【飞诺美色谱】猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 LC-MS/MS法

艾杰尔飞诺美

2024/04/01 18:05

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本文使用Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪，遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（GB/T 20752-2006）》提供的方法，检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。

1.样品信息

2.样品提取及衍生

2.1提取
称取猪肉样品2g(精确到0.01g)，置于50mL棕色离心管中，加入15mL甲醇-水混合溶液(v：v=2：1)，均质1min，再用5mL甲醇-水混合溶液洗涤到头，二者合并8000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。
注：为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响，可加入同位素内标，采用内标法定量检测。

2.2水解和衍生(注意避光)
向棕色离心管中加入20mL 0.2mol/L的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3mL浓度为0.05mol/L的2- 硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。

2.3净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5mL 0.1mol/L的磷酸氢二钾，并用1mol/L的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2mL/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱(规格为60mg/3mL，用5mL甲醇、5mL水活化)，并用10mL的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5mL乙酸乙酯洗脱于20mL棕色瓶中(此过程可在Qdaura ® 卓睿全自动固相萃取仪上完成，仪器方法见图1)。洗脱液于40℃下氮气吹干。

用样品定容溶液(10mL乙腈，0.3mL的乙酸用水稀释至100mL)定容至1mL，充分溶解，并用0.22µm滤器过滤。

3. 检测方法
色谱柱：Venusil ® MP C18
2.1×150mm，5µm，100Å
质谱仪：API 4000+
流动相：A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液

流速：0.2mL/min
进样量：5µL
离子源：电喷雾(ESI)，正离子模式扫描方式：多反应监测(MRM)
表 1 梯度洗脱条件

时间(min)	A(%)	B(%)
0	80	20
1	80	20
3	50	50
7	25	75
7.1	5	95
10	5	95
10.1	80	20
16	80	20

4.实验结果

图 2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图

图 3 SEM(209/166) 质谱图

图 4 AOZ(236/134) 质谱图

图 5 AHD(249/134) 质谱图

图 6 AMOZ(335/291) 质谱图

表 4 猪肉中 0.5ppb 加标回收实验结果

名称	1(%)	2(%)	3(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
AMOZ	109.43	97.84	109.75	105.67	6.42
SEM	91.81	88.91	88.22	89.65	2.12
AHD	80.68	82.11	77.25	80.01	3.12
AOZ	83.94	80.70	80.85	81.83	0.02

实验结论：Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计，用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作，全净化过程可在避光条件下进行，保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求，结果准确可靠，重现性好。

5.订货信息

产品名称	规格包装	订货号
Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪	4通道24位	SPE-40
Cleanert® PEP-2固相萃取柱	60mg/3mL，50支/包	PE0603-2
Venusil® MP C18液相色谱柱	2.1×150mm, 5µm, 100Å	VA951502-0
针式过滤器(Nylon)	0.22µm,直径13mm,200个/pk	AS021320
一次性无针头注射器	5mL,100/pk	ZSQ-5ML
1.5mL样品瓶	棕色,100/pk	1109-0520
1.5mL样品瓶盖	100/pk	0915-1819
甲醇	4×4L/箱	AH230-4