物生长调节剂。

色谱条件

气质检测

色谱柱：DA-5MS (30 m × 0.25 mm × 0.25 µ m)；

进样量：1 µ L；

进样口：220℃，不分流进样；

程序升温：起初 80℃保持 1min，之后以 10℃/min 的速度升至 280℃，保持 21 min

载气：氦气，1 mL/min

离子源：230℃

液质检测

液相条件

色谱柱：Venusil MP C18，3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm

流动相：A：水；B：乙腈

柱 温：30℃

进样量：5 µL

质谱条件

正离子模式

离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：45 psi；气帘气压力：25 psi；辅助气压力：45 psi；离子源温度：500℃；采集方式：多反应监测（MRM） 。

负离子模式

离子源：ESI-；电喷雾电压：-4500 V；雾化气压力：40 psi；气帘气压力：25 psi；辅助气压力：40 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(MRM)。

梯度洗脱：

质谱参数：见表2

实验结果

由表 3 可知，采用固相萃取结合气相色谱串联质谱和液相色谱串联质谱的方法检测豆芽中 12 种植物生长调节剂，加标回收率在 60% ~ 100%之间，能够满足检测要求。由图 1 ~ 图 17 可知，用 DA-5MS 和 Venusil MP C18 色谱柱检测 12 种植物生长调节剂，峰形良好，且保留时间稳定。

实验谱图

结论

本实验建立了豆芽中植物生长调节剂的 GC-MS 和 LC-MS/MS 检测方法，并结合固相萃取技术对豆芽中植物生长调节剂的含量进行了测定。对于加标量为 0.1mg/kg 和 0.004 mg/kg 的样品，植物生长调节剂样品回收率在 60% ~ 100%，变异系数小于 10%，能够满足实验要求。说明 QuEChERS 产品和 Cleanert MCS 小柱可以用于豆芽中植物生长调节剂的检测，且稳定性良好。