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[font='calibri'][size=13px]什么是中和抗体?如何检测[/size][/font][font='calibri'][size=13px]假病毒[/size][/font][font='calibri'][size=13px]中和抗体?[/size][/font]什么是中和抗体?中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时,浆细胞会产生病毒特异性抗体,但只有少数是中和抗体。中和机制如下:(1)改变病毒表面的构象;(2)与吸附相关的病毒表位结合,阻断其与宿主细胞受体的相互作用;(3)与病毒形成免疫复合物,易于被巨噬细胞清除;(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体,从而导致病毒裂解。S蛋白(spike protein)是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白,由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白,负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD),被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合,从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此,S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。如何检测假病毒中和抗体?中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。病毒中和试验中和抗体检测的金标准是病毒中和试验,主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合,并接种预先准备好的单层细胞。最后,根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作,这些检测只能在生物安全三级实验室进行,极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。假病毒中和试验目前,越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体,将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白,并引入检测信号分子,例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合,模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2),并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒,不具备自我复制能力,无生物安全危险,所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。替代病毒中和试验替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比,替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。中和检测服务信息由北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)为您提供,如您想了解更多关于SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒中和检测服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。具体详情可点击:https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service
[align=center][font='arial'][size=14px]浅谈[/size][/font][font='arial'][size=14px]口蹄疫A型抗体水平检测[/size][/font][font='arial'][size=14px]流程[/size][/font][/align][table][tr][td][font='arial'][size=14px]目标[/size][/font][/td][td][font='arial'][size=14px]监测口蹄疫A型抗体水平及疫苗的保护效力从而制定合理的免疫程序[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]个人防护装备[/size][/font][/td][td][font='arial'][size=14px]一次性口罩,一次性防护服[/size][/font][font='arial'][size=14px],一次性丁腈手套,一次性鞋套[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]操作时间[/size][/font][/td][td][font='arial'][size=14px]免疫口蹄疫疫苗后[/size][/font][font='arial'][size=14px]21-28[/size][/font][font='arial'][size=14px]天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]复审[/size][/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]健康安全环境与食品质量安全经理签字[/size][/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]牧场经理签字[/size][/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][font='arial'][size=14px]总经理签字[/size][/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][/tr][/table][table][tr][td][font='times new roman'][size=16px]请对照图片检查自己是否按要求佩戴了劳动保护用品[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][align=center][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827218554_5523_6216082_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][font='arial'][size=14px]版本历史[/size][/font][table][tr][td] [/td][td][align=center][font='times new roman']版本[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']生效日期[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']主要变化[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']01[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']02[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']03[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']04[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][/table][font='arial'][size=14px]健康安全关键风险点和食品安全关键控制点[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman']本章节的目的:当员工执行此SOP时,提高员工关于关键风险点和食品安全关键控制点的意识)[/font][table][tr][td] [/td][td][align=center][font='times new roman']序号[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']健康安全关键风险点[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']食品安全关键控制点[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']1[/font][/align][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827219009_2558_6216082_3.jpeg[/img][font='times new roman']化学品![/font][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827220750_5451_6216082_3.png[/img][font='times new roman'] 无[/font][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']2[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']3[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][/tr][/table][font='arial'][size=14px]程序[/size][/font][table][tr][td] [/td][td][align=center][font='arial'][size=14px]步骤[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px]行动[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px]关键点[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1 [/align][/td][td][font='times new roman']血清准备[/font][font='times new roman']全血样品2000rpm离心5分钟。