单孔细胞核转染系统

Neon NxT 电转染系统：可靠的转染性能使用高效、快速、简单、灵活的紧凑型电转染系统，节省宝贵的研究时间，并保护珍贵的样本。Invitrogen Neon NxT 电转染系统采用专有移液器吸头技术，再结合经过简化的工作流程和灵活操作，有助于减少样本损失，降低污染风险，减少操作步骤，让您全方位管控各种实验。Neon NxT 电转染系统的优势极高的转染效率和细胞活率—可转染具有挑战性的细胞株，转染效率高、细胞活率高 提高基因编辑效率—专有的Neon NxT基因编辑缓冲液可以帮助提高基因编辑性能根据需要灵活变通—针对不同的细胞类型、细胞密度、递送物质和电转染方案，精确优化电转染参数节省宝贵的研究时间—利用一个缓冲液试剂盒和直观的用户界面，通过 3 步简单的工作流程即可快速转染细胞节省珍贵样本—尽量减少样本输送造成损失和污染的风险使用该转染系统对多种细胞株进行转染时，均可实现极高的转染效率和细胞存活率Neon NxT 电转染系统是一款电转仪，在极难转染的细胞（包括免疫细胞、原代细胞和干细胞）中实现高达 90% 的转染和基因编辑效率。150 多个细胞株已在经过优化的即用条件下进行了转染效率和细胞存活率测试。 图1 .Neon NxT 电转染系统的转染效率。 使用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 在 10 μL 或 100 μL 电转染反应液中对细胞进行转染。报告的转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比 (n = 3) 注意： 初始 T 细胞仅在 100 μL 反应中进行电转染。图 2.Neon NxT 系统进行电转染后的细胞存活率。 在使用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 在 10 μL 或 100 μL 电转染反应液中对细胞进行转染。转染细胞使用 Invitrogen SYTO Red 死细胞染色剂染色，并通过 Invitrogen ATTUNE NxT 流式细胞仪评估细胞存活率。报告的细胞存活率 (%) 为 3 次测量的平均值。 注意： 初始 T 细胞仅在 100 μL 反应液中进行电转染。图 3. Neon NxT 重悬基因编辑缓冲液在基于 CRISPR-Cas9 的基因编辑实验中的性能。. 在 10 μL 或 100 μL 反应中电转细胞。(A) 以 GFP 阳性细胞百分比表示的 GFP 供体 DNA 基因敲入效率。(B) GFP 供体 DNA 敲入后细胞的存活率。(C) 以电转后不表达 GFP 的初始 GFP 阳性细胞百分比表示的基因敲除效率。(D) 电转后基因敲除细胞的存活率。提高基因编辑效率基因编辑在进一步了解人类健康和疾病方面大有可为。在基因编辑工作流程中，一个关键而又具有挑战性的步骤是将 CRISPR 核糖核蛋白 (RNP)、DNA 和 RNA 分子有效地递送到所选择的细胞系中，也就是所谓的转染。如上所述，电转是最广泛使用的递送方法，因为它能够实现高转染效率，即使是难以转染的细胞也不例外。与 Neon NxT 电转染系统配合使用时，我们的基因编辑试剂和 Neon NxT 重悬基因编辑缓冲液可以帮助提高基因编辑性能，使用 CRISPR Cas9 等特定物质进行哺乳动物细胞（包括原代细胞、干细胞和难以转染的细胞）的基因敲除或基因敲入实验 (图 3)。为什么 Neon NxT 电转染系统可以很好地替代电转比色皿？与标准比色皿电转染腔室不同，Neon NxT 电转染系统使用专有的生物兼容移液器吸头腔，可产生更均匀的电场。这一设计可以更好地维持生理状态，与常规电转染相比，细胞存活率更高。形成更加均匀的电场在整个电转染腔室内维持稳定的 pH 值产生极少热量生成较少离子减少细胞遇到的剪切力图 3.Neon NxT 移液器吸头相对于标准电转比色皿的优势。 专有的生物兼容型 (A) Neon NxT 吸头展示了成熟可靠的毛细管电转染技术，与(B) 电转比色皿相比具有重要优势。针对不同的细胞类型、细胞密度、递送物质和电转染方案，精确优化电转染参数电转染参数可定制使用 Neon NxT 电转染系统，您可以精确控制对实验至关重要的参数，而不会将宝贵的时间浪费在调整不准确的参数上。您可以利用该转染系统修改以下参数：脉冲电压脉冲宽度脉冲次数细胞类型缓冲液类型递送物质类型对各种递送物质、细胞类型和细胞密度均可通用将 DNA、RNA 或蛋白质递送到多种哺乳动物细胞中，每次反应可灵活转染 2 x 10⁴ 至 6 x 10⁶ 个细胞。使用 TransfectionLab 云端 APP 轻松制定计划Invitrogen TransfectionLab 是一款云端 APP，可以通过Thermo Fisher Connect平台进行访问，能够根据每个电穿孔实验，从设计阶段开始量身定制分步指南。