液相质谱蛋白分析

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液相质谱蛋白分析相关的厂商

  • 北京百泰派克生物科技有限公司
    北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。百泰派克技术平台检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。代谢组分析平台：靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析；通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。蛋白质从头测序平台：Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析；100%序列测定，精准蛋白、抗体测序。生物制药分析平台：生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
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  • 上海琪特分析仪器有限公司
    上海琪特分析仪器有限公司专注于自动核酸蛋白分离层析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪等生化仪器的研发生产，有30多年的生产历史经验，技术力量雄厚。一贯秉承注重专业品质，结合尖端科技的理念。拥有一流的研发能力、与众不同的品质和完善的售后服务，坚持信誉第一，用户至上的方针，深得广大用户的信赖与好评。本公司生产的产品涵盖了自动核酸蛋白分离层析仪、自动液相色谱分离层析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、聚合物杂质测定仪、恒流泵系列、自动部份收集器系列、脱色摇床、旋涡混合器、电泳仪、电泳槽、梯度混合器、层析柱系列等。其中蠕动泵（恒流泵）、旋涡混合器、脱色摇床连续出口欧洲国家。2008年，自动核酸蛋白分离层析仪（由核酸蛋白检测仪、自动部分收集器、恒流泵、数据工作站、层析柱配套组成），成为国家教育部首届全国高职高专生物技术技能大赛指定使用产品。 本公司将不断推出高品质的新产品，为用户创造更理想的实验条件。同时希望与各界朋友真诚合作，为我国的科学教育事业做出贡献。
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  • 匠析生物（苏州）有限公司
    匠析生物技术（苏州）有限公司坐落于苏州市工业园区腾飞创新园，紧邻苏州生物纳米园这一目前国内Z为活跃的生物医药研发基地。 公司一方面可以为国内外的医药企业提供完整的实验仪器、耗材、备件以及售后维修维保的整体解决方案；主要为客户提供ThermoFisher、Waters、Agilent、GE、Beckmancoulter、Austar等yi流品牌的产品，产品包含色谱、质谱、光谱、样品前处理、实验室数据管理软件、蛋白层析系统、过滤产品、一次性生物相关产品等，并且提供相关技术咨询，维修维保等服务。 另一方面，公司提供专业的多糖类，淀粉类相关检测分析，通过Thermo Q-Exactive，高 效液相色谱，近红外仪，热值差示扫描仪，水分测定仪，热重分析仪，快速粘度分析仪，ICS，淀粉粒度分析仪等一系列相关检测的分析仪器，能够提供非常高质量的检测结果。我们的宗旨是与医药、食品、生物行业紧密结合，为客户提供全方位的优质、品质服务。
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液相质谱蛋白分析相关的仪器

  • 液相色谱质谱联用仪 400-892-9759
    LC-MS 2000是天瑞仪器自主研发生产的新一代液相色谱-单四级杆质谱联用仪。LC-MS 2000具有体积更小，灵敏度更高，维护更方便，性价比更优的特点。可应用于生物医药（生物大分子、蛋白、多肽）、化工、食品安全（农残、兽残、食品添加剂）、环境保护（环境中VOCS检测） 、公检刑侦（ 兴奋剂） 、工业检测（RoHS2.0指令、REACH指令）等领域。LC-MS 2000产品各项性能指标均达到国家检定规程要求。其采用更大抽速的进口真空泵、有效降低了本底真空的化学干扰。结构更加紧凑，大大缩减了仪器的体积，为实验室节约更多空间。产品性能升级离子源独特的涡旋加热气体设计，离子源温度控制精度高，均匀。多通道采集功能，快速地提高了分析速度及工作效率。可快速切换正、负电离模式，灵活测试；高压电源最快切换时间-10KV到+10KV可达20ms。专利的六级杆聚焦设计，可大幅提高离子的通过率，特别是高质量数离子信号。可获得丰富的质谱信息（包含分子量和多个结构信息）。ChemAnalyst软件功能强大、可一键切换的中英文用户界面，操作简便。可以选择多种离子源配置组合ESI（标配），APCI（选配），APPI（选配）。软件可操控自动进样器，有效提高样品通量，可完成无人值守的自动化序列检测。满足GMP，GLP要求，增加用户权限管理模块，数据完整性，审计追溯模块。测试质量范围10-2000AMU。大幅提升检测器的使用寿命，增强动态范围和灵敏度。应用领域生物医药：合成药物检测（CRO有机合成、生物多肽合成），原料药检测（合成原料药、中药药材）等。RoHS，REACH检测: PAEs，PAHs，双酚A，PBBs，PBDEs的超快速筛查。工业分析：生产质控（合成中间体及成品质量控制）。环境监测：环境污染物监测分析。食品安全：食品添加剂，食品残留物、污染物，非法添加物等。
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    厂商： 江苏天瑞仪器股份有限公司
    品牌： 天瑞仪器/skyray instrument
