抗体亚基

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抗体亚基相关的耗材

  • Guava SARS-CoV-2 多抗原抗体检测试剂盒
    Guava® SARS-CoV-2 多抗原抗体检测试剂盒(Guava® SARS-CoV-2 Multi-Antigen Antibody Kit)是一种新型的、基于微球的免疫分析试剂盒,应用于常规流式细胞仪,可同时检测血清和血浆样本中针对三种SARS-CoV-2抗原(核衣壳蛋白(N)、刺突蛋白受体结合域(RBD)以及刺突蛋白S1亚基(S1))的IgG、IgM和IgA抗体表达。通过对荧光强度和数据结果简单直观地解读,可轻松分析体内相关抗体的水平,为免疫反应提供更全面的评估。Guava® SARS-CoV-2抗体检测试剂盒针对Guava® Muse® 细胞分析仪和Guava® easyCyte™ 系统上进行了系统性的优化,同时亦可兼容任何配置有488nm或532nm激光器的流式细胞仪。Guava® SARS-CoV-2多抗原抗体检测试剂盒可为您提供• 更完整的抗体图谱: 通过基于微球的多重检测方法对三种SARS-CoV-2抗原同时进行分析,您可以获得更加完整的抗体图谱。• 全面的免疫反应评估: 同时获取三种SARS-CoV-2亚型的表达信息,在COVID-19相关研究中为您提供更加全面的免疫反应评估。• 快速获取结果: 仅需15分钟实验操作,即可获得完整的血清学数据资料,整个过程不超过75分钟。• 灵活的检测通量: 从单管到多孔板,从低通量到高通量,灵活的兼容性可满足您各种通量需求。• 广泛的适应性: Guava® SARS-CoV-2多抗原抗体检测试剂盒针对Guava系统进行了优化,同时兼容市场上多种型号的常规流式细胞仪,可支持您现有的实验室设备,满足您多样化的研究需求。工作流程Guava® SARS-CoV-2抗体检测试剂盒同时分析抗三种SARS-CoV-2抗原的抗体应答。利用该方法可以检测抗SARS CoV-2、IgG、IgM和IgA抗体,并获得血清和血浆样本中不同抗体同型的表达状态的宝贵信息。用户可以在Guava® Muse® 细胞分析仪,Guava® easyCyte™ 流式细胞仪或其他任何配置有488 nm或532 nm激光器的流式细胞仪上读取样品。Guava® Muse® 细胞分析仪中预设有特定分析软件( A),针对每种微球的提供散点图、计数和中位荧光强度数据。Guava® easyCyte™ 系统利用仪器自带的InCyte软件(B)可轻松实现圈门设定并导出统计数据。示例:SARS-CoV-2抗体同型特异性检测订购信息产品名:Guava® SARS-CoV-2 多抗原抗体检测试剂盒货号:FCPA100101更多产品信息:https://www.luminexcorp.com/zh/guava-sars-cov-2-multi-antigen-antibody-kit/
  • 单克隆抗体带电异构体分析柱
    Agilent Bio MAb 液相柱 填料担体由硬质球形、高度交联的聚苯乙烯二乙烯基苯(PS/DVB)无孔微球组成 填料表面结合了亲水聚合物层,避免抗体蛋白的非特异性结合 填料的弱阳离子交换固定相层采用了不同工艺,使其比Agilent Bio WCX 柱填料的密度更高 专为单克隆抗体基于带电异构体的分离而设计单克隆抗体的全面表征,包括酸性和碱性亚型的鉴定和监测。Agilent Bio MAb 液相柱填充了专为单克隆抗体基于带电量的高分离度分离而设计的特殊树脂。与水性缓冲液、乙腈/丙酮/甲醇和水混合溶液兼容。常用缓冲液为:磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷、MES 和醋酸盐。Bio MAb 柱有1.7、3、5 和10 μm 粒径可供选择,较小的粒径能够提供较高的分离度。订货信息:
  • 抗体纯化介质