您可以远程设置多达 384 个样本的多个孔板布局，通过已经连接网络的 Neon NxT 系统，您可以直接访问 APP 中保存的任何方案或孔板布局。利用一个缓冲液试剂盒和直观的用户界面，通过 3 步简单的工作流程即可快速转染细胞经简化的电转染工作流程Neon NxT 电转染系统的工作流程经过简化，易于操作和执行，用户几乎不需要进行培训，提高了结果的一致性和可再现性。使用该转染系统可轻松完成电转染过程：首先，将细胞和质粒混合物加入 Neon NxT 移液管吸头中。其次，插入移液器架，按下“电穿孔”。最后，将转染细胞转移至培养皿中。由于转染在移液器吸头内进行，所以 3 个简单的步骤即可完成转染操作：吸液、电转染、分液。该电转染系统能够缩短处理时间除了简化工作流程外，与常规电转染系统相比，我们专有的电转染技术可将总处理时间缩短至 10-15 分钟，因为转染在 Neon NxT 移液器吸头内进行。一个缓冲液试剂盒即可用于多种哺乳动物细胞类型解决了根据细胞株寻找缓冲液试剂盒的问题。我们使用一个缓冲液试剂盒简化了这一过程，该试剂盒可适配 150 多个哺乳动物细胞株。我们建议使用电压低于 1,900 V 的 Invitrogen Neon NxT 重悬缓冲液 R 和电压较高的 Invitrogen Neon NxT 重悬缓冲液 T。节省时间的孔板设置使用 Neon NxT 电转染系统的直观用户界面，提前设置整个孔板，而不用“快速启动 (Quick Start)”功能调整不同样本之间的电转参数。在每个样本进行电转染时，可监测屏幕上的进展情况，在 20 分钟内最多可完成 24 个样本的电转染。

Invitrogen™ EVOS™ M5000细胞成像系统为您的科学研究带来简便、自动化细胞成像。一体化设计包含高灵敏单色相机和独特的彩色照明系统，精密的光路系统，直观的成像和操作系统，可帮助生物学家快速获得高质量细胞和组织样品图像，并可对细胞进行定量分析。荧光和彩色明场成像EVOS M5000采用科研级CMOS高清相机，适合各种细胞和组织样品荧光成像，即时获得可供发表的精美图像。独特的彩色照明系统，轻松拍摄免疫组化、H&E等明场样本，图片色彩更保真。Z-stack成像EVOS M5000具有自动聚焦功能，成像系统可以对不同聚焦平面进行Z-Stack扫描；不仅可以拍摄到同一视野下不同层面的图像，还能从每张图像中提取聚焦效果最佳的像素，生成Maximum Projection图像，或进行三维重构分析。适合厚组织样本、神经元及网络研究、3D细胞球等样品成像。活细胞检测配备EVOS台式Onstage Incubator活细胞培养室，精确控制湿度、温度、CO2、O2或N2浓度，模拟生理环境，通过时间序列成像对活细胞生长进行监测。适用于细胞缺氧实验、胚胎发育、细胞迁移等动态观察应用。用Image-iT Hypoxia缺氧指示剂和NucBlue活细胞核染料染A549细胞，暴露于不同氧浓度。左图20% O2条件下，仅呈现蓝色细胞核；右图1% O2条件下，观察到明显红色Hypoxia试剂信号，表明细胞缺氧。成像和分析一体化操作系统只需轻点鼠标，即刻拍摄多通道荧光成像和彩色明场成像。可随时在操作界面上快速切换物镜、荧光通道，调节光强度、曝光时间等参数，选择手动或自动聚焦模式拍摄样本。然后，在分析界面对细胞图像进行定量分析，如细胞计数、细胞活力等应用。Jurkat细胞热处理(60?C处理1小时)后，应用ReadyProbes 细胞活力试剂盒染色，通过EVOS M5000成像，DAPI（蓝色）染所有细胞，NucGreen dead 488（绿色）染死细胞，成像操作软件自动识别细胞并输出每个通道细胞个数，分析细胞活力。

简介：Nucleofector核转染技术随着系统生物学与交叉学科方法的应用，要求细胞和系统 模型越来越接近体内细胞的功能。这就意味着将来的细胞 转染多数会是原代细胞的转染。而传统的方法很难成功转 染原代细胞。另外即使使用细胞系做为系统模型，传统的 方法也难重复出好的转染效率与成活率。Nucleofector 技术就从根本上解决这个问题。无论是原代细胞、干细胞 还是细胞系，它每次都可重复出很高的转染效率。 1998年，Nucleofector技术开发成功，2001年上市，是市场 上第一个有效的、非病毒介导的、用于原代细胞与难转染细 胞系的转染方法。现在Lonza还在继续不断改革创新，为研 究者推出更多更好的新产品。 原理：NucleofectionTM技术是利用电击在细胞膜上穿个小孔。并且 综合优化了各种特定细胞转染程序与转染液，使得转染物质 （如DNA、RNA等）不仅可以进入细胞质，而且可直接通过核 膜进入细胞核。这使得细胞的转染效率最高可达99%。 