    型号： LC-MS 2000
    价格： 10万 - 50万元
  • 天瑞仪器 智能二维液相质谱联用仪 TDM3000-MS 400-892-9759
    TDM3000-MS是天瑞仪器自主研发的二维液相质谱联用仪,各项性能指标均达到国家检定规程要求。仪器采用液相色谱法的分析方法,通过二维液相色谱分离出待检测物,质谱法检测其含量进而算出被检测物含量。TDM3000-MS在临床上用于对来源于人体血液样本中的有机小分子可以进行定性或定量检测,包括诊断指示物(内源性物质:氨基酸、维生素、激素)和治疗监控化合物(外源性物质:治疗/毒性药物)。TDM3000-MS二维液相质谱联用仪是专门针对TDM特殊医用领域设计的产品,突破了临床应用中量值溯源与标准化缺乏的瓶颈,解决了传统液质联用产品自动化低、仪器复杂、投资较大等问题。只需要简单的样品前处理,可处理样品多达150个/天。样品放入自动进样器通过萃取柱和阀切换的技术,可以自动化地除去样品里的蛋白,盐,磷脂等干扰物质,其中萃取柱可以连续使用,寿命长达2000次,解决了TDM检测前处理自动化程度低,耗时长,消耗大的问题。去掉了磷脂的干扰,质谱ESI源的基质效应大大减轻,回收率接近100%。性能特点：1、自动萃取简单快捷只需简单蛋白沉淀后,即可自动完成在线萃取,去除血清中磷脂,蛋白,盐等成分,操作检测简单快捷(5-10min)2、质谱离子源稳定性高色谱柱,质谱离子源稳定性高,基质效应低,可使用外标法定量,血清中药物回收率高,无需同位素内标3、同时检测多个药物成分使用一个方法可以利用质谱的特异性,同时检测多个药物成分,效率高,对于低紫外吸收样品无需衍生,检测浓度范围可以覆盖1ppb到10ppm4、重复检测运行稳定可靠第三代色谱技术、技术领先、重复检测运行稳定可靠,系统采用精密丝杆传动技术,性能更好、稳定可靠耐用,自动进样器可以制冷控温5、重复检测精度高检测准确度高,检测精度高,重复检测精度高6、检测灵敏度高与传统二维液相紫外检测器相比,检测灵敏度高，进样量低(2ul到100uL),不易产生溶剂效应,基质效应低7、专属性强 不易干扰与FPIA法和EMIT法相比专属性强,不易受代谢物，结构类似物干扰8、临床药品药检方法多机载配套的临床药品药检方法多软件优势：软件可与医院信息系统(HIS)对接,极大节省了人工操作,杜绝了人工统计引起的报告整理失误的可能性 软件含权限管理、审计追踪功能,满足检测要求,满足医药行业要求 使用的方法文件能对色谱仪的分析参数、谱图数据、分析报告进行长久存储与统一管理 全中文操作菜单,直观方便的人性化操作界面 工作站具有多形式的谱图比较功能,有利于色谱研究 控制方式:具有电脑反控功能,符合GLP要求 工作方式:前后台实现数据采集、计算、整理、储存和打印 软件能对系统进行全反控操作控制、自动数据采集、谱图处理等 使用了具有完全自主知识产权的液相色谱仪控制与数据采样系统软件。可针对用户的实际情况,能更加满足其具体要求。
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    厂商： 江苏天瑞仪器股份有限公司
    品牌： 天瑞仪器/skyray instrument
    型号： TDM3000-MS
    价格： 面议
  • 高效液相色谱质谱联用仪 400-612-9980
    LCMS-2050高效液相色谱质谱联用仪是一款性能出色的单四极杆LC-MS，实现了小型化设计，对用户友好。LCMS-2050质谱仪融合了作为LC检测器的简便性和MS出色的性能，即使在小型化设计后依然能提供快速和高灵敏度分析。即使对于没有质谱使用经验的用户，也可以轻松上手，如同操作LC系统一般开展分析工作。凭借岛津在多年质谱开发中积累的技术， LCMS-2050实现了理想的小型化和高性能无缝融合，展现出令人难以置信的便捷操作性和优异的稳健性。LCMS-2050具有如下三大特点：1. 无缝融合——与LC化为一体。仪器体积小巧，设计紧凑，体积相比前一代产品减少 66%。这使得它可以灵活地与LC系统组合搭配，节省实验室空间。2. 优异性能——精彩表现，出类拔萃。继承并浓缩了岛津用于离子化和宽质量范围内离子传输的专有技术。加热复合离子源 (DUIS)适用范围更加广泛，对各种化学性质的化合物（包括低极性化合物）均实现了出色的灵敏度。Mass-it是一项显示质谱信息的全新功能，可帮助用户直观地掌握复杂数据。3. 操作简便——节省时间、电力和成本。只需6分钟即可开始工作，启动速度比前一代产品至少快3倍。充分节省操作、能耗和实验室空间，最大限度地提高实验室生产力。
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    厂商： 岛津企业管理（中国）有限公司
    品牌： 岛津/Shimadzu
    型号： LCMS-2050
    价格： 面议
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  • 质谱技术在靶向蛋白组学及脂质结构分析研究进展
    p style="text-align: justify "　　美国威斯康星大学麦迪逊分校的李灵军教授在《美国质谱学会杂志》上发表了题为" Faces of Mass Spectrometry”的文章。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong进展1：/strong/pp　　本月，李教授的团队在分析化学杂志上发表了一篇文章“HOTMAQ: A Multiplexed Absolute Quantification Method for Targeted Proteomics”。/pp style="text-align: center "img title="1111111.webp.jpg" alt="1111111.