    抗体纯化介质抗体纯化介质(GP-ProA)是针对抗体、ADC、Fc融合蛋白纯化而开发的耐碱型亲和层析介质,通过ProA配基与抗体之间的特异性结合力实现目标抗体与杂质的分离。该产品以超大孔聚丙烯酸酯微球作为基质,以耐碱性重组ProA作为偶联配基,具有高流速、低反压、高稳定性等优点,在抗体药物的商业化生产中具有明显的优势。抗体纯化介质(ProG)是一种专用于从腹水、血清中纯化抗体的亲和层析介质。该产品以琼脂糖软胶微球作为基质,以r-ProG作为偶联配基,具有高载量、高使用寿命等优点。产品特性产品抗体纯化介质(GP-ProA)抗体纯化介质(ProG) 基质超大孔聚丙烯酸酯硬胶琼脂糖软胶配基r-Protein A r-Protein G 平均粒径70μm 90μm 配基密度10mg/mL5mg/mL动态载量≥40mg/mL≥30mg/mL流速上限1500 cm/h 600 cm/h耐压上限1 Mpa 0.3 Mpa保存2-8°C (20%乙醇)2-8℃ (20%乙醇)适用范围单抗/双抗,Fc 融合蛋白人、鼠、牛、马源IgG PH稳定性 可耐受0.5M NaOH洗涤 (建议清洗时间不超过20min ) 3-12 (长时间) 2-13 (短时间) 应用实例 GP-ProA纯化单抗谱图柱尺寸: 0.78cm ID*10cm流速: 1 mL/min检测波长: 280nm样品:单抗发酵澄清液浓缩倍数:4-10倍洗脱纯度:96.65%;洗脱收率:92.51%

抗体亚基相关的仪器

  • 抗体纯化服务高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体纯度、活性的高低对试验结果有着重要的影响,抗体纯化能降低非特异性本底,提高检测灵敏度。卡梅德生物凭借多年的临床前后期研究经验和制剂经验,能够为您提供小鼠、大鼠、兔、羊等多种种属来源的多抗以及抗体纯化技术服务,能够根据客户的特定用途选择特定纯化方法,为客户解决抗体纯化的问题。1.抗体纯化—Protein A/G亲和纯化:Protein A/G亲和纯化服务内容:*客户提供抗血清,我们根据客户需求进行抗体(IgG,IgM,IgD, IgA和IgE)纯化*纯化规模:μg ~g *质量报告:抗体浓度,SDS-PAGE分析结果其他相关服务:*抗体亚型鉴别*抗体效价(ELISA法,需要客户提供抗原)2.抗体纯化—配体亲和纯化:卡梅德生物可根据客户提供的抗体或抗原制备相应的配体层析柱。卡梅德生物科技(天津)有限公司真诚期待与您的合作!
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  • 抗体人源化服务 卡梅德生物具有丰富的抗体工程构造经验,利用我们的抗体噬菌体展示文库平台,我们能够提供高亲和力和低免疫原性的嵌合抗体改造服务。噬菌体抗体文库技术 — 抗体人源化服务 抗体人源化已经成为将鼠源抗体转化为有效安全的治疗药物的重要方式。非人源性抗体进入人体内会引起严重的机体排异反应,例如鼠源单克隆抗体进入人体会产生人抗鼠抗体反应(Human anti-mouse antibody response, HAMA response),进而影响抗体在临床应用时的安全性和治疗效果。抗体人源化是将动物源抗体通过基因工程操作及重组表达,使抗体的大部分序列或者全部序列变成人源的序列,在保证抗体亲和力和特异性的基础上,尽可能降低抗体对人的异源性,同时保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性,这种通过重组基因所表达的抗体既有鼠源成分,又有人源成分,所以称为人源化抗体。 卡梅德生物为进一步降低人源化抗体的免疫原性,利用丙氨酸突变以及联合位点直接突变技术进行抗体超变区CDR高通量筛选,以寻求最大限度的人源氨基酸替换。目前为止,我们已经成功为客户提供了上百种抗体人源化服务。卡梅德生物能够提供以下三类人源化抗体定制服务:改型抗体:将非人源抗体CDR区域移植到缺少CDR区域的人源抗体,如将鼠源抗体的CDR移植到人抗体支架中,使人源抗体获得鼠源单抗的抗原结合特异性,同时减少其异源性。嵌合抗体:利用DNA重组技术,将非人源抗体的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中,转染哺乳动物细胞进行重组抗体表达。全人源化抗体:利用基因编辑技术,将动物体细胞中抗体基因进行人抗体基因替换,动物免疫后直接产生全人源化的抗体。服务优势:*灵活的人源化抗体制备策略*高成功率*高亲和力和高特异性人源化抗体开发*高通量筛选与灵活的文库淘筛策略*基于 SPR 的抗体全动力学亲和力 (Kd) 分析 (BIAcore 分析)卡梅德生物科技(天津)有限公司真诚期待与您的合作!
