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利用未衍生化氨基酸的 LC/MS 分析进行生物反应器细胞培养监测
2018/05/20 14:05
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6545 Q-TOF 液质联用系统
型号： 6545
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
本应用简报介绍了发酵培养基中氨基酸 LC/MS 分析的解决方案。氨基酸的极性使其难以进行反相液相色谱分析，因此通常使用衍生化来改善其保留能力。然而，亲水相互作用色谱 (HILIC) 无需衍生化也能保留并分离复杂的氨基酸混合物，同时还具有与传统反相液相色谱类似的工作流程。HILIC 与质谱的组合提供了一种极其简单而功能强大的未衍生化氨基酸分析解决方案。
前言
监测生物反应器和发酵培养基中发现的各种极性化合物，是亲水相互作用色谱 (HILIC) 的一种挑战性实际应用。使用高 pH条件与负离子模式 LC/MS 检测，可以在一次分析中实现对氨基酸、原料与废弃物的监测。Agilent AdvanceBio MS SpentMedia 的键合相在高 pH 流动相下具有出色的稳定性，非常适合该体系的分离。尽管基质的分析充满挑战性，进样间的重现性仍十分优异。中空纤维反应器和转瓶反应器的检测结果揭示了培养细胞的葡萄糖和氨基酸消耗以及乳酸分泌。
结论
Spent 培养基中的氨基酸在 HILIC-MS 的负离子模式下成功得到了分析。通常难以分析的亮氨酸/异亮氨酸同量异位素实现了基线分离，分离度为 1.6。氨基酸作为两性离子，在正离子和负离子模式下都容易电离，但在高 pH 负离子模式下能够实现对细胞培养基、原料和细胞废弃物的同时监测。
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