免疫荧光染色

前言免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，它是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括 样片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、 样品准备对于单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过（70%乙醇中浸泡）的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可，操作过程要小心，防止细胞脱片。对于悬浮生长细胞，有两种方式，一种是取对数生长细胞，制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入封闭液中固定，封闭后滴加一抗和二抗孵育；另一种是先在悬浮液中进行固定和染色，离心洗脱后，用移液管移至盒式玻片进行后续抗体孵育。对于冰冻切片制备，建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。组织一定要冷冻适度，切片时选用干净锋利的刀片，防止裂片和脱片。对于石蜡切片的制备，要先进行脱蜡和抗原修复的处理。2、固定做好切片并风干后立即用合适的固定液（固定液包括有机溶剂和交联剂，其选择取决于抗原的性质及所用抗体的特性）进行固定，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。固定时间则取决于固定组织切片的大小和类型，对大多数组织，18-24h即可，而细胞的固定时间较短。3、通透针对胞内抗原，使用0.5% Triton X-100或丙酮等通透剂进行通透，这一步的目的是使抗体进入胞内。 4、封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用封闭液（一般包括与二抗同一来源的血清、BSA或者羊血清）封闭，减弱背景着色。封闭开始后，要注意样品的保湿，避免样品干燥，否则极易产生较高的背景。5、一抗孵育一抗孵育温度一般分为：4℃、室温、37℃，其中4℃效果更佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37℃孵育1-2h，4℃过夜（从冰箱拿出后37℃复温45min）。具体条件还要根据样品、稀释液等条件进行摸索尝试。6、荧光二抗孵育荧光二抗孵育一般在室温或37℃孵育30min-1h，该过程必须在避光环境下进行，防止荧光淬灭。荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能会有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时采用小包装并进行适当的离心。7、复染一般采用DAPI进行复染，目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存，我们需要对样本进行封片，用吸水纸吸干爬片上的液体，一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、 荧光观察有条件的话最好立即用荧光显微镜观察拍照，若不能及时拍照，也要做好封片和封固，保持避光和湿度。荧光显微镜的成像能力对最终的结果也会造成很大的影响，好的荧光显微镜能够最大限度地收集荧光信号，并呈现高分辨率的图片，使细节更清楚，更易得到一张效果极佳的结果图。注意：切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要，一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。(1)单独冲洗，防止交叉反应造成污染；(2)温柔冲洗，防止切片的脱落。可使用浸洗方式；(3)冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质；(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。根据上述步骤完成免疫荧光实验后，就需要进行荧光显微成像，得到我们想要的结果。选择一款操作简单、成像清晰、效果卓越的荧光显微镜进行观察拍照，才能轻松得到更为理想的结果图，达到事半功倍的效果。Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜作为一款电动化、智能化的显微镜，具有以下优势：☑ 正倒置一体快速切换：切片、细胞观察随心切换，无惧任何耗材；☑ DHR数字降噪功能：极大地降低了背景噪音和荧光干扰，提高图像锐度，加深细节，得到分辨率更高的图片；☑ 强大的Z-Stacking功能：通过高精度电动化Z轴层扫来扩大景深，解决厚样本观察问题，提高图像分辨率；☑ 500MP单色相机：能够采集更多荧光信号，助力低荧光强度样本观察；☑ 多通道荧光自动拍摄叠加功能：可自动进行多通道成像的叠加，个性化选择查看/保存各通道的组合图像。

免疫荧光方法中的重要环节1、冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2、组织切片固定：切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3、血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4、一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果蕞佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件还要摸索。5、二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。6、复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。7、封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。8、切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意：（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。（中性及弱硷性条件（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）9、拍照：有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过2~3h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发；使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

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什么是免疫荧光技术？免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。免疫荧光方法中主要步骤：1）冰冻切片制备 2）组织切片固定3）血清封闭 4）一抗孵育条件5）二抗孵育条件 6）复染 7）封片 8）切片清洗荧光显微镜标本制作要求：1、载玻片：载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光，有时需用石英玻璃载玻片。2、盖玻片：盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。3、标本：组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。4、封裱剂：封裱剂必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。5、镜油：必须使用无荧光镜油。荧光玻片如何来检测呢？荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过荧光显微镜来观察。Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜★ 高分辨率3D成像，获得最佳成像效果★ 正倒置一体，一机两用★ 智能化操作，高效便捷

宫颈癌是全世界女性第四大常见恶性肿瘤，每年可造成30多万人死亡。宫颈鳞癌（CESC）作为宫颈癌主要病理类型约占75%，通常经历由正常宫颈到宫颈上皮内瘤变再到CESC的发生和进展过程。然而，CESC进展过程中上皮和微环境细胞相互作用关系及其关键分子途径的发展尚不清楚。2023年1月27日，山东省肿瘤医院于金明院士、岳金波教授团队与解放军总医院第五医学中心刘兵研究员团队合作在Science Advances杂志上发表了题为Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression的研究论文。为宫颈癌的诊疗提供了疾病诊断与预后的生物标志物和潜在的治疗靶点。为了阐明了宫颈上皮细胞的转录致瘤轨迹并揭示了 CESC 启动和进展中涉及的关键因素，文章作者对来自对四组13例不同病变阶段的宫颈组织（包括NC、CIN、早期CESC和晚期CESC）的起始和进展过程中，上皮细胞、巨噬细胞、NK和T细胞、内皮细胞、成纤维细胞的转录组变化及亚群特征进行了深入探索。该研究通过单细胞转录组测序，进行了单细胞RNA测序（scRNA-seq）构建了宫颈鳞癌发生和进展过程中的细胞和分子特征图谱，发现了大量肿瘤发生和进展相关的新的细胞亚群和分子。在此基础上，提出了针对“CESC生态系统“进行分析的必要性，尤其是考虑到免疫系统是作为一个动态的整体，简单对于单个细胞亚型的描述不足以展现更大的”全景“。围绕这个目标，在文章中通过大量的转录组数据，研究者发现几个细胞簇的相对丰度显示与较短的存活期显着相关：CCL20 +Mac、APOE+Mac、epi7、CD56+NK、TH17、耗尽的CD8 +T、PODXL+EC、TNFRSF9高Treg和 mCAF。相反，其他细胞簇的丰度与更长的存活率显着相关：pDC、CD16+NK、GZMK+CD8+T、ZNF683+CD8+T、CLEC9A+DC、epi8和肥大细胞。 实验部分除了转录组测序相关之外，作者使用TissueGnostics公司TissueFAXS Plus全景组织细胞定量分析系统获取图像。在长存活率相关的因素中，作者重点提出了CESC中的epi8的高相对丰度可以促进我们观察到的高水平T细胞浸润从而增强与肿瘤细胞的串扰。文中作者表示，尽管对 CESC 进行了大量的转录组分析，但这些方法无法提供对主要细胞参与者、它们的相互作用伙伴以及驱动疾病发生和发展的关键分子途径的高分辨率洞察，尤其是CAF，作为肿瘤微环境中的关键组成部分，其通过多种机制促进恶性生长和侵袭 ，而且空间 CESC 信息对于理解细胞簇的位置及其相互作用很重要，但在 scRNA-seq 分析的解离过程中存在丢失。多重免疫荧光标记与转录组测序为了揭示了 mCAF 和 vCAF 的两个主要亚群，作者选择使用TissueFAXS Cytometry技术了，通过多重免疫荧光标记验证了它们在人类 CESC 中的存在，发现 mCAF 表达高水平的与促肿瘤途径相关的基因（主要位于富含胶原蛋白的基质条纹内），以及细胞间相互作用分析表明，mCAF 可主要通过 NRG1/ERBB3途径促进 CESC 进展，该途径参与抗雄激素对前列腺癌的抗性，在之前的研究中尚未报道。这部分内容也是TissueGnostics公司的TissueFAXS Cytometry技术在关键领域取得的最新科研进展之一。Fig 1 CESC样本组织切片中的T细胞（PAN-CK(红色)、HLA-DR(蓝色)、IDO1(绿色)和CD3(灰色)）的多重免疫荧光标记图像。在较短存活期显著相关的因素中，作者研究了CESC进展过程中基质癌相关的呈现为细胞（mCAF）的亚群特征，发现mCAF可能促进CESC的进展，并进一步发现其作用机制是通过NRG1/ERBB3 通路来实现的。Fig 2 多重免疫荧光CESC组织样本中mCAF和vCAF上的特异性标记物。Fig 3 mCAF肿瘤特异性配体-受体对的多重免疫荧光标记，包括NRG1-ERBB3和Wnt5A-FZD6。&bull 单细胞测序技术完成了细胞水平的组学研究，但是获取的信息内缺失了细胞的空间分布信息。如果想要补充细胞的空间位置表型，就需要引入多重免疫荧光技术。多色免疫荧光技术通过单细胞分辨率的组织成像，能够多靶点、可视化地描绘细胞的复杂空间位置信息，从而揭示细胞间的相互作用关系，细化微环境的空间结构。&bull 单细胞测序技术与多重免疫荧光技术的结合能够多层次、多角度、多组学地研究肿瘤微环境及免疫微环境，同时获悉胞间联系、基因空间变化等信息，并赋予关键基因的细胞分布信息和组织分布信息，从而更加精准地研究疾病相关分子机制并探索潜在的治疗靶点。同时作者也在讨论部分，使用TissueFAXS Cytometry技术生成的数据，可以针对人体组织进行更详细的研究，以回答 scRNA-seq 无法解决特定问题。