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  • 动物抗体检测仪 400-860-5168转3452
    CSY-E96KT抗体检测仪、动物抗体检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法进行分析检测,抗体检测仪、动物抗体检测仪广发运用于医疗防疫、疫病防疫以及抗体检测、动物抗体检分析技术参数:☆波长范围:300nm-1000nm☆波长准确度:±2nm☆吸光度范围: 0.000~4.000ABS☆分辨率 :0.001Abs☆稳定性 : ±0.001A/hr☆透射比重复性: ≤0.5%T☆光源 : 进口LED☆样品池 : 微孔板★抗体检测仪动物抗体检测仪96通道设计,9通道光路系统,其中8路光源用于96孔板的光路信号检测。另外一道光路用于校准光源,作光源系统的补偿及光源工作情况的监测。★准确性高:采用进口特制LED光源,具有良好的波长准确度和重复性,全面提高检测结果的 准确性。★抗体检测仪动物抗体检测仪自动化程度高:仪器自动诊断系统故障、波长校准:自动校准★仪器使用寿命长:采用LED光源,自动开关节能设计,非连续工作模式。使用寿命可达10年★仪器自动硬盘存储测量数据。内置微型热敏打印机,终身无需更换色带,可实时打 印检测结果检测报告可打印样品名称,检测日期 ,检测单位。更能体现 检测结果的权威性,并利于公示★抗体检测仪动物抗体检测仪内置振荡功能,可根据需要编辑振荡形式,促使终止液充分混匀,保证结果的可靠性。★ 内置以太网卡接口,可实现无线传输数据,无线上网,收发邮件等★windows电脑操作程序,彩色液晶触摸屏操作,操作简捷方便★抗体检测仪动物抗体检测仪具有查询、打印、汇总、报表等功能,可直接输出检测结果,软件终身免费升级★配备RS-232接口和USB口,可通过计算机进行数据处理、统计分析以及结果上传。如选配本公司食品安全监控网络软件,可根据用户要求组建省、市、地、县等各级网络。
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抗体亚基相关的试剂

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  • 揭秘抗组蛋白抗体:健康守护者还是疾病信号?

    [font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体是抗核抗体家族的一个亚基,专门针对组蛋白亚基或组蛋白复合物。[/font][font=Calibri]1959[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年,[/font][font=Calibri]Henry Kunkel[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H.R.Holman[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H.R.G.Dreicher[/font][font=宋体]在对红斑狼疮细胞病因的研究中首次报道了这些抗体。如今,抗组蛋白抗体仍被用作系统性红斑狼疮的标志物,但也与其他自身免疫性疾病有关,如[/font][font=Calibri]Sj?gren[/font][font=宋体]综合征、皮肌炎或类风湿性关节炎。抗组蛋白抗体可作为药物诱导性狼疮的标志物。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]特异性[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组蛋白是蛋白质的复合体,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]储存在其周围。抗组蛋白抗体可以靶向组蛋白复合物或显示的任何蛋白质亚基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体靶向五大类组蛋白亚基:[/font][font=Calibri]H1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H2A[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H2B[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H4[/font][font=宋体]。抗组蛋白的抗体多种多样,因此除了靶向蛋白亚基外,不同的抗体也可能对不同的复合物,包括[/font][font=Calibri]H2A-H2B[/font][font=宋体]二聚体或[/font][font=Calibri]H3-H4[/font][font=宋体]四聚体。有证据表明,不同药物暴露产生的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]抗组蛋白抗体对不同组蛋白复合物的表位具有特异性。高度修饰的组蛋白已被证明能促进更大的免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]检测抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体可以使用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定法进行临床检测。测试需要血样。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]间接免疫荧光也可用于检测抗组蛋白抗体。均匀、扩散染色表明存在抗组蛋白抗体、染色质和一些双链[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]。义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-servicehttp://][b]免疫荧光检测服务[/b][/url]![/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗组蛋白抗体阳性说明什么?[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗组蛋白是含有五个亚单位的碱性蛋白,抗组蛋白阳性说明可产生了组蛋白抗体,多存在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、风湿病等疾病中,建议患者对症治疗。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]正常值:[/font][/b][font=宋体]正常人抗组蛋白抗体为阴性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在探索抗组蛋白抗体的道路上,科学家们从未停止脚步。他们致力于解开这一生物标志物的所有谜团,以期为人类健康带来更多福祉。作为普通公众,我们也可以通过学习和了解抗组蛋白抗体的相关知识,为自己的健康保驾护航。让我们共同期待未来科学研究在抗组蛋白抗体领域取得的更多突破,为人类的健康事业贡献智慧和力量。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 什么是中和抗体?如何检测假病毒中和抗体?