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201902/uepic/04527389-10d7-4d2c-9392-40078abb0c71.jpg"//pp style="text-align: justify "　　靶向蛋白组学中的绝对定量研究由于复杂背景下的低特异性、有限的分析通量及广泛的动态范围等诸多因素而具有挑战性。为解决这些问题,其课题组开发了一个混合offset-triggered多路复用绝对量化(HOTMAQ)方法。此方法结合了具有成本效益的质量差异和等压标签，能够在MS1前体扫描中同步构建内部标准曲线,在MS2水平上实时识别多肽,并在同步前体选择(SPS)-MS3光谱中对目标蛋白进行质量偏移触发的精确定量。这种方法将目标定量蛋白质组学的分析通量提高了12倍。采用HOTMAQ策略对临床前阿尔茨海默病候选蛋白生物标志物进行高精度验证。HOTMAQ的高通量和定量性能，加上样品的灵活性，使其广泛应用于靶向肽组学、蛋白质组学和磷蛋白组学的研究中。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong进展2：/strong/pp style="text-align: justify "　　清华大学欧阳证和瑕瑜教授与普渡大学学者共同在《自然通讯》上发表“Online photochemical derivatization enables comprehensive mass spectrometric analyses of unsaturated phospholipid isomers” 文章。/pp style="text-align: center "img width="600" height="304" title="22222222.webp.jpg" style="width: 600px height: 304px " alt="22222222.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201902/uepic/f219c925-a096-478e-a956-d221f5b56fbd.jpg" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: justify "　　质谱技术是脂质结构分析的主要工具，但如何在不饱和脂质中有效定位碳碳双键(C=C)以区分C=C位异构体仍是一个难题。本文通过Paterno-Buchi反应与液相色谱-串联质谱联用在线C=C衍生化，开发了大型的脂质分析平台。这为脂质C=C位异构体提供了丰富的信息，揭示了牛肝脏中200多种不饱和甘油磷脂的C=C位，鉴定出55组C=C位异构体。通过对乳腺癌患者和2型糖尿病患者血浆样本的分析，其课题组发现C=C同分异构体的比例受个体丰度的影响较小，这说明同分异构体比例可能用于脂类生物标志物的发现。/pp /p
    时间： 2019-02-11
    作者： ONE
  • 非变性质谱在生物制药完整蛋白分析中的应用
    p　　何为非变性质谱?就是选用温和的溶液体系及质谱条件，使蛋白保持在非变性状态下被分析。听到这，有些小伙伴可能会一头雾水：师兄师姐教我处理蛋白质样品的时候，第一步就是要变性啊，怎么现在又不要变性了?/pp　　在通常的蛋白质相关分析中，为了破坏蛋白质的三维立体空间结构，便于酶解等操作，会通过加热或是加入高浓度的变性试剂(如尿素、盐酸胍等)，使蛋白质变性 另外，对于常用的分离手段——反相色谱来讲，其流动相的酸性pH条件与高有机相同样也会使蛋白质变性。当需要对蛋白质中的非共价结合进行研究时，为了避免非共价结合被强烈的变性条件所破坏，则需在非变性的液相-色谱条件下(通常为50mM醋酸铵，pH=7的中性体系)进行研究 另外，对于组成较为复杂的蛋白样品，在非变性条件下分析时，由于体系中质子数减少，所以蛋白电荷态数目也会相应减少，电荷态之间的相互重叠度也会下降，进而减少复杂组分之间的相互影响，从而能够得到复杂蛋白样品中每个组分的分子量信息(图1)。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图1_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/56171fe8-be7c-4cc8-a672-814a9fe87e30.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　strong图1/strong 同一样品分别于变性及非变性条件下进行分子量测定的原始谱图/pp　　目前，strong非变性质谱技术主要应用在两个方面/strong：一是strong生物制药领域/strong，通过打开单克隆抗体链间二硫键后在Cys位点上偶联小分子药物(Cys-ADC)的完整分子量分析，此类药物的链间仅靠非共价力结合，故变性条件下各条链会分离，无法测得其完整状态的分子量 另一应用方向为strong研究蛋白质多聚体/strong，非变性条件下不仅可以保持各个亚基间的非共价相互作用，同时由于中性条件更接近生理状态，得到的结果更具意义。/pp　　现在，非变性质谱与氢氘交换、X-ray衍射、核磁共振、冷冻电镜和cross-linking等技术联合使用、互为补充，已经越来越多的被应用在结构生物学、生物医药等领域的研究中。本期文章将会重点介绍非变性质谱在治疗性生物医药制品完整分子量测定中的研究，下期文章将会侧重介绍非变性质谱用于蛋白复合物的研究进展。/ppspan style="COLOR: #002060"strongOrbitrap超高分辨质谱：非变性质谱研究的理想平台/strong/span/pp　　古人云：工欲善其事，必先利其器。要想研究做得好，趁手工具不可少!针对于非变性质谱研究中的需求，我们在Orbitrap质谱平台上对相关参数进行了优化，包括离子源区脱溶剂能量、质量范围的扩展以及高质荷比离子传输效率的优化等，使Orbitrap在固有的高分辨率、高质量精度及高灵敏度基础上，在非变性质谱领域也能有出色表现。