一、项目基本情况项目编号：[350101]FJKT[GK]2023003项目名称：金山院区多色免疫荧光成像系统采购方式：公开招标预算金额：4,000,000.00元采购包1(金山院区多色免疫荧光成像系统):采购包预算金额：4,000,000.00元采购包最高限价： 4,000,000.00元投标保证金： 40,000.00元采购需求：（包括但不限于标的的名称、数量、简要技术需求或服务要求等）品目号品目编码及品目名称采购标的数量（单位）允许进口简要需求或要求品目预算(元)1-1A02100404-光学式分析仪器光学式分析仪1(项)是光学式分析仪4,000,000.00本采购包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订之日起90日二、申请人的资格要求：1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：采购包1：无3.本项目的特定资格要求：采购包1：(1)根据《福州市财政局关于进一步推进政府采购领域优化营商环境工作的通知？》（榕财采[2021]52号）规定，投标人在投标（响应）时，按照规定提供相关承诺函（详见附件“资格承诺函”）的，无需再提交财务状况、缴纳税收和社保资金缴纳等证明材料。【注意事项：采购人有权在签订合同前要求中标人提供相关证明材料以核实中标人承诺事项的真实性。投标人应当遵循诚实守信的原则，不得作出虚假承诺，承诺不实的，属于提供虚假材料谋取中标、成交，依法追究相关的法律责任。】？投标人可自行选择是否提供本承诺函，若不提供本承诺函的，应按招标文件要求提供响应的证明材料。供应商可删减承诺事项（例：如删去承诺第1项的，则应按招标文件要求提供财务状况报告。）招标文件其他地方要求与本条款要求不一致的，以本条款要求为准。；(2)招标文件规定的其他资格证明文件？所投货物若属于医疗器械管理范畴，按照国家《医疗器械监督管理条例》，应符合以下标准，1、投标人为制造商的，须提供《医疗器械生产许可证》；投标人为经销商的，投标货物若属于三类医疗器械，须提供《医疗器械经营许可证》，投标货物若属于二类医疗器械，也可提供《第二类医疗器械经营备案凭证》，投标货物若属于一类医疗器械，则须提供《第一类医疗器械备案凭证》或医疗器械经营许可证；2、投标货物属于《医疗器械监督管理条例》规定的第一类医疗器械产品应提供《第一类医疗器械备案凭证》，属于第二类、第三类医疗器械产品应取得《医疗器械注册证》(如有注册登记表应提供)。所有证件必须在有效期内。；(3)投标人针对“财务状况报告(财务报告、或资信证明）”①投标人？提供的财务报告复印件（成立年限按照投标截止时间推算）应符合？下列规定：？a.成立年限满1年及以上的投标人，提供经审计的2021？年或2022年的年度财务报告。本招标文件中若有与此处不一致的，？以此处补充说明为准。。三、采购项目需要落实的政府采购政策进口产品：进口产品，适用于本项目。本项目“品目号1-1光学式分析仪”属于清单内允许采购进口产品的情形，同时满足需求的国内产品亦可参加投标(进口产品是指通过中国海关报关验放进入中国境内且产自关境外的产品)。节能产品：节能产品按本招标文件规定执行。环境标志产品：环境标志产品按本招标文件规定执行。信息安全产品：信息安全产品按本招标文件规定执行。信用记录：（1）（根据财库〔2016〕125号文件规定，供应商不得被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单，投标人针对“信用记录查询结果”可自主提供证明材料，未提供该证明材料的不视为投标文件无效。（2）查询结果的审查：①由资格审查小组通过上述网站查询并打印投标人信用记录（以下简称：“资格审查小组的查询结果”）。②投标人提供的查询结果与资格审查小组的查询结果不一致的，以资格审查小组的查询结果为准。③因上述网站原因导致资格审查小组无法查询投标人信用记录的（资格审查小组应将通过上述网站查询投标人信用记录时的原始页面打印后随招标文件一并存档），视为查询结果未存在投标人应被拒绝参与政府采购活动相关的信息。④查询结果存在投标人应被拒绝参与政府采购活动相关信息的，其资格审查不合格。（3）若此项规定与招标文件其他部分有矛盾的，以此项规定为准。四、获取招标文件时间： 2023-03-02 至 2023-03-09 ，（提供期限自本公告发布之日起不得少于5个工作日），每天上午00:00:00至12:00:00，下午12:00:00至23:59:59（北京时间，法定节假日除外）地点：招标文件随同本项目招标公告一并发布；投标人应先在福建省政府采购网(zfcg.czt.fujian.gov.cn)免费申请账号在福建省政府采购网上公开信息系统按项目下载招标文件(请根据项目所在地，登录对应的(省本级/市级/区县)）福建省政府采购网上公开信息系统操作)，否则投标将被拒绝。方式：在线获取售价：免费五、提交投标文件截止时间、开标时间和地点2023-03-23 09:15:00（北京时间）（自招标文件开始发出之日起至投标人提交投标文件截止之日止，不得少于20日）地点：福建省福州市鼓楼区温泉公园路69号福州市行政服务中心三楼-六、公告期限自本公告发布之日起5个工作日。七、其他补充事宜无。八、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：福建医科大学孟超肝胆医院地址：福建省福州市鼓楼区西洪路312号联系方式：0591881162002.采购代理机构信息（如有）名称：福建康泰招标有限公司地址：福建省福州市鼓楼区湖东路169号中闽天骜大厦第十三层02A单元联系方式：0591-878035053.项目联系方式项目联系人：陈东英、原梁杰电话：0591-87803505网址： zfcg.czt.fujian.gov.cn开户名：福建康泰招标有限公司福建康泰招标有限公司2023年03月02日

大家好，我是流式荧光崔工，一个旨在链接与流式荧光相关的朋友，一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。——流式荧光崔工上期回顾：《流式荧光技术检测与化学发光技术检测那些事儿》— 1 —前两天有位老师问崔工，流式抗体与免疫组化抗体有什么区别？崔工收集了网络上的一些回答，供参考：崔工收集了网络上的一些回答，供参考：回答1：两种抗体不一定通用，流式是用直接标记还是间接标记？如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。如果你的免疫组化要用其它的标记的话，或者是间接标记的话，就有麻烦，因为荧光素的标记很可能会影响二抗和一抗的结合。回答2：流式抗体是用于流式细胞仪检测的抗体，与之相对应的有免疫组化抗体，免疫荧光抗体等等。回答3：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。崔工还请教了一位做抗体的朋友，他的回答是这样的：表位抗原有差异，免疫组化抗体要实现不同组织的定位，半定量特异性检测，流式是定量表达。— 2 —不同的实验对抗体有不同的要求崔工觉得首先可以从抗体的应用原理及特点从侧面来了解会更加清楚。抗体的应用一般来说除了做流式和免疫组化外，还可以做免疫荧光等其他实验。免疫组化是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，通过化学的方法使标记抗体显色，对组织胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测。免疫荧光是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的荧光标记技术，通过激光激发使荧光素发出荧光。在荧光显微镜下观察荧光的变化从而对细胞内的抗原进行分析的技术。流式荧光一样是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的荧光标记技术，过激光激发使荧光素发出荧光。不过检测是通过流式细胞仪来检测的。— 3 —再从WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC对抗体需求有什么区别来看WB的蛋白经过加热变性之后都变成线性的结构。因此最好的抗体是采用非常特异序列的人工合成多肽的方法来做实验，结果也非常特异。IP/CHIP. 我们用抗体去结合生理状态下的蛋白质，因此IP的抗体最好使用纯化的天然蛋白制作的抗体来做，也可以用纯化的重组蛋白的抗体。最好不要用人工合成多肽制作的抗体，因为这种抗体识别的位点可能被深深地藏在了蛋白的内心深处。CHIP和IP没有太大的区别，唯一的问题在于，如果抗体识别的表位和该蛋白质与DNA结合的部位一致，则会导致CHIP实验的失败。 IF/IHC. 免疫荧光和免疫组化中需要进行固定一步，固定是为了尽量让细胞的形态结构维持和原有的一致。这种化学物质的固定使蛋白质变性凝固，与天然状态下的蛋白质有了一定的区别，但是又不同WB中加热变性变成了线性的结构。因此在做IF/IHC实验中，最合适的抗体可以是纯化的重组蛋白得到的抗体，也可以是人工合成多肽得到的抗体（多肽是在蛋白质的表面）。FC. 流式细胞中分为两种，一种是活细胞的流式，这种流式最好采用是天然蛋白或者重组蛋白的抗体来做，另外一种是经过固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗体一致。在做流式细胞中，我们有直接标记和间接标记，间接标记不如直接标记真实准确。因此我们选择流式抗体要采用带有荧光标记的抗体；如果研究的蛋白没有直接标记的抗体，那么就采用间接标记抗体，需要添加荧光二抗。—————————————————————【行业征稿】若您有生命科学、医药、临床等行业相关研究、技术、应用、管理经验等愿意以约稿形式共享，欢迎自荐或引荐投稿联系人：刘编辑（点击查看KOL主页）word图文投稿邮箱：liuld @instrument.com.cn微信：JaysonXY（备注来意：投稿）

免疫组化染色结果容易受哪些因素影响众所周知免疫组化技术对于研究肿瘤的发展规律，进行良恶性分类及鉴别诊断具有重要的作用，因此在做此类实验过程中一定要加倍谨慎起来，尤其是免疫组化染色实验，其结果很容易受某些因素影响。那么，免疫组化染色结果容易受哪些因素影响？ 专家指出：免疫组化染色的结果，与组织的固定、抗原的修复、抗体的保存及使用三个重要因素相关密切。 1、固定 常用的组织固定液是甲醛，标本必须及时固定，这有利于抗原的保存，防止抗原在组织细胞内弥散、丢失或失去免疫活性，但固定时间最好为！“ 小时，一般不超过”# 小时，因固定时间越长，部分组织细胞免疫组化标记敏感性会明显降低。其原因为甲醛固定过程中会形成醛键或羧甲基，而封闭了部分抗原决定簇；也会使蛋白与蛋 白之间发生交联，也可能会封闭抗原决定簇，使许多抗原如常用的$%、&$‘（ 等免疫反应明显减弱，甚至消失，致酶标不能得出正确的结果，因此在染色时为取得良好的染色效果，必须对有些抗原进行预先修复，以进一步暴露抗原。 2、修复抗原 外检组织经过甲醛固定、脱水透明及浸蜡过程，组织中的抗原成分已被破坏或封闭，为了恢复组织的抗原性和提高组织对抗体的敏感性，一般需 修复抗原。有人用蛋白酶消化，或微波处理，或高压锅处理，使封闭的抗原成分暴露出来而显色。我们采用高温高压处理切片，切片在弱酸及高温高压下，使封闭的抗原显示出来，提高了阳性检出率和阳性强度，同时减轻了背景着色，使阳性结果清晰可辨。当然，不同组织、不同抗原其所用的高压时间及选用合适的抗原 修复缓冲液及其最适的。' 等均对结果影响甚大。 3、正确保存及使用抗体 抗体是免疫组织化学最基本的试剂与材料，它可分为第一抗体与第二抗体，因为抗体是蛋白质构成，保存或使用不当，不但会造成浪 费，而试剂变质会出现假阴性结果。对抗体及6、7试剂盒均应放置低温冰箱贮存，用一支取一支，对于一次用不完的抗体可保存在# 8冰箱内，而不要放在冰格室，因为那里的温度在+ 8以下，抗体会很快结冰，再次使用时又要溶解。这样几次冻融，抗体效价会急剧下降而失效。对一些将近失效期或已过失效期，有的适当提高工作浓度， 也可以作出正确的结果，以免丢失造成浪费。