    [font='calibri'][size=13px]什么是中和抗体?如何检测[/size][/font][font='calibri'][size=13px]假病毒[/size][/font][font='calibri'][size=13px]中和抗体?[/size][/font]什么是中和抗体?中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时,浆细胞会产生病毒特异性抗体,但只有少数是中和抗体。中和机制如下:(1)改变病毒表面的构象;(2)与吸附相关的病毒表位结合,阻断其与宿主细胞受体的相互作用;(3)与病毒形成免疫复合物,易于被巨噬细胞清除;(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体,从而导致病毒裂解。S蛋白(spike protein)是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白,由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白,负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD),被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合,从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此,S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。如何检测假病毒中和抗体?中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。病毒中和试验中和抗体检测的金标准是病毒中和试验,主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合,并接种预先准备好的单层细胞。最后,根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作,这些检测只能在生物安全三级实验室进行,极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。假病毒中和试验目前,越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体,将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白,并引入检测信号分子,例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合,模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2),并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒,不具备自我复制能力,无生物安全危险,所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。替代病毒中和试验替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比,替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。中和检测服务信息由北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)为您提供,如您想了解更多关于SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒中和检测服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。具体详情可点击:https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service

  • 抗体亚型:分类、鉴定详解

    [font=宋体][font=宋体]抗体亚型是指相同构成方式但空间结构各异的蛋白质结构。在机体内,这些[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”构型的免疫球蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体])因小分子多肽结构的细微差异,可进一步细分。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、抗体亚型分类[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重链亚型[/b][/font][font=宋体][font=宋体]抗体以单个或多个[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”字形单体形式存在,每个单体由[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条多肽链组成,包括两条相同的重链和两条相同的轻链。抗体的类型主要由重链决定。例如,哺乳动物的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]重链有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和μ命名,对应的抗体即[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]。其中,人和小鼠的γ重链可进一步细分为多个亚类,对应不同的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]亚型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]轻链亚型[/font][/b][font=宋体][font=宋体]哺乳动物轻链主要有[/font][font=宋体]λ型和κ型两种。