【飞诺美色谱】猪肉、鸡肉中四环素类药物残留量检测 LC-MS/MS法

四环素类(Tetracyclines,TCs)是由链霉菌产生的一类 广谱抗生素，主要包括四环素(Tetracycline,TC)、土霉素(Oxytetracycline,OTC)、金霉素(Chlortetracyline,CTC)等， 其结构均含并四苯基本骨架，已被广泛应用于可食性动物疾病的治疗和药物添加剂中，常用于预防和治疗动物疾病。四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定，其含有许多羟基、烯醇羟基及羰基，在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物，与钙或镁离子形成不溶性的钙盐或镁盐，与铁离子形成红色络合物，与铝离子形成黄色络合物。为了有效地预防四环素类药物的滥用，欧盟、日本和美国等都制定了动物组织及牛奶中的最大残留限量， 其中规定在动物组织中的最大残留限量为0.1 mg/L。GB/T 21317-2007中规定最低检出限为50.0 µg/kg。

1.样品提取
称取5.0 g(精确到0.01 g)均质好的试样，置于50 mL离心管中，分别加入20 mL、20 mL、10 mL 配置好的0.1 mol/ L的EDTA-Mcllivaine缓冲溶液，1000 rpm涡旋混合1 min， 再超声提取10 min，于3000 rpm离心5 min，合并上清液(控制上清液体积不超过50 mL)并定容至50 mL，混匀，5000 rpm离心10 min，用快速滤纸过滤，待净化。

2.净化方法
先将Cleanert® PEP-2小柱分别用5 mL甲醇和5 mL水活化，再准确吸取10mL提取液以1滴/s的速度过SPE小柱，待样液完全流出后，依次用5 mL水和5 mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去全部流出液。减压抽干小柱5 min，最后用10 mL 甲醇+乙酸乙酯(1:9，v/v)洗脱。将洗脱液低于40℃氮气吹干，用1 mL甲醇水(3:7，v/v)溶液溶解残渣，过0.45 µm滤膜，待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Durashell C18，
2.1×50 mm，3 µm，100 Å；
流动相：A相-0.3%甲酸水溶液，B相-0.3%甲酸乙腈

柱温：30℃；
进样量：5 µL；

梯度洗脱：见表1

表 1 液相色谱梯度洗脱条件

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

电喷雾电压：5500 V

雾化气压力：70 psi
气帘气压力：15 psi

辅助气压力：65 psi

离子源温度：550℃
采集方式：多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率
定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞电压(见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测三种四环素类药物，加标量为10.0 µg/kg、50.0 µg/kg、200 µg/kg，回收率为90%~105%，能够满足检测要求。由图1-3可看出经Cleanert® PEP-2固相萃取柱净化，采用Durashell C18色谱柱检测能够使三种四环素药物得到良好的分离，且各种物质峰形良好，保留时间稳定。

图 1 四环素类样品加标 10.0 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

图 2 四环素类样品加标 50 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

图 3 四环素类样品加标 200 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

结论：
本实验建立了三种四环素类药物的LC-MS/MS检测方法。实验对加标量为10 µg/kg、50 µg/kg、200 µg/kg的样品进行了检测，结果表明前处理方法回收率在90%-105%之 间，均在国标要求范围内，固相萃取方法稳定而且色谱柱重现性较好。说明本方法能够用于检测动物源性食品中的四环素类药物残留。

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