立即检测或者-20℃(最好-80℃)保存并尽快检测。[/font][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827222491_876_6216082_3.jpeg[/img] [font='times new roman'][color=#ff0000]须避免人员皮肤直接接触血清。[/color][/font] [font='times new roman'][color=#ff0000]严格穿戴好PPE。[/color][/font][/td][/tr][tr][td][align=center]2 [/align][/td][td][font='times new roman']口蹄疫抗体A型检测试剂盒组分[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']8[/font][font='times new roman']℃冷藏保存,实验前取出恢复到室温(18℃-2[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']℃)。[/font]将试剂取出,轻轻涡旋或者震荡混匀。[/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827223643_9215_6216082_3.jpeg[/img][font='times new roman']冬季温度低时,切勿将反应板直接放到冰冷的桌面上,应有泡沫作为缓冲。[/font][/td][/tr][tr][td][align=center]3 [/align][/td][td][font='times new roman']磷酸盐-吐温缓冲液(PBST)[/font][font='times new roman']使用前,将25倍PBST浓缩液用无离子水或蒸馏水稀释成1倍PBST([/font][font='times new roman']浓缩液与水体积比为[/font][font='times new roman']1:24)。[/font][/td][td][font='times new roman']每板约需600ml,即600ml的去离子水中加入25ml的25倍PBST浓缩液。[/font][/td][/tr][tr][td][align=center]4 [/align][/td][td][font='times new roman']仪器准备[/font][font='times new roman']打开酶标仪预热20分钟,打开洗板机选择DailyRaise 程序进行管路清洗。[/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][font='times new roman']操作步骤[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5 [/align][/td][td][font='times new roman']抗原抗体反应[/font][font='times new roman'](以20份/板为例)[/font][font='times new roman']首先在抗原抗体反应板上加入PBST,以进行抗体稀释。在A1~A10以及E1~E10每孔加入7[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']uL PBST;其余(B1~B10;C1~C10;D1~D10;[/font][font='times new roman']F1~F10[/font][font='times new roman'];G1~G10;H1~H10;第11列全部和第12列A、B孔)加入40 uL PBST。[/font][font='times new roman']加入待检血清和对照血清:[/font][font='times new roman']在[/font][font='times new roman']A1~A10[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']E1~E10[/font][font='times new roman']孔[/font][font='times new roman']加入[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']uL待检血清[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']混匀[/font][font='times new roman']后,[/font][font='times new roman']血清浓度为1:[/font][font='times new roman']16[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']分别[/font][font='times new roman']吸取40uL到B1~B10及F1~F10,血清浓度从1:[/font][font='times new roman']16[/font][font='times new roman']开始做连续2倍稀释至1:[/font][font='times new roman']128[/font][font='times new roman'],最后一[/font][font='times new roman']行[/font][font='times new roman'](D1~10,H1~10)吸取40uL混合液后弃掉。第11 列为阳性对照孔,直接吸取40 uL的阳性血清作2倍稀释至1:2048;第12列A、B孔为阴性对照孔,吸取40 uL的阴性血清对倍稀释到B孔[/font][font='times new roman']。见表1。[/font][font='times new roman']然后每孔加入40 uL用PBST稀释到[/font][font='times new roman']工作[/font][font='times new roman']浓度的口蹄疫病毒抗原;病[/font][font='times new roman']毒[/font][font='times new roman']抗原对照孔[/font][font='times new roman'](E12[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']F12,[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']G12,H12[/font][font='times new roman'])各[/font][font='times new roman']加80 uL。振荡混匀,封板,4[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']湿盒过夜或37[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']震荡孵育[/font][font='times new roman']90min[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'](见表2)[/font][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827225248_4142_6216082_3.png[/img][font='times new roman']口蹄疫[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']型病毒抗原工作浓度 1:[/font][font='times new roman']3为例,具体抗原浓度须按照试剂盒说明书进行配制, 每板需要工作浓度的抗原5ml,通常多配出1-2ml,为6ml,即6mlPBST加入2ml的病毒抗原液;[/font][font='times new roman']阳性对照血清已稀释浓度为1:[/font][font='times new roman']8;[/font][font='times new roman']口蹄疫[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']型病毒抗原[/font][font='times new roman']放于-80℃更有利于储存;[/font][font='times new roman']湿盒内的反应板也要有湿纱布覆盖[/font][font='times new roman'];[/font][font='times new roman']U型96孔板为重复利用板,可以刷干净后,用去离子浸泡晾干备用,可以用普通12孔板条代替。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827228646_6154_6216082_3.jpeg[/img] [font='times new roman'][color=#ff0000]避免人员皮肤直接接触血清溶液。