项目编号：SDJDHF20220450-Z219/HYHA2022-2547项目名称：山东大学全自动免疫组化及原位杂交染色科研平台采购采购方式：竞争性磋商预算金额：145.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：145.0000000 万元（人民币）采购需求：采购全自动免疫组化及原位杂交染色科研平台，具体参数详细见“第四章 采购内容及项目要求”合同履行期限：自合同生效之日起至本项目质保期满为止。本项目( 不接受 )联合体投标。凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：山东大学地址：山东大学中心校区明德楼联系方式：王老师0531-883697972.采购代理机构信息名称：海逸恒安项目管理有限公司地址：山东省济南市历下区华润置地广场A5-6号楼27楼招标三部联系方式：徐玉镯、吕宁、李雨莹0531-82661997、187658755653.项目联系方式项目联系人：徐玉镯、吕宁、李雨莹电话：0531-82661997、18765875565全自动免疫组化及原位杂交染色平台-附件.pdf

受宁波市临床病理诊断中心的委托，宁波中基国际招标有限公司就宁波市临床病理诊断中心采购全自动免疫组化染色仪项目进行询比采购，现公告邀请合格供应商参加采购活动。本项目为非招标方式采购。一、项目编号：CBNB-20221017项目名称：宁波市临床病理诊断中心采购全自动免疫组化染色仪项目二、采购内容、采购数量、主要需求、预算金额：序号采购内容采购数量主要需求预算金额1全自动免疫组化染色仪2台详见“第五章 采购需求”30万元三、供应商资格条件：3.1具有完成本项目的能力，且能独立承担民事责任的能力；3.2本项目不接受联合体报价。四、采购文件的获取：4.1采购文件通过从采购代理机构购买的方式获取。4.2采购文件发售期限：自采购公告发布之日起至2022年1月18日17时00止。4.3采购文件售价每套为500元人民币，售后不退。4.4询比文件以电子文本形式出售，允许在线购买采购文件，采购文件在线购买网址：https://dwz.cn/BzVsB93Q。4.5购买联系电话：0574-88090098。五、响应保证金：人民币6000元。供应商应于响应文件提交的截止时间前将投标保证金以银行电汇或网银（公对公转账形式）交至宁波中基国际招标有限公司账户。 本项目有关标书费、响应保证金以及成交服务费均汇入以下账户：开户银行： 宁波银行科技支行帐 号： 31010122000005488户 名： 宁波中基国际招标有限公司六、响应文件提交的截止时间及地点：6.1截止时间：2022年1月21日14时00分（北京时间），所有响应文件应于截止时间之前提交，迟到的响应文件和未购买采购文件者的响应文件将被拒绝。6.2地点：中基招标会议中心（宁波市鄞州区天童南路666号中基大厦1楼）开标室开标。七、响应文件开启时间和地点：7.1开启时间：2022年1月21日14时00（北京时间）7.2地点：中基招标会议中心（宁波市鄞州区天童南路666号中基大厦1楼）开标室 八、其他注意事项：1、采购人名称：宁波市临床病理诊断中心联系地址： 宁波市江北区环城北路东段685号项目联系人（询问）：张先生 项目联系方式（询问）：0574-87651120 质疑联系人：杜先生 质疑联系方式：0574-87651110 2、采购代理机构：宁波中基国际招标有限公司联系地址：宁波市鄞州区天童南路666号中基大厦19楼项目联系人（询问）：王鸯鸯、徐承 项目联系方式（询问）：0574-88090157、87425387 质疑联系人：李艳 质疑联系方式：0574-87423685 3、监督机构名称：宁波市临床病理诊断中心联系地址： 宁波市江北区环城北路东段685号联系人：杜先生 联系方式：0574-87651110

GS-Smart小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比 台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备，常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝（CBB）染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆动频率，从而控制样品在溶液中的摆动快慢，这既是该仪器的基本工作原理，也是她在以上实验中主要发挥的作用。在普通考马斯亮蓝染色、脱色实验中，台式水平脱色摇床是科研工作者们经常会用到的设备。一般是设定工作池的摇摆频率后，先后加入CBB染色液、脱色液，使摇床工作池持续摇摆，再置入蛋白凝胶使其在摇摆的液体中充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。但一般的台式水平脱色摇床除了工作池的摆动频率可调外，没有其他参数能设置，虽然某些型号摇床还增加了定时功能，但也无法设置自动完成复杂的步骤。因此，前期进液、换液和排液都需要实验人员手动操作，另外，染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。再者，台式水平脱色摇床的工作池一般裸露在外，摇摆过程中，有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。相比之下，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均领先台式水平脱色摇床，例如：1.智能编程功能：GS-Smart内置3种标准的染色程序，可编程存储47个自定义程序，可以轻松实现进液、换液、出液、定时摇动和废液回收等步骤，无人值守，让实验全程自动完成，这将为那些还在使用传统台式水平脱色摇床做CBB染色脱色实验的科研工作者们节省大量时间精力。2.可封闭可定制的染色池：GS-Smart染色池可封闭，既能防止液体溅出溢出、阻隔挥发物质，还可选择并定制各种尺寸。有些科研工作者为实现&ldquo 快速&rdquo CBB染色脱色，习惯将CBB染色液或脱色液加热至沸腾然后进行染色脱色处理，而高温状态的液体会加速挥发甲醇乙酸等化合物，如果此时使用台式水平脱色摇床，无疑具有一定的安全隐患。3.机身与储液瓶一体化设计：该设计属于国际首创，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，从而整机占地面积与普通台式水平脱色摇床相当。不仅节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。 综上，在CBB染色脱色实验应用方面，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均全面领先于台式水平脱色摇床。事实上，GS-Smart从2013年春季推出之初，就定位成了一款为考马斯亮蓝染色脱色实验而生的仪器，她的最终使命是全面取代CBB染色脱色实验中的台式水平脱色摇床，从而让所有CBB染色脱色自动进行！ 本文关键词：摇床,脱色摇床,水平脱色摇床

鼎昊源全自动染色仪Blotstainer试用征集 鼎昊源科技有限公司一直致力于开发各式各样的自动化实验室仪器，从2011年起陆续推出了多种自动凝胶染色仪，并获得了广大科研和企业用户的关注和肯定。今年我们继续推出了专门应用于western blot和核酸分子杂交的全自动染色仪blotstainer。 Blotstainer不单单可以用于western blot, 它的功能非常齐全，可以同时用于核酸分子杂交, 原位杂交和免疫组化操作。实验室里配备一台Blotstainer可以让实验从繁杂的加样、换液、孵育步骤解脱出来，把繁杂的手工操作变成简单的自动程序操作，提高时间的利用效率，优化实验的操作步骤。鼎昊源全自动染色仪BlotstainerBlotstainer采用严格的程序执行用户指定的western blot或分子杂交实验流程，全自动标准化的机器操作很大程度上排除了人工操作的误差和不稳定性，帮助后续数据的分析并且非常利于实验条件的摸索。这款全自动染色仪集自动移液系统，温控系统和摇床孵育于一身。自动移液系统包括10个管路，相互独立，避免交叉感染。温控系统范围在4℃到80℃之间，满足western blot和核酸分子杂交实验的孵育温度。 欢迎大家积极参与我们的免费试用活动，我们将携带Blotstainer全自动染色仪到您的实验室为您做体验，让您亲自体会Blostainer带给您的便利。 衷心的感谢参与试用体验的每一位用户！ 试用联系方式：电话：01085584421电子邮件：sales.list@dhsci.com