出于科研需求,轻链的亚型鉴定也至关重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][align=center][img=不同亚型抗体的结构与功能,690,398]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081116147141_3653_5907840_3.png!w690x398.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]不同亚型抗体的结构与功能[/font][/align][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、鉴定原理与方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体亚型鉴定的原理基于酶联免疫吸附实验([/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体])。通过测定待测抗体与不同亚型特异性抗体的结合情况,找出能与待测抗体特异性结合的抗体,进而根据这些特异性抗体的已知性质,推断出待测抗体的亚型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前,常用的鉴定方法是利用试剂盒。按照说明书操作,可以直观地读出抗体的亚型。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、常见问题与解决方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]在利用试剂盒进行抗体亚型鉴定时,可能会遇到一些问题,如假阳性或假阴性结果。这时,需要检查实验操作是否规范,试剂是否过期,以及样本是否受到污染等,以确保结果的准确性。[/font][font=宋体] [/font][align=center][img=常见的问题与解决办法,690,202]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081116410260_5567_5907840_3.png!w690x202.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]抗体亚型:常见的问题与解决方法[/font][/align][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、鉴定意义[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不同亚型的抗体在结构和功能上存在差异,这决定了它们在体内发挥的不同作用。因此,对抗体进行亚型鉴定,有助于深入研究疾病的作用机理,为抗体药物的开发提供重要依据。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function][b]抗体的结构与功能[/b][/url]详情:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

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  • 我国科学家解析结核杆菌核糖体大亚基与抗生素结合的三维结构
    由结核杆菌引起的结核病是全球重要的慢性疾病。据世界卫生组织发布的《2019年全球结核病报告》数据,全球结核潜伏感染人群约17亿,占全人群的1/4左右,结核病仍是全球前10位死因之一。目前结核杆菌耐药性问题日益严重,了解结核杆菌耐药机制并研发新的治疗结核病药物对实现“终止结核病策略”意义重大。  近日,复旦大学和北京大学为主的联合团队在《Emerging Microbes & Infections》杂志上发表了题为“Cryo-EM structure of Mycobacterium tuberculosis 50S ribosomal subunit bound with clarithromycin reveals dynamic and specific interactions with macrolides”的文章,该研究解析了结核杆菌核糖体大亚基与大环内酯类抗生素克拉霉素(Clarithromycin,CTY)结合的冷冻电镜三维结构。  研究团队发现抗生素CTY结合位点位于结核杆菌核糖体大亚基新生肽链通道靠近rRNA第2062位腺嘌呤(A2062)的位置,与其他大环内酯抗生素的结合位置基本一致。研究团队基于研究获得的密度图,认为结合CTY的结核杆菌大亚基的A2062存在两种构象;与已发表的核糖体与大环内酯结合的结构比较,认为A2062与特定的大环内酯类抗生素结合的动力学可能调节肽基转移酶向翻译阻滞方向发展。该研究对结核杆菌核糖体大亚基A2062与大环内酯类药物的动力学研究结果,可能有助于合理设计下一代抗结核药物,以对抗日益严重的结核杆菌耐药问题。  论文链接:  https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/22221751.2021.2022439  注:此研究成果摘自《Emerging Microbes & Infections》杂志,文章内容不代表本网站观点和立场,仅供参考。
  • 基于质谱的内源性抗体从头测序的展望
