艾滋病病毒载体检测

艾滋病病毒原位分析技术再次取得突破。美国科学家在上周召开的国际艾滋病会议上，展示了他们开发的全新检测技术及检测结果，这个被称为“分子显微镜”的探针能够准确检测到艾滋病病毒在细胞内外的隐藏之地。　　美国过敏性和传染性疾病研究所疫苗研究中心副主任瑞查得普表示，这一分子显微镜新技术堪称神奇，它的超能力完全可以洞察到艾滋病病毒在任何细胞内的蛛丝马迹，最终能帮助弄清艾滋病病毒长时间存留的谜底，从而将其从体内彻底清除。　　新技术几乎不受干扰　　目前所用的检测组织中艾滋病病毒的原位分析技术都面临共同的大难题。这些探测技术，无论是利用荧光物质作标记物，还是放射性物质作标记，在精确定位组织样本中艾滋病病毒的位置时，经常难以将周围的细胞物质与目标检测物，如艾滋病病毒的RNA和DNA区别开来。这些标记物会将细胞组织当作病毒进行错误识别，对结果分析造成背景干扰。　　据《科学》杂志网站报道，会议上展示的猴子不同组织中获得的艾滋病病毒的详细图片表明，新技术几乎没有受到任何干扰。美国国家癌症研究所弗雷德里克国家实验室的免疫学家杰克伊斯特，与拥有RNA显微镜的美国高级细胞诊断公司(ACD)合作开发出这一新技术，能分别或同时检测到组织中艾滋病病毒的DNA和RNA。得益于ACD公司独特的探针设计专利，RNA显微镜是目前最先进的RNA检测技术工具，实现了单个RNA在原位的可视化和量化，能够同时实现信号放大并降低背景干扰，可检测任何组织的任何基因。检测艾滋病病毒的分子显微镜就是在RNA显微镜的基础上开发的。　　DNA和RNA都由互补的核苷酸对构成。捕获遗传物质的传统方法都是用称为寡聚体的核苷酸长链，在组织样本中寻找与之配对DNA或RNA链并相互配对。这些寡聚体携带着标记物，当它检测到目标物后，标记物会发出信号并拍照，研究人员可从图片中找到病毒遗传物质在组织样本中的分布位置。但是这些寡聚体分子太长，它们偶尔会犯错，与其他细胞物质结合时，并不理会那些要检测的目标序列。　　分子显微镜作用原理　　伊斯特的新技术包含一种更复杂的探针系统，能完全消除寡聚体带来的误打误撞。该技术的基本原理在于，先将寡聚体切成两等分，再将这两等分送到样本内寻找目标序列，只有当被分开的两段都停留在目标检测序列附近时，它们才能分别与目标序列成功配对后再重新连接起来。这意味着，寡聚体的两段只有遇到艾滋病病毒时才能分别配对并重新相遇，其他细胞物质再也无法造成干扰。　　艾滋病病毒本身是RNA病毒，但它会转换成DNA形式，以便随时“潜入”人类染色体。伊斯特还与病毒学家杰弗瑞立夫逊合作，成功开发出可视化艾滋病病毒DNA的DNA显微镜。这些潜伏的病毒前体会融入人体细胞，并在受到免疫系统或抗逆转录病毒药物攻击前安然隐藏数十年之久，抗逆转录病毒无法消除艾滋病传染并治愈艾滋病患者的一大重要原因，就是这些将病毒前体“隐藏”起来的细胞的大量存在。　　不放过任何一个病毒　　伊斯特、立夫逊和同事们向一些猴子注射了猿类艾滋病病毒，然后对这些猴子体内的许多组织进行了原位分析。结果表明，RNA显微镜和DNA显微镜能清楚区分出细胞中潜伏的艾滋病病毒前体(即病毒DNA)、病毒RNA以及细胞外的病毒。伊斯特说：“我坚信我们的新技术不会放过任何一个病毒，它完美地将灵敏性和特定性集于一身。”　　这些全新的分子显微镜能够克服治愈艾滋病道路上的几大障碍。第一大障碍是无法检测出接受抗逆转录病毒疗法的艾滋病患者血浆中的艾滋病病毒，因此研究人员难以评估一些艾滋病新疗法的具体效果，新显微镜技术将是克服现有技术障碍的有力补充。另一大障碍是无法确切知道病毒前体隐藏在体内何处，新技术能揭开这一由来已久的谜底，有助于大大缩小感染艾滋病病毒的细胞数量，更有针对地治疗患者。

p style="text-align: justify text-indent: 2em "/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "2020年4月27日《全国艾滋病检测技术规范（2020年修订版）》由中国疾病预防控制中心批准 [中疾控办发（2020）30号]，目前已下发至全国艾滋病检测实验室及有关单位。《全国艾滋病检测技术规范》自1997年颁布第一版以来，2004、2009和2015年进行了修订更新。每次规范修订都结合我国艾滋病检测的需要，紧跟国内外检测技术进展，引进新的技术方法、策略和标准，最大程度的满足艾滋病检测工作需要。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202008/uepic/72153fc4-a80b-4004-9c0e-eea825d545d1.jpg" title="全国艾滋病检测技术规范 0200820224859.png" alt="全国艾滋病检测技术规范 0200820224859.png"//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong新版修订主要体现四个方面/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "全国艾滋病检测技术规范(2020年修订版)与旧版本相比主要修订了以下4个方面：1.