本文使用Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪,遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定(GB/T 20752-2006)》提供的方法,检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。
1.样品信息
2.样品提取及衍生
2.1提取
称取猪肉样品2g(精确到0.01g),置于50mL棕色离心管中,加入15mL甲醇-水混合溶液(v:v=2:1),均质1min, 再用5mL甲醇-水混合溶液洗涤到头,二者合并8000r/min离心5min,吸取上清液倒掉。
注:为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响,可加入同位素内标,采用内标法定量检测。
2.2水解和衍生(注意避光)
向棕色离心管中加入20mL 0.2mol/L的盐酸溶液,涡旋1min使之混合均匀,之后加入0.3mL浓度为0.05mol/L的2- 硝基苯甲醛,混匀,于37℃温水中避光衍生16小时。
2.3净化处理
将衍生后的样品冷却至室温,加入5mL 0.1mol/L的磷酸氢二钾,并用1mol/L的氢氧化钠溶液调PH约为7.4,混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2mL/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱(规格为60mg/3mL,用5mL甲醇、5mL水活化),并用10mL的水洗涤固相萃取小柱,然后负压抽干柱子15min。用5mL乙酸乙酯洗脱于20mL棕色瓶中(此过程可在Qdaura ® 卓睿全自动固相萃取仪上完成,仪器方法见图1)。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液(10mL乙腈,0.3mL的乙酸用水稀释至100mL)定容至1mL,充分溶解,并用0.22µm滤器过滤。
3. 检测方法
色谱柱:Venusil ® MP C18
2.1×150mm,5µm,100Å
质谱仪:API 4000+
流动相:A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液
流速:0.2mL/min
进样量:5µL
离子源:电喷雾(ESI),正离子模式扫描方式:多反应监测(MRM)
表 1 梯度洗脱条件
时间(min) | A(%) | B(%) |
---|---|---|
0 | 80 | 20 |
1 | 80 | 20 |
3 | 50 | 50 |
7 | 25 | 75 |
7.1 | 5 | 95 |
10 | 5 | 95 |
10.1 | 80 | 20 |
16 | 80 | 20 |
4.实验结果
图 2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图
图 3 SEM(209/166) 质谱图
图 4 AOZ(236/134) 质谱图
图 5 AHD(249/134) 质谱图
图 6 AMOZ(335/291) 质谱图
表 4 猪肉中 0.5ppb 加标回收实验结果
名称 | 1(%) | 2(%) | 3(%) | 平均回收率(%) | RSD(%) |
---|---|---|---|---|---|
AMOZ | 109.43 | 97.84 | 109.75 | 105.67 | 6.42 |
SEM | 91.81 | 88.91 | 88.22 | 89.65 | 2.12 |
AHD | 80.68 | 82.11 | 77.25 | 80.01 | 3.12 |
AOZ | 83.94 | 80.70 | 80.85 | 81.83 | 0.02 |
实验结论 :Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计,用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作, 全净化过程可在避光条件下进行,保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求, 结果准确可靠,重现性好。
5.订货信息
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
---|---|---|
Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道24位 | SPE-40 |
Cleanert® PEP-2固相萃取柱 | 60mg/3mL,50支/包 | PE0603-2 |
Venusil® MP C18液相色谱柱 | 2.1×150mm, 5µm, 100Å | VA951502-0 |
针式过滤器(Nylon) | 0.22µm,直径13mm,200个/pk | AS021320 |
一次性无针头注射器 | 5mL,100/pk | ZSQ-5ML |
1.5mL样品瓶 | 棕色,100/pk | 1109-0520 |
1.5mL样品瓶盖 | 100/pk | 0915-1819 |
甲醇 | 4×4L/箱 | AH230-4 |
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