[/color][/font] [font='times new roman'][color=#ff0000]废弃液存放废弃槽内,由专业资质机构回收[/color][/font][font='times new roman'][color=#ff0000] [/color][/font][font='times new roman'][color=#ff0000]处理。[/color][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827227441_929_6216082_3.png[/img][/td][/tr][tr][td][align=center]6 [/align][/td][td][font='times new roman']将抗原抗体混合液从抗原抗体反应板上按次序转移至酶标板上的相应孔,50uL/孔,封板,37[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']孵育60min。[/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center]7 [/align][/td][td][font='times new roman']洗板5次,[/font][font='times new roman']甩干,拍净。[/font][/td][td][align=center][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]8 [/align][/td][td][font='times new roman']按[/font][font='times new roman']50uL/孔[/font][font='times new roman']加入口蹄疫A型豚鼠抗体工作液(红色),[/font][font='times new roman']封板,37[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']孵育[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']0min[/font][font='times new roman']。[/font][/td][td][font='times new roman']口蹄疫A型豚鼠抗体已稀释为工作浓度。[/font][/td][/tr][tr][td][align=center]9 [/align][/td][td][font='times new roman']洗板5次,方法同[/font][font='times new roman']步骤7[/font][font='times new roman']。[/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center]10 [/align][/td][td][font='times new roman']按[/font][font='times new roman']50uL/孔[/font][font='times new roman']加入兔抗鼠IgG-HRP抗体工作液(蓝色),[/font][font='times new roman']封板,37[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']孵育[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']0min。[/font][/td][td][font='times new roman']兔抗豚鼠血清IgG-HRP已稀释为工作浓度。[/font][/td][/tr][tr][td][align=center]11 [/align][/td][td][font='times new roman']洗板5次,方法同[/font][font='times new roman']步骤7[/font][font='times new roman']。[/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center]12 [/align][/td][td][font='times new roman']将TMB[/font][font='times new roman']底物[/font][font='times new roman']A溶液和B溶液以1:1比例混合均匀,[/font][font='times new roman']加[/font][font='times new roman']入混合后的[/font][font='times new roman']底物溶液50uL/孔,37[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']孵育15min;[/font][font='times new roman']显色反应结束后,[/font][font='times new roman']每孔加50uL终止液终止反应,[/font][font='times new roman']在酶标仪上[/font][font='times new roman']读取OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']值。[/font][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827228889_5648_6216082_3.jpeg[/img] [font='times new roman'][color=#ff0000]操作者须熟练掌握终止液和双氧水的 [/color][/font][font='times new roman'][color=#ff0000] MSDS,培训合格后方可上岗;[/color][/font][font='times new roman'][color=#ff0000] 严格穿戴好PPE-[/color][/font][color=#ff0000]实验服、一次性丁腈手[/color][color=#ff0000] 套、化学品防护眼镜、一次性口罩和防护面[/color][color=#ff0000] 罩。[/color][/td][/tr][tr][td][align=center]13 [/align][/td][td][font='times new roman']结果判定[/font][font='times new roman']判定标准:[/font][font='times new roman']每块板设置4个[/font][font='times new roman']病毒抗原对照[/font][font='times new roman'],病毒抗原对照的[/font][font='times new roman']OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']或OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']值[/font][font='times new roman']应[/font][font='times new roman']在[/font][font='times new roman']1.0 以上;[/font][font='times new roman']阳性对照抗体效价在1:1024±1滴度以内,阴性对照血清抗体效价应<1:8[/font][font='times new roman'],试验结果才有效。[/font][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center]14 [/align][/td][td][font='times new roman']血清抗体效价的判定:[/font][font='times new roman']被检血清[/font][font='times new roman']OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']值[/font][font='times new roman']大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔。以阳性孔的最高稀释倍数为被检血清的抗体效价。[/font][font='times new roman']若临界值处于2个稀释孔[/font][font='times new roman']OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']值[/font][font='times new roman']之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值。[/font][/td][td][font='times new roman']临界值:弃去最高值和最低值,计算剩余2孔的平均[/font][font='times new roman']OD[/font][font='times new roman'][sub][size=14px]450nm[/size][/sub][/font][font='times new roman']值[/font][font='times new roman'],再除以2,即50%对照值,该值为临界值。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310251827232636_8392_6216082_3.jpeg[/img][/td][/tr][tr][td][align=center]15 [/align][/td][td][font='times new roman']最终结果判定:[/font][font='times new roman']单个血清样品:≥1:128判为阳性,1:64—128时,判为可疑,≤1:64时判为阴性[/font][font='times new roman']群体:70%的被检血清的抗体效价大于1:128即可判为疫苗有保护效力。