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图2_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/caeec8f3-896f-4e02-a44a-84aae9ecd287.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　　strong图2/strong Orbitrap质谱平台用于非变性质谱分析/pp　　上文中提到，在生物制药领域中，会通过分子工程设计，在单克隆抗体的特定氨基酸上通过化学反应，偶联上小分子治疗药物，通过单克隆抗体的靶向识别功能将小分子药物精确带至病变细胞处并释放，达到精确给药、减少毒副作用的目的，这类药物被称作抗体药物偶联物(Antibody Drug Conjugates，ADCs)。在这类药物中，通过将单抗链间二硫键打开从而在Cys位点上偶联药物的Cys-ADC，由于其链间仅靠非共价力结合，故需在非变性质谱条件下才能对其完整分子量进行测定(图3)。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图3_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/270ff8dd-d5c1-442b-baf1-f287fcb557b9.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　strong　图3/strong Cys-ADC结构示意图/pp style="TEXT-ALIGN: center"　　图4展示了使用非变性质谱平台对Cys-ADC进行完整分子量测量的结果。由图中不难发现，使用体积排阻色谱(SEC)，可以将单克隆抗体与其他杂质分离开，而Orbitrap质谱平台能够得到基线分离、信噪比高的原始谱图。经数据处理软件解卷积处理后，可见偶联了0/2/4/6/8个小分子药物的簇峰分布，符合Cys-ADC的典型分布特征 解卷积后计算所得该ADC的药物/抗体比值(Drug to Antibody Ratio, DAR)，与之前报道过的DAR值相符。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图4_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/b494de8a-6ac5-42cf-ad12-d84637e32bef.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　　strong图4 /strong使用非变性质谱平台对Cys-ADC进行完整分子量测量。/pp style="TEXT-ALIGN: center"　　(上)，原始色谱/质谱图 (下)，解卷积后谱图。/pp　　作为对照，在变性条件下也对同一个样品进行了分子量测定(图5)，发现链间的非共价结合在强烈的变性条件下均被破坏，只能观察到部分ADC的分子量信息。该实验进一步说明了在非变性条件下对Cys-ADC进行分子量测定的必要性。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图5_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/46b85220-b769-47dc-b534-f92c93b56cff.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　　strong图5/strong 变性质谱条件下对Cys-ADC进行分子量测量。/pp style="TEXT-ALIGN: center"　　(上)，原始色谱/质谱图 (下)，解卷积后谱图。/pp　　对于常见的另外一种ADC——Lys-linked ADC，虽然其小分子药物与单克隆抗体是通过共价键相结合，但偶联上小分子药物后，ADC的复杂度大大增加，此时若在非变性条件下进行分子量测定，可以减少信号之间的干扰，得到更加准确的测量结果(图6)。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="图6_20170406090915_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/7c9e60f0-f01a-45eb-85eb-f9dceece9c46.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　　▲非变性条件可减少复杂组分间信号重叠/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="非变性2_20170406090518_副本.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/e634be51-bf68-49f2-b7be-e205227a7242.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"　　▲非变性条件下Lys-ADC完整分子量测量结果/pp style="TEXT-ALIGN: center"　　strong图6 /strong使用非变性质谱平台对Lys-ADC进行完整分子量测量。/pp　　strong小结/strong/pp　　本期我们对非变性质谱技术的原理、适用范围进行了介绍，并以Cys-ADC与Lys-ADC样品的完整分子量测量为例展示了该方法的应用，不知道小伙伴们有没有对非变性质谱技术有个初步的了解呢?下期我们将会介绍该技术在蛋白复合物研究中的应用，各位看官走过路过不要错过，我们下期见!/pp　　参考文献/pp　　[1] Dabaene et al., Anal Chem. 2014, Nov 4 86 (21):10674-83./pp /p
