免疫荧光染色

[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化技术[/font] [font=Calibri](Multiplex immunohistochemical[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mIHC) [/font][font=宋体]也称作酪氨酸信号放大 [/font][font=Calibri](Tyramide dignal amplification[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]TSA) [/font][font=宋体]技术，是一类利用辣根过氧化酶 [/font][font=Calibri](Horseradish Peroxidase, HRP) [/font][font=宋体]对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这一技术基于酪胺信号的放大效应，实现对单个细胞或组织样本上多个目标靶点的同时检测。这为全面研究细胞组成、细胞功能以及细胞间的相互作用提供了强大的工具。通过多重荧光免疫组化技术，科学家们可以更深入地了解细胞的奥秘，揭示生命现象的复杂性。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]实验原理及流程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]技术采用 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]标记的二抗，[/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]催化加入体系的 [/font][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]衍生荧光染料，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，将信号共价结合到抗原上。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]原理：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]带有染料标记的底物酪胺[/font] [font=Calibri](T) [/font][font=宋体]分子在过氧化氢氧化环境下，被抗体或探针固定的 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]转化为具有短暂活性的中间状态 [/font][font=Calibri](T*)[/font][font=宋体]，然后被激活的中间态分子 [/font][font=Calibri](T*) [/font][font=宋体]迅速与相接蛋白分子的富含电子区域 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]酪氨酸残基[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]进行稳定的共价结合，未被标记的酪胺分子将被洗脱，借此实现对抗原的特异性染色。由于相接的蛋白 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括 [/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]，抗体，目标抗原[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]都含有大量的酪氨酸结合位点，所以目标抗原处会富集大量标记分子，使信号被有效放大 。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]多重免疫荧光染色的步骤包括样品制备、抗原诱导、抗原解露等。[/font][/b][font=宋体]具体如下：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备：根据细胞或组织的不同，选择不同的处理方式。对于细胞样品，需要固定和渗透化处理以保持其形状和蛋白质结构。对于组织样品，需要切片并进行染色前的去脂处理。[/font][font=宋体]②抗原诱导：如果目标标记物是蛋白质，那么需要选择适当的抗体来识别目标蛋白质。抗体可以人工合成或从动物体内提取。[/font][font=宋体]③抗原解露：对于细胞样品，可以利用活液解离细胞，并将细胞固定在载玻片上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]与 [/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]区别与联系[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]免疫组化[/b][/url]，是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性的研究。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，[/font][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]属于 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]的升级版本！[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Tips[/font][font=宋体]：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]能够完整显现组织原位形态信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]常规免疫组化的分析属于定性分析，其判断大多依赖于经验，其分析结果会有差异。而多重荧光免疫组化属于定量分析，其利用软件可对组织中的细胞进行精准的结果分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]常规免疫组化受传统染色成像的限制，靶标少于 [/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]个，无法完整分析组分信息。而多重荧光免疫组化可实现多因子共定位，可以获取更多的生物信息，且样本需求量较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font='calibri'][size=13px]10种免疫荧光检测方法详解！从入门到专业！[/size][/font]免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，接下来的实验方法希望可以帮到您。1. 细胞固定和通透为达到蕞佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。步骤很重要，细胞和抗原需要保证蕞佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情况下，2. 抗体特异性免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体，可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下，纯化抗体的效果很好，但是正确的对照可以帮助精-准定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照，有利于减少降低背景干扰。