[/font][/td][td][font='times new roman']抗体效价≥1:128 ,即疫苗保护效力在99%以上;[/font][font='times new roman']可疑血清样品可以复测,复测抗体效价≥1:128,判为阳性,小于1:128判为阴性。[/font][/td][/tr][tr][td][align=center]16 [/align][/td][td][font='times new roman']废弃物回收[/font][font='times new roman']废弃物置于医疗垃圾废弃物桶统一回收。[/font][/td][td] [/td][/tr][/table][font='arial'][size=14px]附件:[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][table][tr][td=6,1][align=center][font='times new roman'][size=18px]实验室操作规范[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]奶牛口蹄疫[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]A[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]型抗体水平检测[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']样品名称:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']牧场:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']样品种类:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']取样日期:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']取样人[/font][font='times new roman']:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']检测时间:[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']试剂盒种类:[/font][font='times new roman']口蹄疫[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]阻断ELISA抗体检测试剂盒[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']试剂盒[/font][font='times new roman']批号:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']有[/font][font='times new roman']效期:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']检测人:[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']复核人[/font][/align][/td][/tr][tr][td=6,1][font='times new roman']待检样品说明(或检验目的):[/font][font='times new roman']检测牛只免疫口蹄疫疫苗21-28d后,血清中口蹄疫[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']型病毒抗体含量[/font][/td][/tr][tr][td=6,1][font='times new roman']加样顺序:[/font][table][tr][td][/td][td][align=center][font='times new roman']1[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']2[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']3[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']4[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']5[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']6[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']7[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']8[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']9[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']10[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']11[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']12[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']A[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']B[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']C[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']D[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] 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[/size][/font][font='arial'][size=14px]所有试剂盒组分是否回温充分(是/否),回温温度( [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px]),回温时间[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px];[/size][/font][font='arial'][size=14px]2 [/size][/font][font='arial'][size=14px]记录实验室温度( [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px]);[/size][/font][font='arial'][size=14px]3 [/size][/font][font='arial'][size=14px]确认孵育反应温度( [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px]和/或 [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px] );如为37[/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px],请提前打开温箱;[/size][/font][font='arial'][size=14px]4 [/size][/font][font='arial'][size=14px]确认仪器(酶标仪、洗板机等)的工作状态[/size][/font][font='arial'][size=14px]。[/size][/font][font='宋体']Ⅱ[/font][font='times new roman'] 试剂准备[/font][font='arial'][size=14px]1 [/size][/font][font='arial'][size=14px]洗涤液的配制:[/size][/font][font='arial'][size=14px]( )毫升浓缩液 + ( )毫升纯净水[/size][/font][font='arial'][size=14px]2 [/size][/font][font='arial'][size=14px]样品的稀释[/size][/font][font='arial'][size=14px]第一步:( )微升血清+( )微升样品稀释液[/size][/font][font='arial'][size=14px]第二步:( )微升血清+( )微升样品稀释液 (或不需要)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第三步:( )微升血清+( )微升样品稀释液 (或不需要)[/size][/font][font='arial'][size=14px]3 [/size][/font][font='arial'][size=14px]对照是否需要稀释(是/否),如需稀释,稀释比例( )[/size][/font][font='arial'][size=14px]4 [/size][/font][font='arial'][size=14px]酶标抗体是否需要稀释(是/否),如需稀释,[/size][/font][font='arial'][size=14px]短期孵育模式[/size][/font][font='arial'][size=14px]稀释比例( [/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px] )[/size][/font][font='arial'][size=14px];过夜孵育模式稀释比例( )[/size][/font][font='arial'][size=14px]5 [/size][/font][font='arial'][size=14px]底物溶液配置:[/size][/font][font='arial'][size=14px]使用前将底物A和底物B按1:1体积混合,现用现配。