Nucleofector技术的组成：Nucleofector技术由Nucleofector仪器、细胞转染试剂和操作 手册组成※ Nucleofector仪器：1. 模块化设计，各模块可单独配置；2. 核心模块内置各种细胞优化的电极参数，可直接选择；3. X模块提供中低通量(1-16样)，中低细胞数量(约1e+5 到1e+7)转染；4. Y模块提供24孔板直接贴壁转染；5. 96模块提供高通量(96样)，低细胞数量(约1e+5)转染；6. LV模块提供低通量，大量细胞直接转染 (1e+8到1e+9)；※ 试剂盒：包含有转染溶液、添加剂、专用电极杯、吸管、 阳性对照质粒。转染试剂为细胞转染提供保护，即保证了 高的转染效率与成活率，又帮助细胞维持良好的生理功能 性状。我们提供有一系列的优化转染试剂盒与操作手册。※ 数据库与操作手册：我们的在线数据库提供600种以上细胞 的转染数据和操作手册。优化的操作手册除了操作手册除了 操作指导外，还包括细胞来源、传代、生长条件、培养基以 及转染后培养等细节技巧。 最具兼容性的模块：Nucleofector X模块 针对不同数量级的细胞，提供不同的电极杯。X模块可以使用两种不同形式的聚合材料电极，分别是如下 电极杯和电极板条 100ul电极杯※ 新式可导电材料的电极杯替代了原来铝制电极杯※ 低通量但是一次可转较大量的细胞 (适用于生化应用或Western Blot实验) 16孔20ul电极板条※ 与96孔电极杯的板条一致※ 中通量，低细胞数量（报告基因分析，RNAi） 可在相同的条件下转不同数量的细胞X模块使用的相同材质制成的20ul电极板条与100ul电极杯，X模块中不同的电极模式可选用相同的电转程序(系 统可自动转化应用于不同模块的参数，客户无需进行额 外操作)，实现实验的方便性与灵活性最大化。 一旦其中一种电极形式优化好，另一种就很容易转化好。 不同通量的电转条件也很容易转化。 96孔模块的操作手册也适用于X模块。 贴壁转染模块 4D-Nucleofector Y Unit 至今为止基于电转的方法都是要求细胞处于悬浮状态 Nucleofector进入一个新时代，细胞可以在贴壁状态 下直接转染。细胞培养在24孔板中，插入电极板即可 完成转染。 优点：※ 细胞生长在24孔板中，直接转染※ 可在细胞生长的任何时期进行转染※ 细胞活力好，转染效率最高可达70%※ 与Clonetics原代动物神经元兼容 耗材：根据简化试剂盒的原则，我们提供两种转染试剂AD1与AD2， 适用于所有细胞类型。试剂盒可按下图的指示进行选择： 大量细胞转染：LV模块 使用4D-Nucleofector核转系统，用于小量细胞转染的实验条件，可直接放大， 用于大量细胞的转染。 LV模块采用封闭系统，可转染1×107至1×109细胞。转染的条件可使用X模块， 以小体积进行摸索。之后再使用LV模块，不需要重新优化，即可进行大量细胞 转染。LONZA公司已进行过验证的细胞有人T细胞、CHO-S、HEK293-S和K562等。 优势： ※ 系统封闭 ※ 在无菌环境下转染多达109细胞； ※ 系统可放大 ※ 可用小体积优化并确定转染条件； ※ 详细的操作步骤 ※ 在线数据库中收录了700多种细胞的实验条件； ※ 操作简单 ※ 简单的培训即可掌握实验技术； ※ 软件系统 ※ 操作软件符合21CFR part11的规定； 两种规格可选： 从小体积少量细胞直接放大到大体积大量细胞 应用：※ 对人原代细胞进行体外基因修饰以用于细胞治疗（例如，基因编辑、生产CAR-T细胞）；※ 瞬时转染后生产治疗性蛋白或抗体，进行各种质粒的筛选；※ 瞬时转染大量细胞后用于细胞学实验； 96孔模块96孔模块可对原代细胞和各种细胞系提供1-96通量 的实验条件。可设置96个不同的实验条件，以得到 最优的实验结果。完整的系统包含3个部分：※ 4D核转仪(Core+X模块)来发送核转程序※ 96-well Shuttle Device来进行96孔的核转※ 安装96-well Shuttle Device软件的电脑， 用来控制仪器 耗材：※ 用于原代细胞和各种细胞系的专用试剂盒※ 对于未知条件的细胞提供优化试剂盒 优点：※ 96个转染孔可单独设置转染程序，完成全部核转 只需不到5分钟※ 一次核转，实验96个不同条件，完成条件优化 订购热线：400-686-0100 基本款：Nucleofector 2b Device2001年推出，用于实验室研究的单管系统，低通量 有效转染质粒、RNA等不同底物到原代细胞和难转 染细胞系中。拥有4000篇以上的引用文献。 耗材：※ 提供50多种原代细胞，血液细胞及干细胞试剂盒※ 5种细胞系试剂盒涵盖了所有种类细胞系※ cGMP试剂盒适用于蛋白生产应用 订货信息:北京赛百奥科技有限公司供应LONZA细胞核转仪并提供技术支持，欢迎咨询！更多详细参数请登录客服QQ：； TEL： （微 信 同 号）