    时间： 2017-04-06
    作者： guohn
  • 《牛乳基婴幼儿配方乳粉中乳铁蛋白含量的测定液相色谱-质谱/质谱法》(征求意见稿)
    各有关单位：根据《中国认证认可协会团体标准管理办法》规定，经中国认证认可协会批准立项，青岛海关技术中心等单位已完成《牛乳基婴幼儿配方乳粉中乳铁蛋白含量的测定液相色谱-质谱/质谱法》团体标准的起草工作，形成征求意见稿，现公开征求意见。有关事项通知如下：一、《牛乳基婴幼儿配方乳粉中乳铁蛋白含量的测定液相色谱-质谱/质谱法》团体标准征求意见稿及编制说明等有关材料可从中国认证认可协会网站下载，网址信息如下：http://www.ccaa.org.cn/images/jsbz/stbzgl/2023/03/24/1679628059381007576.rar二、请填写《意见反馈表》(见附件)，并于2023年4月25日前通过电子邮件反馈至标准起草组。联系人：张鸿伟联系电话：18562789917 电子邮箱：light04@126.com附件：意见反馈表中国认证认可协会2023年3月24日
    时间： 2023-03-28
    作者： dahua1981
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液相质谱蛋白分析相关的方案

  • 高效微流电动液相色谱系统与电喷雾电离质谱联用分析肽和蛋白质
    采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。
  • 高效微流电动液相色谱系统与电喷雾电离质谱联用分析肽和蛋白质
    采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。
  • 交联聚乙烯基吡咯烷酮快速前处理方法结合液相色谱-串联质谱分析红葡萄酒中酪蛋白过敏原
    引起过敏的物质称为过敏原,一般为蛋白质类物质。 随着食物过敏患者的增多,以及可能导致过敏性休克甚至死亡等严重后果,已建立了一系列针对过敏原的法规及检测方法,包括核酸法(PCR)和酶联免疫法(ELISA)等。 新兴的质谱法(MS)灵敏度高、假阳性概率低,并具有方法开发快速、运行成本低等优势。葡萄酒酿造过程中需要加入澄清剂去除沉淀物质,使酒液获得长期稳定性。 酪蛋白是常用的澄清剂之一。 酪蛋白是一种来源于牛乳的过敏原,残留在葡萄酒中会对过敏人群产生危害。 但是葡萄酒,特别是红葡萄酒含有大量单宁等鞣质,单宁与蛋白质之间存在多点疏水键和氢键的作用,有很强的蛋白结合能力。 单宁常用作酶抑制剂使酶失活。 单宁极大地抑制了葡萄酒蛋白的提取与酶解,传统蛋白提取方法(超滤、透析、有机溶剂沉淀等)用于葡萄酒时回收率只有 20% ~30%。 因此,关于葡萄酒过敏原质谱分析的报道很少,研究对象也集中在单宁含量很低的白葡萄酒,对于含有大量单宁的红葡萄酒的前处理和质谱分析仍无成熟的策略。已报道的方法如十二烷基硫酸钾(KDS)法、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)法等,提取后蛋白仍需要电泳去除单宁和两性电解质,工作量大,分析通量低,蛋白质的回收率很低。交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)是 PVP 交联后形成的颗粒(约 110 μ m),具有很强的吸附能力。PVPP 竞争性地与单宁结合,释放蛋白,可以有效去除单宁等多酚类物质。本研究利用 PVPP 建立了快速、高效的红葡萄酒蛋白提取与酶解方法,使前处理时间缩短到 2 h 之内,回收率达到 80% 以上。 将本方法与三重四极杆液相色谱鄄串联质谱联用(LC-MS/ MS)结合,分析了红酒中 3 种亚型的酪蛋白,检出限达到 10 μ g/ L,比目前报道的方法提高了至少一个数量级。
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  • 【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人：桑志红 蔡 耘项目完成单位：国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解，对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来，随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和纳升电喷雾串联质谱（nano-ESI-Q-TOF）等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展，质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力，提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息，使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来，分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构，因此无法研究与两部分共同相关的结构问题，也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初，国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构，同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