    大家好,本周为大家分享一篇发表在mAbs上的综述,A perspective toward mass spectrometry-based de novo sequencing of endogenous antibodies1,通讯作者是来自荷兰乌得勒支大学Bijvoet生物分子研究中心的Albert J.R. Heck。  据估计,人体可以产生的抗体理论序列超过1015种,这些序列是独一无二但又高度相似的,这使得它们的表征和测序非常复杂。抗体的结构从功能上分为Fab段和Fc段,其中Fab负责与抗原结合,具有高度变异性,这种突变主要集中在Fab段的互补决定区(CDR),阐明这部分的序列对抗体的发现非常重要。 图1展示了用于抗体序列分析的三种组学策略。Bottom-up(BU)是最流行的测序方法,可以通过数据库匹配或完全的从头测序实现对抗体的序列分析,但主要用于高度纯化的重组抗体。第二种策略是通过将基于MS的技术与基因组学/转录组学相结合,例如全基因组测序或 BCR 测序,通过B细胞测序生成个性化序列数据库,将BU MS数据靶向该数据库搜索,是一个部分从头测序的流程。第三种策略是结合几种基于MS的de novo方法,如Top-down(TD)和Middle-down(MD),旨在直接从临床样本中确定选定抗体克隆的完整序列,而无需其他组学数据的帮助。  图1 基于MS的抗体测序的三种策略  通过BU方法进行的从头测序需要高度的序列覆盖,理想情况下,抗体中的每个序列位置都由多个重叠的肽段支持。通过缩短酶的孵育时间、微波辅助水解,或使用具有协同序列特异性的多种酶,可以产生较长的肽段或较多的重叠序列。图2所示的工作使用总共9种蛋白酶(包括特异性和非特异性)成功地从头测序抗 FLAG-M2小鼠mAb全长。通过覆盖整个CDR的高分肽获得了高置信度的CDR序列,所选择的6条肽段来自5种不同蛋白酶的消化。  图2 单克隆抗体Anti-FLAG M2的测序。  对于抗体这种具有高度变异性的蛋白质,通常无法获得完整和准确的序列数据库来进行匹配。相反,可以使用来自基因组或转录组实验的同源序列。抗体种编码每个区域的基因可作为种系序列获得,基于序列对齐或序列标签提取的容错片段匹配算法可以使用同源数据库对实验确定的序列进行评分。同源序列数据库还可以作为种系模板来辅助从头测序肽段的组装。  TD/MD策略虽存在对分子量较大蛋白的电离效率低、分辨率低等限制,但近年该领域的一些进展也报告了相对较高的序列覆盖率。Shaw 等人报道了使用现代仪器将完整的 mAb 在非变性状态下片段化(图3)。通过在单个串联 MS 实验中结合 ECD 和 HCD,获得了曲妥珠单抗 42% 的轻链序列覆盖率和 20% 的重链序列覆盖率。产生的碎片谱不仅包含多电荷主链碎片产物,还包含链间二硫键断裂产生的完整轻链。  图3 轻链 (a) 和重链 (b) 片段图显示了曲妥珠单抗上 ECD 和 HCD 组合产生的序列覆盖率。二硫键用虚线表示,CDR3 区域以黄色高亮显示。(c)为完整曲妥珠单抗的 25+ 电荷态的相应碎片谱,插图显示了轻链的 9+ 电荷态和各种碎片离子。红色和蓝色碎片离子标签分别对应轻链和重链。星号表示质量选择的母离子。  将抗体测序拓展到内源性抗体存在许多挑战。首先,血浆中单个克隆的中位浓度约为 1 µg/mL,比 mAb 低几个数量级,并且单个克隆的分离极具挑战性,使测序过程进一步复杂化 因为大多数软件工具专为组装单个抗体而设计,当数据代表几个相似的 Ig 序列时可能导致分析失败。此外,在复杂的内源性多克隆抗体混合物中,由于来自恒定区的序列信息被放大并抑制CDR的信号,因此通常无法检测到CDR区的关键序列。使用多组学方法,例如通过使用来自同一供体的基因组学或转录组学数据补充 BU MS 数据,可以绕过从头测序的一些具有挑战性的方面。  Guthals等人报道了一个例子,使用糖蛋白B抗原从患者的血清中纯化抗体后,进行了完整质量和BU MS分析(图4c)。通过半自动软件PolyExtend用完整质量来检索抗体混合物中最丰富的物种的平均质量,并以此来约束BU MS数据导出的序列结果。在最近的一项研究中,Bondt等人从败血症患者的血清中制备IgG1的Fab亚基,成功地在不经过抗原特异性捕获的条件下,通过MD/BU结合和ETD活化的MS方法,在一个供体的血清中直接对一个高丰度的抗体克隆进行从头测序(图4d)。首先,从IMGT数据库中选择高度匹配的轻链和重链种系模板。然后用采集的从头测序数据来迭代和改进这些模板,产生最终的成熟序列。值得注意的是,确定的序列包含的突变比BCR测序研究报告的突变率所预期的要多,这表明蛋白质水平测序和基因水平测序之间存在潜在的差异。  图4  尽管从抗体混合物中重新组装序列仍然是艰巨的任务,但一些研究团队最近已经设法获得了令人兴奋的数据。随着现有方法的众多进步,很可能只需把这些碎片拼凑在一起,创建一个基于MS的方法,以更常规地用于抗体发现。所有近期发表的这些策略概念的验证为更高效的下一代方法铺平了道路。
  • 中国计量院研制出新冠病毒核衣壳蛋白和包膜蛋白亚基因组RNA(sgRNA)标准物质
    特异性检测新冠病毒复制过程中的亚基因组RNA(sgRNA),对于确定疫苗、单克隆抗体和抗病毒药物的保护和治疗效果至关重要。通过检测新冠病毒sgRNA,可有效区分具有感染性的活病毒和灭活病毒。sgRNA是在进入细胞后产生的,与成熟的病毒粒子结合较差,因此可作为活跃复制的病毒的标记。近日中国计量院研制了新冠病毒核衣壳蛋白和包膜蛋白亚基因组RNA标准物质,可以作为测量标准,用于新冠病毒核衣壳蛋白基因(N)和包膜蛋白基因(E)的亚基因组RNA的定性和定量测量,以及测量方法的确认和质量控制。标准物质定值方法为针对核衣壳蛋白和包膜蛋白亚基因组序列设计的特异性数字PCR方法,同时采用经过国际比对验证的另一独立的数字PCR方法对量值进行了核验。该标准物质包括了5个不同水平的新冠病毒核衣壳蛋白基因(N)和包膜蛋白基因(E)的亚基因组RNA。特性量值为每管溶液中含有的核衣壳蛋白和包膜蛋白亚基因组RNA的拷贝数浓度。具体量值见表1。表1.新型冠状病毒核衣壳蛋白和包膜蛋白亚基因组RNA标准物质特性量值NIM-RM5223 新型冠状病毒核壳蛋白和包膜蛋白亚基因组RNA标准物质截至目前,中国计量院共研制了核酸、抗原和抗体等24种新冠病毒标准物质。这些标准物质可应用于方法建立、方法验证、质量控制、试剂性能评估、验证与评价等多方面,截止11月,已经广泛应用于全国30个省市的近700家单位,为保障核酸检测结果准确、可比、可溯源,提供了重要支撑。
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