项目概况 受福建省食品药品质量检验研究院委托，福建榕卫招标有限公司对[3500]RWZB[GK]2021109、2021年福建省疫苗批签发能力建设仪器设备采购项目（进口部份）组织公开招标，现欢迎国内合格的供应商前来参加。 2021年福建省疫苗批签发能力建设仪器设备采购项目（进口部份）的潜在投标人应在福建省政府采购网(zfcg.czt.fujian.gov.cn)免费申请账号在福建省政府采购网上公开信息系统按项目获取采购文件，并于2022-01-17 14:30（北京时间）前递交投标文件。一、项目基本情况 项目编号：[3500]RWZB[GK]2021109 项目名称：2021年福建省疫苗批签发能力建设仪器设备采购项目（进口部份） 采购方式：公开招标 预算金额：1300000元 包1： 合同包预算金额：1300000元 投标保证金：13000元 采购需求：（包括但不限于标的的名称、数量、简要技术需求或服务要求等）品目号品目编码及品目名称采购标的数量（单位）允许进口简要需求或要求品目预算（元）1-1A032017-临床检验设备酶联免疫荧光斑点分析仪1（套）是详见招标文件1300000 合同履行期限： 合同签订后 ( 90) 天内交货 本合同包：不接受联合体投标二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.本项目的特定资格要求： 包1 (1)明细：特别提示：单位负责人授权书（若有） 描述：纸质投标文件正本中的本授权书（若有）应为原件。电子投标文件中的本授权书（若有）应为原件的扫描件（即单位负责人签字或盖章和投标人代表签字并加盖投标人公章的原件扫描件）。投标人应按照招标文件第七章规定提供。（如项目接受联合体投标，对联合体应提出相关资格要求；如属于特定行业项目,供应商应当具备特定行业法定准入要求。) 三、采购项目需要落实的政府采购政策 进口产品，适用于（所有合同包或品目号）。节能产品，适用于（所有合同包或品目号），按照《关于印发节能产品政府采购品目清单的通知》财库〔2019〕19号执行。环境标志产品，适用于（所有合同包或品目号），按照《关于印发环境标志产品政府采购品目清单的通知》财库〔2019〕18号执行。信息安全产品，适用于（所有合同包或品目号）。小型、微型企业符合财政部、工信部文件（财库〔2020〕46号），适用于（所有合同包或品目号）。监狱企业，适用于（所有合同包或品目号）。促进残疾人就业 ，适用于（所有合同包或品目号）。信用记录，（所有合同包或品目号），按照下列规定执行：（1）投标人应在（本项目投标截止时间）前分别通过“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、中国政府采购网（www.ccgp.gov.cn）查询并打印相应的信用记录（以下简称：“投标人提供的查询结果”），投标人提供的查询结果应为其通过上述网站获取的信用信息查询结果原始页面的打印件（或截图）。（2）查询结果的审查：①由资格审查小组通过上述网站查询并打印投标人信用记录（以下简称：“资格审查小组的查询结果”）。②投标人提供的查询结果与资格审查小组的查询结果不一致的，以资格审查小组的查询结果为准。③因上述网站原因导致资格审查小组无法查询投标人信用记录的（资格审查小组应将通过上述网站查询投标人信用记录时的原始页面打印后随采购文件一并存档），以投标人提供的查询结果为准。④查询结果存在投标人应被拒绝参与政府采购活动相关信息的，其资格审查不合格。四、获取招标文件 时间：2021-12-24 15:00至2022-01-08 18:00（提供期限自本公告发布之日起不得少于5个工作日），每天上午00:00:00至11:59:59，下午12:00:00至23:59:59（北京时间，法定节假日除外) 地点：招标文件随同本项目招标公告一并发布；投标人应先在福建省政府采购网(zfcg.czt.fujian.gov.cn)免费申请账号在福建省政府采购网上公开信息系统按项目下载招标文件(请根据项目所在地，登录对应的(省本级/市级/区县)）福建省政府采购网上公开信息系统操作)，否则投标将被拒绝。 方式：在线获取 售价：免费五、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 2022-01-17 14:30（北京时间）（自招标文件开始发出之日起至投标人提交投标文件截止之日止，不得少于20日） 地点：福建省福州市鼓楼区省府路1号金皇大厦15层 - 1号开标室六、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。七、其他补充事宜 /八、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称：福建省食品药品质量检验研究院 地 址：福州市通湖路330号 联系方式：87622559 2.采购代理机构信息（如有） 名 称：福建榕卫招标有限公司 地　　址：福州市鼓楼区省府路1号金皇大厦15层 联系方式：0591-87512357 3.项目联系方式 项目联系人：林停、温靖 电　　 话：0591-87512357 网址：zfcg.czt.fujian.gov.cn 开户名：福建榕卫招标有限公司 福建榕卫招标有限公司 2021-12-24

近日，西安市场上赣南脐橙被曝99%经过染色处理，工商部门已介入调查，但染色脐橙依旧销售火爆，未见下架之势。西安市农业局流通处处长杨振峰告诉 “中国之声”，他们向省农业厅反映了，厅里要求了解一下西安有无检测机构可以检测里面的化学成分，结果没有一家有检测能力，而且国家也没有检测标准，政府监管部门失去了法律依据。　　染色脐橙红红亮亮，记者们一看便知，果商们一看便知，只有政府监管部门需要有检测能力的机构进行科学检测。结果是没有机构具备检测能力，即使有检测能力，国家也没有相关标准，于是政府监管部门就没有执法依据，只能由着染色脐橙 “火爆热销中”。谁要是吃了染色脐橙倒了霉，可别怪监管部门。　　与西安遥相呼应的是，北京市小学生张皓调查发现九成蘑菇被漂白，而北京市食品安全办公室却说“食用菌合格率为97.73%”，中国食用菌协会也表示 “不相信小学生的实验结果”。干脆不承认有食品安全问题，既然问题都不存在，自然犯不着他们劳神费力。相比之下，西安的监管部门还算不错，承认问题，想管一管，只是天不与便，只好放弃。　　看来，监管食品市场，政府监管部门活用两招即可应付自如：一招是坚称太平无事，不容许 “无事生非” 另一招是承认有事，但不是我不管，而是没有检测能力与标准，没有执法依据，爱莫能助。两招殊途同归，最终都是监管部门不作为，问题搁在原地，消费者自求多福。　　但市面上传言四起，老百姓没法安心自处，他们需要有关部门升帐理事。关于脐橙染色的事，西安市农业局流通处已向省农业厅反映过了，既然本地不具备检测能力，省农业厅向上级部门报告没有?既然媒体已公开报道，上级部门有没有注意到此事，接下来准备怎么办?这是公众亟欲知情的。　　据说，西安市农业局官员以为，只有大力宣传让群众知道染色橙对人体的害处，拒绝购买，才能从根本上遏制染色脐橙的销售。如果群众都长着一双雪亮的眼睛，当然就能保证没事。但如果凡事群众都能够自行解决，大家又何必出钱养一帮公务人员?纳税人雇用公务人员，难道目的只是让公务人员整天无所事事吗?　　很明显，有关监管部门不想管事，懒得管事，而且有理由不管事，可以不管事。不管事也不用担什么责任，于是多一事不如少一事，所以食品安全问题堆积如山，险象环生。两个月前，也是西安，市面上生姜被曝60%是硫磺熏制的毒姜，而且这种毒姜已经横行市场七年。既然检测没能力，执法没依据，安全问题只好一直存在着。如此说来，每个活着的国人还真是幸运，又或者是免疫力已经久经考验而自然形成了。

p style="text-indent: 2em "2018年6月29日，在江苏宜兴召开的中国分析测试学会标记免疫分析专业委员会2018学术峰会新品发布会上，南京肯辛顿诊断科技有限公司杨昕博士介绍了该公司微流控芯片-时间分辨免疫荧光POCT体外诊断系统。/pp style="text-align: center "img title="1.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201807/insimg/3a2b376a-7973-4075-920a-6da7adfef993.jpg"//pp style="text-indent: 2em "传统诊断中，大量时间被浪费在样本运送到中心实验室、组织标本前处理、标记、录入、分发等方面，核心反应及分析时间占比极低。与之相比，POCT诊断进行了步骤精简，依靠其便携及反应快速等优势，集成了“采样-分析-质控-输出”步骤为一体，从而很大程度降低了诊断时间，为患者在最佳时间窗口就诊获得了最大便利。/pp　　早期的POCT发展始于20世纪中期，主要是以干化学试纸检测血糖及尿糖。此后免疫层析和斑点金免疫渗滤等免疫测定技术推动了感染性疾病、心脏标志物等POCT技术发展。基于微流控技术的生物芯片的出现对POCT是一个重大转折，依靠微流控芯片技术，POCT已经逐步能够实现多靶向，高通量，无需样本前处理的功能。并且在通信技术逐步成熟的基础上，POCT正在向远程数据中心等方向发展。未来的POCT产品能够在便捷，可穿戴，快速进行检测分析的同时，整合远程数据终端和医疗资源进行最佳治疗，从而实现构建真正的大健康体系。/pp　　国家十三五规划关于人口健康技术专栏中明确指出：“。。。需要突破微流控芯片、单分子检测、自动化核酸检测等关键技术，开发全自动核酸检测系统、高通量液相悬浮芯片、医用生物质谱仪、快速病理诊断系统等重大产品，研发一批重大疾病早期诊断和精确治疗诊断试剂以及适合基层医疗机构的高精度诊断产品，提升我国体外诊断产业竞争力。”/pp　　因此，基于POCT技术的床旁快速诊断成为了IVD行业中蓬勃发展的子行业之一。凭借快速、便捷的优势，加之新兴技术不断涌现，人口老龄化，二胎潮，政策支持，使得POCT成为IVD领域内快速增长的蓝海，即便是在欧美成熟市场中亦保持着稳健的增长。/pp　　现场报告中介绍，利用专利的微流控芯片技术,结合特殊的荧光生物反应定量试剂盒,开发出仅用几滴血就能在床旁实现疾病快速检验的系统POCT 。/pp　　该系统主要由检测器(读数器)、诊断试剂、卡盒芯片三个部分组成，整个系统均为自主研发。该系统可以用于检测心梗、心衰、凝血标志物、细菌和病毒感染标志物的检测。/pp　　目前国内市场大多为国外产品所占据，传统检验科检测需要1至2个小时，而以美艾利尔公司经典微流控POCT产品 Triage为例，检测时需200微升的全血才可在15分钟内完成对心脏标志物的检测。/pp style="text-indent: 2em "肯辛顿项目产品的优势与传统技术产品对比见下表。/ptable border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"tbodytr class="firstRow"td width="126" valign="top" style="padding: 0px 7px border: 1px solid windowtext border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "性能指标/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 1px 1px 1px 0px border-style: solid solid solid none border-color: windowtext windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "传统技术（国内市场产品）/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 1px 1px 1px 0px border-style: solid solid solid none border-color: windowtext windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "本项目创新技术/span/strong/p/td/trtrtd width="126" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px border-style: none solid solid border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "检测样本要求/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "手臂静脉血（专业采集）/span/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "静脉/指尖血（非专业人士）/span/p/td/trtrtd width="126" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px border-style: none solid solid border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "检测样品量/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "150-200/spanspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "微升全血/血清/span/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "5/spanspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "微升血清/30微升全血/span/p/td/trtrtd width="126" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px border-style: none solid solid border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "检测时间/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "20/spanspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "分钟/span/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid 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"strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "检测器性能/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "变异系数CV值 15-20%%/span/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "变异系数CV值 5-10%/span/p/td/trtrtd width="126" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px border-style: none solid solid border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext padding: 0px 7px border-image: none background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "适用单位/span/strong/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "医院急诊科室/span/p/tdtd width="208" valign="top" style="border-width: 0px 1px 1px 0px border-style: none solid solid none border-color: rgb(0, 0, 0) windowtext windowtext rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px background-color: transparent "p style="text-align: center -ms-layout-grid-mode: char "span style="font-family: 宋体 font-size: 16px "医院急诊科，社区医院，地方诊所，家庭/span/p/td/tr/tbody/tablep　　南京肯辛顿诊断科技有限公司是一家由南京321项目获得者，江苏省双创人才, 江苏特聘教授，海归博士，国内外医学专家，联合创立的一家致力于开发国际前沿诊断科技产品的高新科技企业。/p