新增了检测总流程图、检测样本类型、自我检测及传递检测、输入性抗体核酸检测及HIV-2核酸检测；2．优化了抗体检测流程和抗体确证检测不确定结果的随访要求；3．强化了核酸检测的诊断价值和生物安全；4．完善了新发感染检测策略、核酸检测策略、婴幼儿诊断及各类检测报告。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "此外，规范强调了HIV核酸检测实验室要求：实验室人员和要求培训改为市级以上培训，厂家补充为“相关技术设备及检测产品提供商”。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong艾滋病检测必知的三个文件/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "从事艾滋病临床诊断的医生及实验室检测技术人员必须了解的三个文件：/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》（简称行标）是临床诊断的依据，《中国艾滋病诊疗指南》（简称指南）是临床诊断和选择各项临床检测指标的指引，《全国艾滋病检测技术规范》（简称规范）是实施各项实验室检测的标准流程和策略。在实践中，临床医生和实验室检测技术人员都应该了解这三个文件，临床医生了解“规范”可以更好地利用和有效选择各项检测方法，实验室检测技术人员了解“行标”和“指南”可以更好地了解临床需求，为诊断提供精准技术支持。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong谁来诊断艾滋病？/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "由临床医生根据“行标”与“指南”做出诊断，“行标”与“指南”的诊断原则和条件一致，“指南”在诊断原则下细化了更多具体内容。实验室检测的作用是为医生诊断提供实验室依据。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202008/uepic/e1eb73d1-eca3-425f-8e4b-2f866d2caa38.jpg" title="HIV核酸检测20200820231537.jpg" alt="HIV核酸检测20200820231537.jpg"//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong关于补充实验的修订要点/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "实验室检测的基本原则是先做筛查试验，筛查试验阴性的，直接提供阴性结果报告，筛查试验有反应的样本不能直接给出阳性结果报告，必须进一步做补充试验。请注意：针对科研和项目实施过程中阳性样本反复检测的结果，不在常规监测和检测范畴，可根据科研用途处理结果，不能作为个体诊断反复出具阳性报告，以免给常规监测和报告系统带来混乱。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong抗体检测和核酸检测/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "在这次新冠肺炎疫情中，核酸检测可谓是功不可没。其实在艾滋病检测也会用到核酸检测。由国家卫生健康委员会发布，2019年7月1日开始实施的《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》WS-293-2019，就已经将核酸检测纳入艾滋病诊断标准。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "根据2020版“规范”，补充试验可以选择抗体检测，也可以选择核酸检测。抗体补充试验即抗体确证阳性可以作为诊断HIV感染的依据，核酸检测阳性也可以作为诊断HIV感染的依据。需要注意的是：选择核酸定性检测，其结果为阳性可以直接报告阳性，选择核酸定量检测（即病毒载量）作为诊断依据需要检测值大于等于5000拷贝，5000拷贝以下的需要进行第二次检测或2-4周后随访。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong核酸检测主要是PCR法/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "目前，HIV核酸定性检测主要有实时荧光定量PCR方法、荧光探针PCR法及以焦磷酸化激活聚合酶（PAP）反应为基础的核酸扩增PCR方法。