法，将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为：1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪，N2激光器，波长337nm，线性飞行距离150cm，加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C，气体流速40L/h，枪头电压650V，检测频率2.4S，氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择，在MALDI-TOF-MS分析中，基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同，a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定，糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成，在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性，与普通蛋白质及核酸不同，其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰，各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性，使得其分子离子峰变宽，灵敏度降低。糖链分子量越大，峰越宽，灵敏度越低，所以一般只有糖链较短，蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定，采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B，只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化，表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键，得到含一个GlcNAc的肽链，减去GlcNAc，可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6，与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4，平均糖含量为：(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定，研究糖基化类型及糖基化位点的策略：采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法，通过酶切前后含糖肽片的位移，结合网上数据库检索，可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白（N-糖苷键酶或O-糖苷键酶），在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化，可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链，这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化，加Glu-C酶切，产物再用内糖苷肩酶F酶切，可观察到含糖肽段出现位移，将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索，证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点，由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证，两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量，结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列， 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定，首先在一级质谱图中选择离子4972.23，在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片，从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列，检索结果为核糖核酸酶B，从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究，凝集素对糖肽的亲和提取，进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型，我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法，对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法，为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素（rhEPO）的结构分析。 利用以上建立的方法，我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析，断定此样品为非完全糖基化，样品中只存在N-连接的糖链，无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后，得到两个含糖肽段，进行数据库检索，测得38位及83位为N-糖基化位点，与文献报道相符，结果可靠。因此，该项课

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