实验概要本文介绍了电泳后主要的凝胶染色方法，包括：标准考马斯亮蓝染色法、快速考马斯亮蓝染色法、凝胶铵银染色法、凝胶中性银染色法及凝胶铜染色法。实验步骤1. 标准考马斯亮蓝染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)； 2) 室温下振摇温育4h至过夜； 3) 去除染色液，收集保存可重复使用20-40次； 4) 依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室温振摇下脱色。灵敏度为0.1-0.5ug蛋白／每条带。注：使用加热的染色液或脱色液可以缩短染色或脱色时间。将染色液或脱色液在微波炉或水浴中加热，(大约50-60℃)，染色时间可缩短至20min,脱色时间约 1-2h。2. 快速考马斯亮蓝染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%三氯yi酸中)； 2) 室温下振摇温育20min； 3) 去除染色液，收集保存可重复使用多次； 4) 加入数倍体积的脱色液(25%甲醇、7%乙酸)室温振摇下脱色。必要时可更换脱色液。灵敏度为1.0ug蛋白／每条带。3. 凝胶铵银染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的50%乙醇和10%乙酸，振摇30min至过夜； 2) 去除50%乙醇和10%乙酸，用去离子水清洗凝胶。加入20%乙醇, 室温振摇30min； 3) 去除20%乙醇，再加5倍体积的20%乙醇，室温振摇30min； 4) 去除20%乙醇，将凝胶转入通风柜内，加入5倍体积的用去离子水配制的5％戊二醛，室温振摇30min； 5) 去除戊二醛，用去离子水清洗凝胶。加入5倍体积的20%乙醇，室温振摇20min； 6) 去除20%乙醇，重复6两次； 7) 去除20%乙醇，用去离子水清洗凝胶。再加入5倍体积的用去离子水，室温温育１0min； 8) 去除去离子水，加入4倍体积新鲜配制的氨水／银溶液，室温振摇30min。配制100ml：加1.4ml 14.8mol/L氢氧化铵到100ml水中，再加入190ul 10mol/L氢氧化钠；放置涡旋器上缓缓加入１ml新鲜配制的硝酸银溶液(0.8g硝酸银／ml水)，直至出现沉淀物，但很快溶解。 9) 去除氨水／银溶液，用去离子水清洗凝胶20min以上，其间更换水数次； 10) 去除水，加入5倍体积新鲜配制的0.005%柠檬酸，0.019%的甲醛。轻柔混匀，数分钟内条带即显现出。当背景开始变化时，去除显影剂，用用去离子水清洗凝胶。在10%乙酸和20%乙醇中温育凝胶，以终止反应。灵敏度为1－10ng蛋白／每条带。注：操作时，应戴手套并使用洁净的玻璃器皿，以免污染，影响反应的灵敏度。4. 凝胶中性银染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的30%乙醇和10%乙酸，振摇30min至过夜； 2) 去除乙醇/乙酸溶液，加入5倍体积的30%乙醇, 室温振摇30min； 3) 去除乙醇，再加5倍体积的30%乙醇，室温振摇30min； 4) 去除乙醇，加入10倍体积的去离子水，室温振摇10min；重复用去离子水清洗两次； 5) 去除去离子水，加入4倍体积新鲜配制的0.1%硝酸银溶液(用室温下贮存于棕色瓶内的20%原液稀释而得)，室温振摇30min； 6) 去除硝酸银溶液，用去离子水清洗凝胶20s； 7) 去除水，加入5倍体积的2.5%碳酸钠和 0.02%的甲醛(pH4.0),室温振摇温育，数分钟内条带即显现出。当背景开始变黑时，停止温育； 8) 在1％乙酸内清洗，停止反映。用去离子水清洗，更换数次，每次10min 灵敏度为1－10ng蛋白／每条带。5. 凝胶铜染色法凝胶铜染色法为考马斯亮蓝或银染色法的替代染色方法。将凝胶氯化铜溶液中温育，在Tris和SDS同时存在时可形成明显的白色不透明的沉淀物。蛋白条仍然清晰，留下一个多肽分离模式的附染图象。由于蛋白质未结合在凝胶上，可通过EDTA去除Cu离子而得以洗脱，因而该方法特别适合需快速定位蛋白条带用于免疫反应，或进一步进行蛋白质化学研究。其染色模式如同考马斯亮蓝或银染色法的凝胶，易进行拍照。 1) 电泳后，凝胶用蒸馏水短时清洗数次，每次30s,勿洗过长时间； 2) 将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.3mol/L CuCl2； 3) 室温振摇5min，较厚的凝胶可适当延长时间。当CuCl2进入凝胶时，在不含蛋白的区域会出现白色沉淀； 4) 用蒸馏水清洗数分钟，在黑色背景下观察结果。灵敏度为10-100ng蛋白／每条带(0.5mm厚的凝胶)或１ug蛋白／每条带(１mm厚的凝胶)。注：将凝胶在0.25mol/L EDTA、0.25mol/L Tris溶液中温育可使铜染逆转。

常用的微生物染色方法有哪些？一、简单染色不同的细菌，或者由于观察者所侧重观察的内容不同一，所以所使用的染料也有差异，但是简单染色的方法是一样的。先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上菌膜区域，以覆盖菌膜为准。按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤(见图5-2)。zuihou得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。二、芽孢染色法芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌能产生内孢子，这些孢子耐高温、干旱及有毒化学试剂。内孢子还能抵制细菌染色液的进入，在革兰氏染色法涂片染色时，革兰氏阳性菌的芽孢呈现无色。然而，芽孢一旦着色后就很难脱色。虽然芽孢通常可在革兰氏染色片中看到(芽孢由于不易让染料进入多呈现无色),但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，更便于观察。其实验的操作方法与革兰氏染色类似。主要的芽孢染色法有以下两种。(一)孔雀绿染色法(1)将生有芽孢的斜而菌苔按革兰氏染色法涂片后，用饱和孔雀绿水溶液(约为7.6%)染10 min。(2)用自来水冲洗。(3)用0.5%番红液复染30%.(4)水洗，吸干。(5)镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈绿色。(二) 石炭酸复红染色法(1)按常规涂片。(2)滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。(3)涂片冷却后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。(4)彻底水洗。(5)用吕氏美蓝复染2 min -3 min。 (6)水洗、吸干。(7)镜检：镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。具体实验时，在对一些特殊芽孢染色时，需要对染色液和复染液进行修改。三、鞭毛染色鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，直径一般为10nm~20 nm,超出了光学显微镜的观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到鞭毛。通过使用特殊的染色技术，可以将染色液附加到鞭毛的周围，增加它的直径，从而能够在光学显微镜下观察到鞭毛，而且能检测鞭毛在细菌中的分布。尤其是鞭毛染色可用于区分假单胞菌科的一些有两极鞭毛的细菌和肠杆菌科有周身鞭毛的细菌(在运动时)。鞭毛十分细小，很容易从细菌上脱离，所以要得到非常满意的鞭毛染色玻片十分困难。另外，很多染色方法会产生沉淀物，这又使得观察鞭毛十分困难。鞭毛染色一般分为两类：一种是银盐法，使银在鞭毛上堆积；另一种是使用复红沉积在鞭毛上。(一)银盐沉积法(改进的Fontana方法)应使用绝对干净(无油脂)的载玻片进行染色，zuihao是新的无油载玻片。用过的载玻片要在酪酸洗液中浸泡，并用蒸馏水冲洗干净后方可再次使用。细菌在琼脂斜面上，比zuijia生长温度低3℃~5℃的温度下培养，可在斜面上加1滴~2滴灭菌的生理盐水保持湿度。(1)将载玻片在火焰上快速灼烧5s,放在染色架上冷却，用蜡笔分成两个区域(用镊子夹住载玻片的一端)。(2)用移液管或巴斯德移液管移取2mL无菌水加入到幼龄(通常为18 h)、生长活跃的斜面菌株中，慢慢振荡并旋转试管使菌株悬浮。建议尽量避免使用接种环。然后转移到干净的试管中，通过悬滴试验检查菌体的运动性。用无菌水将悬浮液稀释至略有浑浊为止。放入20 ℃ -30 ℃培养箱中培养30 min,然后移取一满环悬浮液加在已冷却的载玻片一端。倾斜载玻片让液滴流到蜡笔画的中心线。在空气中自然干燥，不要加热玻片。(3)用媒染色剂媒染5 min。(4)慢慢用蒸馏水充分漂洗掉所有的媒染液。(5)用热的Fontana银液覆盖，染色5 min,每隔1 min更换1次染色液( Fontana银液在沸水浴中加热)。细菌涂层的每一部分都始终要浸在染色液中，不能裸露。(6)用水冲洗，在空气中晾干，镜检。(二) Leifson替代染色法下述Leifson鞭毛染色法可以代替上述方法的(3) ~(6)。(1)滴加1 ml的Leifson鞭毛染色液，注意不要使染色液干燥，直到玻片上形成细微的铁锈色沉淀(约10 min) 。(2)慢慢地用蒸馏水充分冲洗干净。(3)用1%的亚甲基蓝复染5 min ~10 min。(4)用水洗净，空气中干燥，镜检。没有复染时，细胞和鞭毛都呈现桃红色，复染后，细胞染成蓝色，鞭毛染成红色。实验中需要注意的是鞭毛很容易脱落，若观察时视野中大多为周身鞭毛细胞，说明该菌是周毛菌，但若观察到一个明显的极端鞭毛细胞时，并不一定说明不是周毛菌。注意事项：(1)适宜的培养基、温度和通气条件下，以短期内多次连续接种培养的幼龄菌种鞭毛情况zuihao。因此，用于鞭毛染色的菌种常常用幼龄菌，菌龄老化或某些培养条件变化常导致鞭毛脱落或丧失。(2)玻片应清洁无油污。鞭毛非常纤细且容易脱落，故操作过程动作要轻。(3)染色法的染料须当日配制， 4 h内效果zuihao。所以鞭毛染色液zuihao现用现配。四、荚膜染色荚膜是某些细菌在新陈代谢过程中形成的，分泌于细胞壁外的一层胶状黏液性物质，主要化学成分是多糖类物质。荚膜的折光性低，易溶于水，与染料亲和力低，但荚膜的通透性比较好，某些染料可透过荚膜而使菌体着色。因此染色后在菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即为荚膜。一般采用负染色的方法，使背景与菌体之间形成一透明区，将菌体衬托出来便于观察分辨，故又称衬托法染色。因荚膜薄，且易变形，所以不能用加热法固定。具体操作步骤(见图5-8)。(一)制片加1滴6%葡萄糖水溶液于载玻片一端，无菌操作，挑取细菌斜面上培养72 h左右的胶质芽孢杆菌与其混合。(二)推片法制片加1滴墨汁充分混匀。用推片法制片，将菌液铺成薄层， 自然干燥。(三)固定滴加1滴~2滴无水乙醇覆盖涂片，固定1 min, 自然干燥；也可以不加处理， 自然干燥。注意：不能用火加热干燥。(四)结晶紫染色在已自然晾干的涂面上，滴加1%结晶紫染色液染色。(五)冲洗2 min后，以20%硫酸铜冲洗数次。再用自来水冲洗1次。(六)拭干水分后镜检用擦镜纸拭干水分后镜检。有荚膜的菌菌体呈紫色，背景灰黑色，荚膜不着色呈无色透明圈。无荚膜的菌，由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能出现一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜，荚膜不着色的部分宽。五、死活染色在显微镜下活细胞细胞膜完整、立体感强，细胞质透明度好，颗粒状物质少；死细胞膜破裂，无立体感，细胞通透性差，有颗粒状物质、空泡。染色排除法是生物研究中判断细胞活性的一种常用方法，简便，易于操作，实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。原理：因为活细胞的细胞膜具有选择透过性，细胞不需要的物质通常不进入细胞，染色剂中如台盼蓝能进入死细胞，从而可以使死细胞染色。依此染色便可以判断细胞的活性。活细胞必须要通过控制物质进出细胞膜来保持内部生理环境的稳定性。细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。常见的细胞染料有：中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双乙酸酯等。台盼蓝染料正常情况下被活细胞拦在细胞膜外，只有细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞，从而与解体的DNA结合，使其着色，因此，活细胞一般不被台盼蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。通过显微镜观察很容易识别出死亡的染色细胞，并可用细胞计数板进行计数。用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别。美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。活的酵母因为新陈代谢不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞不染色。因此，用美蓝对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，蓝色的为死细胞。需要注意的是：一个活细胞的还原能力是有限的，必须严格控制染色的时间和染料的浓度。方法：取0.1%美蓝液一滴，滴在玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混匀。染色3 min ~5 min后，加盖片制成水浸标本片，即可镜检，这种方法也适用于细菌和霉菌。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