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "疾控实验室的常规工作可利用已经建立的抗体确证实验室条件进行抗体补充试验，必要时可应用核酸试验进行疑难样本和特殊样本的检测。临床医院实验室，如果具备核酸检测条件，推荐优先选择核酸检测，检测结果为阳性即可以作为诊断依据，也可以了解感染者和病人的病毒复制情况，有助于抗病毒治疗效果的判断。（标准方法源于中国疾控中心）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/zc/133.html" target="_blank"span style="color: rgb(0, 112, 192) "strongPCR仪器看这里,点击进入PCR专场查看更多仪器信息：/strong/span/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/zc/133.html" target="_blank"span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong/strong/span/a/pp style="text-align: center"a href="https://www.instrument.com.cn/zc/133.html" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202008/uepic/c148f606-02cb-4ac6-9f5f-f1ce15c0cb8b.jpg" title="PCR专场5-1a2fc4739d8d.jpg" alt="PCR专场5-1a2fc4739d8d.jpg"//a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong/strong/spanbr//ppbr//p

艾滋病（HIV）是获得性免疫缺陷综合征的简称，由感染HIV病毒引起。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒，它把人体免疫系统中最重要的CD4+T细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，经过数年、甚至长达10年或更长的潜伏期后发展成艾滋病病人，使人体丧失免疫功能，因抵抗力极度下降会出现多种感染，后期常常发生恶性肿瘤，以至全身衰竭而死亡。据联合国艾滋病规划署数据，目前全球范围内现存HIV携带者和艾滋病患者人数高达3800万人，且数量仍在快速增长中。2022年4月11日，美国国立卫生研究院（NIH）的研究团队在国际顶尖医学期刊 Nature Medicine 上发表了题为：Safety and tolerability of AAV8 delivery of a broadly neutralizing antibody in adults living with HIV: a phase 1, dose-escalation trial 的研究论文。诱导产生广泛中和抗体（bnAbs），是预防和治疗艾滋病的利器。该研究对8名感染了 HIV 的患者进行 AAV 病毒介导的基因治疗，通过 AAV 病毒递送编码强效广泛中和抗体（bnAbs）的 DNA，能够在体内长效产生广泛中和抗体，为艾滋病等疾病治疗带来新的有力工具。这也是首次通过 AAV 递送在人体内产生单克隆抗体。该研究招募了8名感染了HIV的患者，他们接受了至少3个月的抗逆转录病毒治疗。然后他们接受肌肉注射的 AAV8 递送的广泛中和抗体（AAV8-VRC07）治疗，治疗分三个给药剂量：5×10E10vg/kg、5×10E11vg/kg、2.5×10E12vg/kg。这项1期临床试验，主要终点是评估 AAV8-VRC07 治疗的安全性和耐受性，确定体内的药代动力学和免疫原性，并描述患者对 AAV8-VRC07 载体及其产物的免疫反应。次要终点是评估 AAV8-VRC07 对 CD4 T 细胞计数和 HIV 病毒载量的影响，并评估参与者体内产生的广泛中和抗体的持久性。结果显示，肌肉注射 AAV8-VRC07 是安全的且耐受性良好。1-3年随访期间，患者 CD4 T 细胞计数或病毒载量未发生临床显著变化。8名患者在注射后第6周和第52周时广泛中和抗体均增加，8人都产生了可测量的血清广泛中和抗体，其中有3人的最大抗体浓度超过1µg/ml。有4人的血清广泛中和抗体浓度在长达3年的随访中接近最大浓度并保持稳定。体内产生的广泛中和抗体的中和活性与体外产生的活性相似。这项研究表明，AAV 载体可以在体内持久产生具有生物活性、且难以诱导产生的广泛中和抗体，这位抗击艾滋病等传染性疾病增加了新的有力工具。更重要的是，这一 AAV 递送平台能够单次注射长时间产生抗体，可以使用 AAV 递任何所需的抗体的编码 DNA，从而用于治疗疟疾、新冠、艾滋病等各种传染性疾病，还可用作其他生物药的递送，治疗自身免疫病、癌症等各种疾病。