[/size][/font][font='宋体']Ⅲ[/font][font='times new roman'] 操作步骤[/font][font='arial'][size=14px](1)在U型反应班上加入样品稀释液 [/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]微升;(2)[/size][/font][font='arial'][size=14px]加入对照及样品(对照:_微升;样品:_微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px],轻弹混匀此时样本稀释度为[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px],并按2倍比例梯度依次稀释至[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px];[/size][/font][font='arial'][size=14px](3)加入病毒抗原 [/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]微升(4)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第一次孵育[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px] (时间:_:_至_:_)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(5)取[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]抗原抗体混合液从U型反应板转移至已包被口蹄疫[/size][/font][font='arial'][size=14px]A[/size][/font][font='arial'][size=14px]型兔抗的ELISA(6)第二次孵育[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px] (时间:_[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]:_至_:_)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(4)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第一次洗涤(次数:_次;体积:_微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(7)加入口蹄疫[/size][/font][font='arial'][size=14px]A[/size][/font][font='arial'][size=14px]型兔抗豚鼠抗体工作溶液[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]微升;(8)第三次孵育[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px] (时间:_:_至_:_)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(9)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第二次洗涤(次数:_次;体积:_微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(10)[/size][/font][font='arial'][size=14px]加入[/size][/font][font='arial'][size=14px]兔抗豚鼠IgG-HRP[/size][/font][font='arial'][size=14px]酶标[/size][/font][font='arial'][size=14px]二抗工作液[/size][/font][font='arial'][size=14px](_微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(11)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第[/size][/font][font='arial'][size=14px]四[/size][/font][font='arial'][size=14px]次孵育[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]℃[/size][/font][font='arial'][size=14px](时间:[/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px] [/size][/font][font='arial'][size=14px]:_ 至 _: _)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(12)[/size][/font][font='arial'][size=14px]第[/size][/font][font='arial'][size=14px]三[/size][/font][font='arial'][size=14px]次洗涤(次数:_次;体积:_微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(13)[/size][/font][font='arial'][size=14px]加入底物( _ 微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(14)[/size][/font][font='arial'][size=14px]显色(时间:_ :_ 至 _: _)[/size][/font][font='arial'][size=14px];(15)[/size][/font][font='arial'][size=14px]加入终止液终止反应( _微升)[/size][/font][font='arial'][size=14px]。[/size][/font][/td][/tr][tr][td=6,1][font='times new roman'] [/font][font='宋体']IV[/font][font='times new roman']酶标仪450nm读数结果:[/font][table][tr][td][/td][td][align=center][font='times new roman']1[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']2[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']3[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']4[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']5[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']6[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']7[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']8[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']9[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']10[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']11[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']12[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']A[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']B[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']C[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']D[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']E[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']F[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']G[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']H[/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][/table][font='宋体'] V结果判定:[/font][font='times new roman'] 1.