流式免疫荧光技术简介流式免疫荧光技术，又称悬浮阵列、液相芯片等，是美国Luminex公司于上世纪末开发的新一代高通量发光检测技术。该技术有机整合了荧光编码微球、激光分析、流式液流系统及高速数据处理等多项最新科技，可以在临床诊断及生命科学研究领域得到广泛应用。它是最早被FDA认证的临床应用型高通量诊断技术，并于2005年被Frost&Sullivan授予“临床诊断技术革新大奖”。与化学发光等传统免疫技术相比，它最大的优势是可以在一个试管中实现几个、几十个甚至上百个项目的同时检测。流式免疫荧光技术的低谷在21世纪初，当Luminex推出具有专利保护的磁性荧光编码微球和Luminex 200分析仪的高通量检测整体解决方案时被众多专业人士广泛看好，相对于化学发光的技术，其优势可谓“风光无限”。然而，在接下来临床免疫领域迅速发展的20年中，以Luminex为代表的高通量检测技术产品被化学发光产品远远甩在身后，令人扼腕叹息。在与传统的化学发光技术的竞争中无法充分发挥其多联检的优势，一个很重要的原因就是Luminex垄断了磁性编码微球技术，但没能为高通量流式荧光免疫检测推出一个全自动化检测平台，无法提供一个类似化学发光分析仪的自动化解决方案，也因此没有跟上临床医学实验室自动化发展的前进步伐。全自动流式荧光免疫分析仪的尝试2010年后，国内外有多个生产商曾推出几款全自动荧光免疫分析仪，如美国Bio-Rad公司的Bioplex 2200，国内上海透景公司的TESMI。但由于没有掌握流式免疫荧光中的光学检测和编码微球等核心技术，在购买Luminex 磁性编码微球开发相关试剂的同时，往往还需要购买Luminex的专有仪器或光学检测模块，不仅导致仪器、试剂的成本和价格居高不下，而且也限制了配套试剂使用的平台，在与化学发光的竞争中始终处于不利地位。唯公科技的技术发展之路“关键核心技术是要不来、买不来的，不能被别人卡脖子！”实践反复告诉我们，关键核心技术是要不来、买不来的，没有核心技术就会被别人卡脖子！图 1 唯公科技开发的EasyPlex 2200流式荧光发光免疫分析仪唯公科技经过多年的技术攻关，在取得多重磁性荧光编码微球技术重大突破后，再次打赢核心技术攻坚战，其依靠扎实强大的研发功底，设计开发出中国第一台基于自主磁性编码微球的全自动流式荧光发光免疫分析仪（EasyPlex 2200），并在近期获得了药监部门颁发的医疗器械II类注册证，批准上市销售！图 2 唯公科技开发的EasyMagPlex有磁荧光编码微球唯公科技在2017年成立之初，就把“掌握核心科技，展现中国创新实力”作为自己发展的基础和目标，把创新主动权、发展主动权牢牢掌握在自己手中，以全自动流式荧光技术中最核心的多色荧光检测、有磁荧光编码微球、自动样本前处理等作为突破点，进行重点攻坚，并取得一系列的突破，其中包括：2019年——突破了有磁荧光编码微球核心技术，展示了具有开发多维磁性编码微球的能力，实现了12重编码微球（EasyMagPlex）的量产，而且编码微球兼容主流的流式细胞分析仪。随后陆续推出了6、7、12联检细胞因子检测试剂以及多联检肿瘤标志物检测试剂；2019年——突破了多色荧光检测技术，并陆续推出了一系列多光多色色的EasyCellTM流式细胞仪，实现了多重细胞因子联检自动分析；2020年——进一步提升其磁性编码微球的能力，达到108重编码。开始30重编码微球的量产和50重编码微球的试产，为合作伙伴提供了更多联检的可能，后续又完成了具有自动分析能力的多重编码微球分析软件（WellCKAS）的II类注册证；2021年——突破了全自动样本前处理技术，并陆续推出了EasySamplerTM和EasySampler CTM全自动流式样本制备系统，实现了基于磁性编码微球的多重联检试剂制备自动化；2022年——完成了可自动分析的50重磁性编码微球，满足了多重自身免疫抗体、过敏原等多重检测的需求；2022年——整合多色荧光检测、磁性荧光编码微球和全自动样本制备技术，推出了国内第一台完全基于自身技术的全自动流式荧光发光免疫分析仪（EasyPlex2200），实现了“样本进，结果出”的全程自动化。未来，唯公科技将在全自动流式荧光发光免疫分析仪的设计和开发上不断推陈出新，以EasyPlex 2200为基础，继续打造通用、开放的全自动流式荧光发光免疫检测平台，推出细胞因子、肿瘤标志物、自身免疫抗体等多联检试剂，并以开放的心态，积极与国际、国内合作伙伴在全自动检测设备、磁性荧光编码微球和更多的多重联检试剂开发等方面展开全方位合作，共同开拓全球的高通量流式荧光发光免疫检测市场。

免疫组化简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应 和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。免疫组化基本原理免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。 免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。那么，显色常用的酶为辣根过氧化物酶（HRP），常用的显色底物为DAB（3,3’-二氨基联苯胺），偶尔用AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。碱性磷酸酶（AP或AKP）也是目前免疫诊断试剂最常用的标记酶之一，稳定性好、灵敏度高。表1. 免疫组化（IHC）显色系统的选择免疫组化注意事项1. 组织取材为避免蛋白丢失及组织受损引起的非特异试剂吸附，取材须快速（组织块也不宜太大）且要尽量避免人为损伤。2. 固定固定要及时、彻底，但也不能固定过久。实验证明甲醛固定时间越久的组织越容易出现自发荧光及非特异性染色。一般以 12~36 小时最好。3. 石蜡片与冰冻片的选择石蜡片制作对设备要求较冰冻片低，组织结构更好，保存条件简单时间也久。但对部分蛋白有较强烈的破坏作用，对蛋白保护较冰冻片差。冰冻片对蛋白的保护较石蜡片好，制作起来也较快。4. 灭活过氧化物酶（HRP）系统的一定要做内源性过氧化物酶的灭活，而对于碱性磷酸酶（AP）系统和免疫荧光这个步骤不需要做。5. 抗原修复不同的样本、不同的蛋白其最佳的抗原修复方式会有所区别，热修复（酸性修复液（柠檬酸盐修复液）、碱性修复液（EDTA 修复液）及酶修复（蛋白酶）都可做尝试。对于陈旧的样本要增加修复强度，比如延长修复时间。6. 封闭常用的封闭液有 5% BSA 和血清。BSA 是通用型的封闭液。血清应选择与二抗同源的血清。7. 抗体孵育一抗一定要与实验及样本匹配的，孵育条件以 4 ℃ 过夜最佳。二抗应匹配一抗，37 ℃ 孵育半小时即可。8. 显色DAB 显色建议在镜下控制反应时间，在阳性及背景之间选择平衡点。免疫组化常见问题分析1.脱片产生的原因有哪些 1、烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度； 2、多聚赖氨酸玻片质量的问题。 3、组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。 4、修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。 5、操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。 6.组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。2.边缘效应1、组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，每次清洗不易将组织下面试剂洗尽所致. 解决办法：制备优质的胶片（APES或多聚赖氨酸），切出尽量薄的组织切片，不厚于4微米，组织的前期处理应规范，尽量避免选用坏死较多的组织；2、切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。解决办法：试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘2mm。用组化笔画圈时，为了避免油剂的影响，画圈应距组织边缘3-4mm。3.切片染色后背景太深，如何区分特异性sing与非特异性着色全片着色是指整个切片全都染上了颜色，着色的强度可深可浅，总之，分不清那些组织是阳性那些组织是阴性。出现这种现象的原因有：（1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。（3）DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。（4）组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。（5）切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在4º C冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。（6）一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。4.免疫组化染色呈阴性结果1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误；2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是最佳的时间和次数。若不行，还可高压修复；3、组织切片本身这种抗原含量低；4、血清封闭时间过长；5、DAB孵育时间过短；6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应；7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。5.背景1、考虑一抗浓度高；2、然后调整DAB孵育时间；3、也要考虑血清封闭时间是否过短；4、适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