3. 合适的抗体稀释比例通过优化抗体稀释比例来优化染色，通常情况下 1ug/ml 的纯化抗体或者 1:100-1:1000 的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能保证低背景染色的前提下，可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是第1次使用该抗体或测定某抗原，强烈建议浓度梯度实验。4. 优化缓冲液和封闭剂尽管很多抗原在常见的 Buffer 如 PBS 中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland 可提供优化过的 IHC 用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。5. 选择正确的二抗如果您需要做免疫实验，我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单染实验；如果是双重甚至是多重染色，那么必须使用预吸附的二抗。同时，请优先选择来自同一物种的二抗。6. 使用合适的细胞密度选择合适的细胞数量进行染色，当细胞数量过多时，细胞结构不好，导致染色背景深，低细胞密度，会使细胞贴壁不佳，状态不好。7. 多重染色对同一样本进行两个不同抗原的检测时，可以用各自的抗体进行同时染色，但要求两个一抗的种属来源不同，标记物不同，而二抗的种属来源需保持一致。8. 降低背景高背景是免疫荧光常见的问题，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次五分钟，推荐洗涤液为 PBS+0.05%Tween。9. 封片作为免疫荧光的蕞后一步，可以提高折射率，保护样品。10. 数据分析观察整体样片时，选择具有代表性的细胞进行数据获取与分析。以上是10种检测方法，但是针对免疫荧光检测服务，推荐义翘神州，服务优势：①技术员长期从事抗体质量控制工作，经验丰富。②拥有包括Nikon A1激光共聚焦显微镜等重要仪器，可满足您对样片、活细胞等样本的静态和动态观察拍摄。③检测结果准确、重复性高，实验结果可直接用于论文发表。更多免疫荧光检测服务详情可以参看https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service

[font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法是生物学领域中两种常用的实验技术，它们在原理、操作过程和应用方面有着显著的区别。本文将详细探讨这两种技术的区别，以便更好地理解它们的特点和应用价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先，我们来了解免疫荧光法。免疫荧光法是一种利用荧光物质标记的特异性抗体来检测细胞内或细胞表面抗原的技术。其基本原理是抗原抗体反应，通过荧光显微镜观察荧光标记的抗原，从而实现对抗原的定位和定量分析。免疫荧光法具有高灵敏度、高特异性和定位准确的特点，广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相比之下，免疫印迹法则是通过检测细胞或组织提取物中特定抗原的存在和分布，以了解其在生物学过程中的作用。这种方法通常涉及到蛋白质的提取、分离、转移和检测等步骤。免疫印迹法能够检测蛋白质的分子量、表达水平以及与其他分子的相互作用，为生物学研究提供了重要的信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在操作过程上，免疫荧光法主要涉及细胞的固定、通透、抗体孵育和荧光显微镜观察等步骤。而免疫印迹法则需要进行蛋白质的提取、电泳分离、膜转移、抗体孵育和显色等复杂操作。因此，从操作难度和复杂性来看，免疫印迹法相对更为繁琐。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在结果解读和应用方面，免疫荧光法能够提供直观、定位准确的抗原分布信息，有助于研究细胞的结构和功能。而免疫印迹法则能够揭示蛋白质的表达水平、分子量和相互作用，为疾病诊断、药物研发和生物学机制研究提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，免疫荧光法和免疫印迹法在应用领域上也有所不同。免疫荧光法广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域，特别是在病毒检测、细胞信号转导和细胞凋亡等研究中发挥着重要作用。而免疫印迹法则更多地应用于分子生物学、生物化学和病理学等领域，对于研究蛋白质的结构、功能和调控机制具有重要意义。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法优缺点介绍：[/font][/b][font=宋体] [/font][table][tr][td][font=宋体]技术[/font][/td][td][font=宋体]优点[/font][/td][td][font=宋体]缺点[/font][/td][/tr][tr][td=1,4][align=center][font=宋体]免疫荧光法[/font][/align][/td][td][font=宋体]特异性强[/font][/td][td][font=宋体]非特异性染色问题尚未完全解决[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]敏感性高[/font][/td][td][font=宋体]操作程序较复杂[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]速度快[/font][/td][td][font=宋体]需要特殊的昂贵仪器（荧光显微镜）[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]早期诊断价值[/font][/td][td][font=宋体]染色标本不能长期保存[/font][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font=宋体]免疫印迹法[/font][/align][/td][td][font=宋体]操作简便[/font][/td][td][font=宋体]对于低丰度的抗原可能不够敏感[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]所需实验材料相对简单[/font][/td][td][font=宋体]无法提供抗原在细胞或组织中的定位信息[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]对某些特定抗原的检测具有较高的灵敏度[/font][/td][td][font=宋体]需要一定的实验技能和经验[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，免疫荧光法和免疫印迹法是两种具有不同特点和应用领域的实验技术。免疫荧光法注重抗原的定位和定量分析，操作简便直观；而免疫印迹法则关注蛋白质的表达和相互作用，操作相对复杂但能提供深入的信息。在实际应用中，我们需要根据研究目的和需求选择合适的技术手段，以获取准确、可靠的实验结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]IF[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]