实验认可标准:4个孔病毒抗原对照OD45[/font][font='times new roman']0[/font][font='times new roman']nm均大于1.0( );阳性对照抗体效价( ),是否在1[/font][font='times new roman']:[/font][font='times new roman']512-1:2048之间( );阴性对照血清抗体效价( ),是否临界值;阳性孔为被检样品OD450nm临界值 [/font][font='times new roman'] 若临界值与稀释倍数最高阳性孔的OD450nm值相同,则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价;若临界值处于两个稀释孔之间OD450nm之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值。[/font][font='times new roman'] 3.结果判定[/font][font='times new roman'] 抗体效价大于或等于1:128为口蹄疫[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']型抗体阳性;1:64-1:128时,判为可疑;1:64时判为阴性。可疑血清样本重新检测。 [/font][/td][/tr][/table][font='arial'][size=14px][color=#ff0000]1. [/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#ff0000]双氧水应急处理[/color][/size][/font][font='宋体'][color=#ff0000]急救措施 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]皮肤接触:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 脱去污染的衣着,用大量流动清水冲洗。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]眼睛接触:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 立即提起眼睑,用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。就医。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]吸入:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难,给输氧。如呼吸停止,立即进行人工呼吸。就医。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]食入:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 饮足量温水,催吐。就医。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]消防措施 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]危险特性:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 爆炸性强氧化剂。过氧化氢本身不燃,但能与可燃物反应放出大量热量和氧气而引起着火爆炸。过氧化氢在pH值为3.5~4.5时最稳定,在碱性溶液中极易分解,在遇强光,特别是短波射线照射时也能发生分解。当加热到 100℃以上时,开始急剧分解。它与许多有机物如糖、淀粉、醇类、石油产品等形成爆炸性混合物,在撞击、受热或电火花作用下能发生爆炸。过氧化氢与许多无机化合物或杂质接触后会迅速分解而导致爆炸,放出大量的热量、氧和水蒸气。大多数重金属(如铁、铜、银、铅、汞、锌、钴、镍、铬、锰等)及其氧化物和盐类都是活性催化剂,尘土、香烟灰、碳粉、铁锈等也能加速分解。浓度超过74%的过氧化氢,在具有适当的点火源或温度的密闭容器中,能产生[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]爆炸。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]有害燃烧产物:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 氧气、水。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]灭火方法:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 消防人员必须穿全身防火防毒服,在上风向灭火。尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却,直至灭火结束。处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音,必须马上撤离。灭火剂:水、雾状水、干粉、砂土。 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]泄漏应急处理 [/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]应急处理:[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000] 迅速撤离泄漏污染区人员至安全区,并进行隔离,严格限制出入。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器,穿防毒服。尽可能切断泄漏源。防止流入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏:用砂土、蛭石或其它惰性材料吸收。也可以用大量水冲洗,洗水稀释后放入废水系统。大量泄漏:构筑围堤或挖坑收容。喷雾状水冷却和稀释蒸汽、保护现场人员、把泄漏物稀释成不燃物。用泵转移至槽车或专用收集器内,回收或运至废物处理场所处置。[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]2.[/color][/font][font='宋体'][color=#ff0000]终止液应急处理[/color][/font][font='times new roman'][color=#ff0000]急救措施[/color][/font][color=#ff0000]食入:[/color][color=#ff0000]请勿催吐。若患者清醒,让其立刻饮用大量或奶以稀释硫酸。若患者不清醒,请勿给予任何口服物品。立即就医。[/color][color=#ff0000]吸入:[/color][color=#ff0000]如果接触量很小,吸入风险不大。但是如果操作者身体有恙,需将其立刻带到空气清新处。若呼吸困难,立刻就医并输氧。如果呼吸停止,做人工呼吸。立刻就医。[/color][color=#ff0000]皮肤接触:[/color][color=#ff0000]立即脱去被污染衣着,用大量流动清水冲洗,至少[/color][color=#ff0000]15 [/color][color=#ff0000]分钟。在下次使用前将污染衣物清洗干净。用[/color][color=#ff0000]2%[/color][color=#ff0000]的小苏打溶液中和皮肤上多余的酸。立刻就医。[/color][color=#ff0000]眼睛接触:[/color][color=#ff0000]提起眼睑,立刻用大量流动清水冲洗至少[/color][color=#ff0000]15 [/color][color=#ff0000]分钟。就医。[/color][font='宋体'][color=#ff0000]消防措施[/color][/font][color=#ff0000]灭火剂:[/color][color=#ff0000]硫酸溶液不易燃。遇水稀释后发生强烈的放热反应(释放氢气),如果量小,不会产生太大影响。须使用泡沫,二氧化碳或干化学品等灭火剂。用水喷洒给着火容器降温。[/color][color=#ff0000]非常规火灾和爆炸:[/color][color=#ff0000]遇火时,可能产生有毒烟雾(硫氧化物)。与常规金属接触后可能产生氢,并与空气接触后生成易燃混合物。[/color][color=#ff0000]特殊消防程序及设备:[/color][color=#ff0000]遇火灾时,穿戴自给式呼吸器和保护眼睛和皮肤的装备。[/color][font='宋体'][color=#ff0000]泄漏应急处理措施[/color][/font][color=#ff0000]产品包装的泄漏概率较低。一旦泄漏,应用碱中和(碳酸钠,石灰粉),然后用惰性材料吸收(蛭石,沙子,土)。操作时按第8步要求穿戴PPE。清洗并确保污染区域通风。[/color][font='arial'][size=14px][color=#ff0000]防止液体流入下水道或水渠。[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#ff0000] [/color][/size][/font]
[font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=17px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]首都医科大学附属北京佑安医院感染综合科主任医师李侗曾说:“对感染过新冠病毒的人群来说,体内抗体仍处在较高水平,目前看二次感染的风险还是比较低的。[/color][/size][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=17px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]首都医科大学附属北京佑安医院感染综合科主任医师李侗曾说:“对感染过新冠病毒的人群来说,体内抗体仍处在较高水平,目前看二次感染的风险还是比较低的。[/color][/size][/font]