继4月底重庆查获上万斤染色毒花椒以后，北京也发现有类似的染色花椒出售。染色花椒用水浸泡后会迅速褪色，而清水则会变成红色。这种染色花椒大多都是被一种有毒致癌物质&ldquo 罗丹明B&rdquo 进行染色、提亮后，进入市场，通过食物进入人体，对人体健康造成极大的威胁。 罗丹明B(Rhodamine B)又称玫瑰红B,或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。经老鼠试验发现，罗丹明B会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。罗丹明B的分子式 2010年，中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局共同起草并发布了SN/T 2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》，此标准适用于腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、辣椒粉、辣椒油、糖果、话梅、葱头及饼干中罗丹明Ｂ 的测定和确证。用乙酸乙酯/环己烷提取试样中的罗丹明Ｂ，经凝胶色谱净化系统净化，用液相色谱-荧光检测器或液相色谱-质谱／质谱仪测定和确证，外标峰面积法定量。其中样品的前处理部分使用了美国J2的凝胶渗透色谱仪，使样品得到了很好的净化，为精确检测罗丹明B提供了有效的保障。 如需更多相关信息，请进入polytech.instrument.com.cn, 或拨打400-690-8820进行咨询。

4月11日，在第89届中国国际医疗器械博览会（CMEF）上，华大智造重磅推出MGISEQ-2000RS FluoXpert多组学分析仪。这是中国首款具有自主知识产权、集成了病理染拍功能和测序功能的基因测序仪，一台能够做病理组织切片空间蛋白组学的测序仪，该设备将帮助用户解锁测序仪全新功能，更高效、更低成本地拥抱多组学浪潮。MGISEQ-2000RS FluoXpert将为用户提供在“测序模式”及“免疫荧光染色模式”两种模式中轻松切换的愉悦体验。针对不同批次的样本，用户可以在同一套设备平台上分别获得不同维度的研究所需的工具支撑；针对同一批次的样本，用户既可以根据基因测序获得初筛后的大量靶标数据，进行蛋白层面的检测和空间位置分析；又可以通过蛋白水平的分析结果，自行判断是否需要展开进一步的基因水平的研究。MGISEQ-2000RS FluoXpertDNBSEQ测序原理：当前，MGISEQ-2000系列测序仪主要应用领域多达20个以上，包括了WGS、空间组学、单细胞测序、肿瘤检测、病原快检、分子育种、肠道微生物等不同应用场景。它获得了90多个国家和地区的准入资质，在业界享有广泛赞誉，用户众多。截至目前，MGISEQ-2000已支持用户发表文章数量累计超过2500篇，10分以上文章超过200篇，总影响因子10,000+。MGISEQ-2000RS FluoXpert的双载片平台MGISEQ-2000RS FluoXpert具备哪些优势特点从技术角度来说，全自动染拍一体的设计，极大地提高了操作效率；高效染色的生化试剂，进一步降低检测抗体用量；温和的洗脱过程使组织在经历多轮染色后仍可保留完整；先进的图像拼接算法，实现全片的无痕拼接。对于用户而言，MGISEQ-2000RS FluoXpert具备极高的易用性和灵活性。它采用了智能化的操作系统和友好的用户界面，研究人员能够轻松上手并快速完成实验操作。基于染拍一体化、系统化和模块化的设计理念，MGISEQ-2000RS FluoXpert通过操作软件实现对荧光成像技术和高分辨率扫描系统的模块化控制整合，从而实现对组织或细胞中蛋白质的高通量、高灵敏度检测。同时，它还具有极高的空间分辨率和定位精度，能够准确描绘出蛋白质在组织或细胞中的分布和变化。这样，研究人员能够更加深入地了解蛋白质在疾病发生和发展过程中的作用机制，为疾病研究提供更加精准的依据。FluoXpert可支持多种样本类型，能够满足不同研究项目的需求，兼容现有病理切片预处理流程，无需特殊样本预处理，手动操作步骤大幅减少，真正实现“样本进、图片出”的便捷体验。此外，该多组学分析的多重免疫荧光试剂盒为半开放式，兼容市售抗体，用户可根据项目需求自由组合抗体Panel即可开展蛋白组学分析；同时我们也支持定制化项目，充分满足不同研究领域的特殊需求。在数据结果产出上，MGISEQ-2000RS FluoXpert稳定可靠，其检测结果可对标金标准IHC染色结果，为科研工作者提供值得信赖的数据支持。多领域应用：加速推进精准医学发展MGISEQ-2000RS FluoXpert在基因组学领域以其卓越的性能和广泛的应用场景被冠以“全能王”称号。与常规的蛋白染拍一体机相比，MGISEQ-2000RS FluoXpert测序数据可以为染拍结果提供一步到位的分子检测数据作为补充或参考；与常规的基因测序仪相比，其测序性能优越，支持多种测序读长，通量灵活（55Gb-1440Gb），支持不同规格的测序载片独立运行，能全面满足广泛的测序需求，是国内外测序实验室的首选机型之一。通过对蛋白组学的拓展，MGISEQ-2000RS FluoXpert实现了基于同一套设备即可同时获得蛋白组学分析结果和基因测序下机数据，无需额外购买或操作多套不同设备，无需外送/等待时间，也无需复杂的样本前处理，支持全流程自动化。在肿瘤研究领域，多重免疫荧光能够与基因测序配合为疾病进行更精准地进行肿瘤分型、预后评估，为转化医学和肿瘤微环境研究提供有力支持。同时，MGISEQ-2000RS FluoXpert还能在病理研究中对切片进行高效、准确的分析，为病理学家提供更为详尽的细胞结构和组织信息。在药物发现和病人分组方面，FluoXpert同样能够发挥重要的工具支撑作用。它能够高效赋能研究人员揭示疾病的发病机制，为药物研发提供关键线索，并为病人实验分组提供科学依据，助力精准药物研发。此外，与传统免疫荧光组化相比，FluoXpert在临床研究方面也将具有一定优势。通过自动化、标准化的检测流程，它能够快速、准确地提供疾病相关的辅助信息，节约珍稀样本，为精准医学提供参考。MGISEQ-2000RS FluoXpert的推出，是华大智造在测序仪领域纵深布局的体现，在引领测序与免疫荧光技术的双重革新的同时，展现了模块化研发和多元化产品组合的无限可能。

“采用深山老竹、不易变形”，“选用上等竹青丝，精密编织，厚实紧密”，“绝对不染色，天然环保”……不管是淘宝还是京东，几乎每个商家都号称自家竹席安全又好用。　　　不合格的竹席，问题主要是甲醛释放量超标，另外还有浸渍剥离、染色牢度等问题。抽检的87批次样品中有25批次甲醛释放量不合格，单项指标不合格率达28.7%。其中省内产品有21批次不合格，单项指标不合格率27.3% 省外产品有4批次不合格，单项指标不合格率40.0%。　　如果你正准备买竹席，标准集团（香港）的工程师给出以下这几个小窍门也许用得上。　　浙江省林产品质检站副站长方崇荣告诉记者，一般竹青席较为凉爽、耐用、柔韧性好 竹黄席表面会粗糙些，竹条有轻微凹凸不平感 炭化席色泽呈暗红，抗霉性会好一些 染色席大多使用工业染料，长期接触使用可能引发皮肤病。　　“你可带一把小刀，与竹席表层呈45度角轻轻刮去一层，如果新鲜材面和表层颜色不一致，说明是染色的，建议谨慎购买。”方崇荣说，“尽量选择本色竹席，或经碳化的竹席。”　　有些看似本色的竹席，为获得均匀的色泽，也可能进行染色处理。还有一种鉴别方法，就是用65%左右的酒精湿棉球擦拭竹席表面，看看是否褪色。 若要获得更专业的测试仪器和方法，可以来电咨询标准集团（香港） 座机：021-64208466 手机：13671843966。

TissueGnostics公司推出的10+1肿瘤免疫微环境多色解决方案，在类流式分析方法的基础上，构建了整套肿瘤免疫微环境大数据深度挖掘体系，拥有1.成熟的多标记染色试剂盒体系 2.大尺寸高倍率全自动连续光谱全景成像 3.可原位追溯的大数据AI深度空间量化分析功能。一体化解决方案优势在于简化了数据的流转环节，允许应用定制APP，全自动的无人值守大大提高了组织原位数据分析操作的效率。a) 基于全新一代TSA染色技术同时标记10种生物标志物后，使用TissueFAXS Spectra系统进行连续全光谱高倍率成像，构建全景（多光谱）虚拟切片。b) Tissue Cytometry技术，能够获取10色独立的真实染色标志物数据，还可以去除背景自发荧光或血细胞/胶原等自发荧光，实现10+1色的独立通道采集。c) 免疫微环境信号量化分析，可提供多种自动化解决方案APP，实现AI大数据深度空间量化分析功能。（APP包括但不限于：核酸分子/亚细胞结构/细胞/组织等目标中的形态学识别、 强度量化统计分析、结构/空间分布关系分析），以及正反向回溯数据（双向）校验机制，对大数据分析结果进行校验。d) 针对创新研发型的肿瘤微环境量化分析需求，可选配量化分析软件StrataQuest，不但可以同时实现所有APP功能，还可以针对稀有样本进行数据获取，其可追溯校验的数据分析模式也获得NCS等期刊的一致认可。

