【飞诺美色谱】猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS法

泰乐菌素(Tylosin)，亦称泰农、泰乐霉素，是美国于 1959年从弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素，对支原体有特效，对多种G+菌具有很强的抗菌作用，还对部分G-菌、弯杆菌、螺旋体及球虫具有抑制作用。其产品形式有酒石酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐及乳酸盐，易溶于水，被广泛的应用于畜牧业的畜禽疾病防治及促生长的饲料添加剂。2006年欧盟成员国全面禁止使用抗生素作为促生长剂。欧盟对肉制品中泰乐菌素的最高残留量规定为100µg/kg。我国农业部在 2002年公告的《关于动物性食品中兽药最高残留的通知》中，规定泰乐菌素在鸡、猪、牛的肌肉、脂肪、肝、肾组织中的最高残留量为200µg/kg。

1.样品提取
称取5.0 g(精确到0.01 g)均质好的样品，置于50 mL离心管中，加入20 mL 乙腈，用均质器均质1 min，在振荡器上振荡10 min，4200 rpm离心5 min，取上清液于另一50 mL离心管中；再加入20 mL乙腈于样品残渣，重复提取一次，合并上清液于50 mL离心管中，用乙腈定容至50 mL。移取 10 mL提取液，加入30 mL正己烷，涡旋振荡2 min，以4200 rpm离心5 min，弃去正己烷，下层提取液于50℃水浴氮气浓缩至近干。用10 mL磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物，作为待净化液。

2.净化方法
先将Cleanert® PEP-2 (500mg / 6mL)小柱分别用5 mL甲醇，5 mL水，5 mL磷酸盐缓冲液活化平衡；然后将待净化液过柱(流速控制在1 mL/min)；用5 mL水和5 mL甲醇-水 (2+8)洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干30 min；最后用10 mL甲醇洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1 mL 10%甲醇-水溶液溶解残留物，过0.22 µm滤膜后待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Venusil® MP C18，
2.1×50 mm，5 µm，100 Å；
流动相：A相-0.1%甲酸水，B相-0.1%甲酸乙腈

柱温：30℃；
进样量：10 µL；

梯度洗脱：见表1
表 1 液相色谱梯度洗脱条件

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

电喷雾电压：5500 V

雾化气压力：50 psi
气帘气压力：15 psi

辅助气压力：45 psi

离子源温度：550℃
采集方式：多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率质谱参数(见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测泰乐菌素，加标量为4.0 µg/kg、20.0 µg/kg加标回收率在80%~100%之间，RSD值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经Cleanert® PEP-2固相萃取柱净化，采用 Venusil® MP C18色谱柱检测得到的泰乐菌素峰形良好，且保留时间稳定。

图 1 泰乐菌素样品加标 4.0 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

图 2 泰乐菌素样品加标 20.0 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

结论：

本实验建立了泰乐菌素残留量的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中泰乐菌素的含量进行了测定。对于加标量为4.0 µg/kg、20.0 µg/kg的样品进行了检测，回收率在80%~100%，符合国标要求。固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中泰乐菌素的残留量。

5.订货信息