有机体从单个细胞开始，经过数百万代的分裂，最终生成骨骼、心脏、大脑和其他组成生物的成分。在这个复杂的过程中，DNA的转移是通过染色体这种离散包来进行的。在细胞分裂的每一代中，所有染色体的复制和精确分布是至关重要的。如果遗传的染色体成分发生改变，即使是轻微的改变，也可能导致出生缺陷和某些癌症。博士后学者Pablo Lara Gonzalez，生物科学部教授Arshad Desai和他们的同事在《Science》杂志上发表了一项新的研究，研究了每次细胞分裂时染色体如何正确遗传的奥秘。Lara Gonzalez和Desai使用了一种新的探针来监测这一过程的一个关键方面，他们详细研究了“等待”信号背后的机制，以确保细胞分裂不会过早启动。研究人员将他们的研究集中在 “纺锤体检查点”上，这是一种质量控制机制，可以确保细胞分裂过程中染色体的准确遗传。纺锤体检查点通路在染色体上的一个叫做着丝粒的位置被激活，着丝粒是一个机械界面，蛋白质纤维在这个界面上耦合，将染色体拉开。细胞与发育生物学（生物科学）和细胞与分子医学系（医学院）教授Desai说：“当着丝粒没有附着在这些蛋白质纤维上时，它们会发出‘等待’信号，使细胞停止有丝分裂（细胞分裂），从而为附着物的形成提供时间。”通过这种方式，细胞确保所有染色体正确连接，并准备在细胞分裂前被拉开，从而不留下任何染色体。在这篇论文中，研究人员描述了等待检查点信号是如何在未连接染色体的着丝粒上产生的。巧合的是，他们研制出了一种荧光探针，使他们第一次能够观察到活细胞着丝粒中等待信号产生的关键分子事件。Lara Gonzalez说：“这项研究发现了一个关键的‘媒人’分子，它将等待信号的两个成分结合在一起，而这两个成分不喜欢单独联系在一起。这些发现有助于解释为什么‘等待’检查点信号选择性地产生于动粒而不是细胞的其他部位。”研究人员说，这一发现为在某些疾病状态（如癌症）下如何降低染色体遗传的准确性提供了一个框架。

常见的自身免疫性皮肤疾病具有区域性发病的特征。例如，超过80%的白癜风病人发病部位呈双侧对称分布，这种类型被称为非节段型白癜风（图1）【1,2】。在白癜风中，自体活化的CD8+ T细胞攻击黑色素细胞，导致皮肤出现白斑。全世界有0.5%到2%的人患有此病，但目前还没有获FDA批准的治疗方案。既往的研究表明， IFN-γ信号对CD8+ T细胞导致的皮肤脱色至关重要【3-6】；然而，介导IFN-γ功能的细胞类型尚不清楚。另外，针对白癜风区域性发病的假说包括微生物群分布的区域差异、黑色素细胞抗原的表达差异、以及神经末梢释放的神经肽的差异等【7-10】。阐明自身免疫病的发病特征的调节机制可以帮助开发有效的治疗方案。图1 白癜风病人呈现双侧对称发病的特征2021年12月16日，北京生命科学研究所/清华大学生物医学交叉研究院的陈婷研究员团队在Nature杂志上发表了题为 Anatomically distinct fibroblast subsets determine skin autoimmune patterns的研究论文，通过单细胞转录组测序、小鼠模型和一系列遗传学实验方法，揭示了皮肤成纤维细胞在白癜风疾病中的重要作用：成纤维细胞是唯一必需的能招募和激活自体活性CD8+ T细胞的皮肤细胞；不同部位成纤维细胞对IFN-γ的响应能力决定其招募CD8+ T细胞的能力，并决定白癜风的发病位置偏好。为了从细胞层面研究白癜风对称性分布的特征，作者首先对白癜风病人皮肤样本进行免疫荧光染色，发现CD8+ T大量聚集在皮损与非皮损区域交界处。根据这种CD8+ T细胞的分布模式，可以推测白癜风疾病发生过程中存在一种募集机制，在皮损交界处协调招募CD8+T细胞，使CD8+T细胞一直处在病变皮肤前沿，驱动脱色区域逐步扩大。通过单细胞转录组测序，作者发现白癜风病人皮肤中杀伤性CD8+ T细胞的比例比正常人高，且表达更高水平的IFNG。GO分析表明，病人黑色素细胞、成纤维细胞的特异性基因在IFN-γ信号通路上富集。对IFN-γ下游pSTAT1信号的免疫荧光染色发现，白癜风病人皮肤中超过80%的pSTAT1+细胞是成纤维细胞，以上结果说明成纤维细胞是白癜风病人中最主要的响应IFN-γ信号的细胞类型。为了进一步研究白癜风进展的调节机制，作者建立了一种白癜风小鼠模型。经过皮肤接种B16F10细胞和腹腔注射anti-CD4抗体，C57小鼠出现和白癜风病人类似的表征，包括表皮脱色、CD8+ T细胞聚集浸润和黑色素细胞丢失。研究发现，IFN-γ信号受体敲除的转基因小鼠 (Ifngr1 KO) 在经过相同的处理后，CD8+ T细胞的浸润较WT小鼠显著减少，表皮也未出现黑色素细胞缺失。这一结果说明，响应IFN-γ信号的细胞对于白癜风的发生和进展至关重要。那么，到底哪种细胞类型才是起到决定性作用的呢？其又是如何发挥功能的？陈婷团队接下来用多种实验手段证明，在白癜风疾病中，成纤维细胞通过CXCL9和CXCL10调控CD8+ T细胞的招募（图2）。首先，作者利用Cre-loxP系统分别在6种细胞类型中进行特异性地敲除Ifngr1。结果发现，成纤维细胞特异性敲除IFNGR1后，有效阻止白癜风发生。小鼠表皮浸润的CD8+ T细胞数目明显减少，且不影响黑色素细胞数目，也没有造成表皮脱色的现象；而其他条件性敲除小鼠均出现了白癜风表型。随后，作者通过成纤维细胞移植实验发现，在一个完全没有IFN-γ响应的皮肤局部环境中，只给予外来的能响应IFN-γ的成纤维细胞就足以介导局部CD8+ T细胞的招募和聚集。第三，Transwell实验发现成纤维细胞通过分泌因子招募激活的CD8+ T细胞。而与正常的成纤维细胞相比，趋化因子CXCL9，CXCL10 在白癜风病人和白癜风模型小鼠成纤维细胞中均有较高的上调。于是，研究人员在WT小鼠中利用慢病毒在真皮成纤维细胞中敲低Cxcl9或Cxcl10基因，发现敲低了趋化因子的成纤维细胞失去了对CD8+ T细胞的招募的能力。图2 成纤维细胞通过CXCL9/10调控杀伤性CD8+ T细胞的招募成纤维细胞存在部位异质性【11】，小鼠不同部位的成纤维细胞通过Hoxc基因调节Wnt信号通路调控了毛囊的再生【12】。但不同部位的成纤维细胞在调控免疫反应方面尚未有人研究。研究人员通过对2265例非节段型白癜风病人的分析发现，白癜风在不同部位的发病频率存在很大差异，其中手背、胸部发病率最高，而手掌和上肢发病率最低。同时，不同部位的成纤维细胞在IFN-γ处理后的表达谱变化也不尽相同，手背、胸部和背部的CXCL9、CXCL10上调倍数更高。进一步的相关性分析也说明发病率高的部位的成纤维细胞响应IFN-γ的程度也更高。此外，研究人员在白癜风小鼠模型中也发现了这一相关性。白癜风模型诱导后，小鼠背部和腹部毛囊中的黑色素细胞完全丢失，但爪背、掌心部位的黑色素细胞并未受到影响。且小鼠背部和腹部成纤维细胞在IFN-γ处理以后的Cxcl9、Cxcl10表达水平要比爪背、掌心高。于是，作者将来自WT小鼠背部和爪背的成纤维细胞移植到Ifngr1 KO小鼠上，结果发现，来自WT小鼠背部的成纤维细胞对CD8+ T细胞的招募能力更强。这些实验说明，不同部位成纤维细胞对IFN-γ的响应能力决定其招募CD8+ T细胞的能力，并决定白癜风的发病位置偏好（图3）。图3 成纤维细胞通过CXCL9/10调控杀伤性CD8+ T的招募综上所述，该研究首次发现成纤维细胞对皮肤自身免疫病的发生至关重要；同时对自身免疫疾病发生的调控存在区域差异性，不同部位的成纤维细胞因响应IFN-γ的程度不同，而导致了对T细胞招募能力的不同。成纤维细胞不仅仅存在于皮肤中，几乎所有的器官都有成纤维细胞的存在，该研究亦为其他器官自身免疫病的发生机制有所借鉴。北京生命科学研究所/清华大学生物医学交叉研究院陈婷研究员和北京医院常建民教授为该论文的共同通讯作者。北京生命科学研究所的徐子健和陈道明为共同第一作者。该论文的其他作者还包括首都师范大学的胡煜成副研究员，北京生命科学研究所的姜开菊、黄焕伟、杜营雪、吴文波、隋建华研究员，北京大学第三医院的王文慧医生、张龙医生，西京医院的李舒丽医生、李春英教授，中国医学科学院皮肤病研究所杨勇教授。原文链接：https://www.nature.com/articles/s41586-021-04221-8

【招商赞助中】iCCA2023 第六届细胞分析网络会议 日程公布！(点击查看） 加速免疫肿瘤学研究，Discovery与Akoya达成合作生物技术公司Discovery Life Sciences, Inc.宣布正式成为Akoya Biosciences公司的全球服务供应商之一。该资格认证过程评估了Discovery在染色、成像和分析方面的能力，使该公司能够为研究人员提供全面的空间成像服务，涵盖发现、转化和临床研究。通过这项资格认证，Discovery获得了使用Akoya的PhenoImager® HT工作流程的机会，该工作流程可以提供对肿瘤微环境（TME）的洞察力，其细节和细胞共表达的空间背景在细胞类型之间达到前所未有的水平。点击进入Akoya Biosciences在线展位"成为Akoya的全球服务提供商是Discovery的一个重要里程碑，"Discovery全球组织生物标志物服务负责人Christiaan Neeleman表示， "我们很高兴利用这项技术为我们的生物制药客户提供对肿瘤微环境的更佳洞察。 借助Akoya可靠的多重技术，我们可以对单个组织切片进行更快、更高质量的分析，帮助我们更好地了解复杂的疾病机制，从而让我们的客户能够开发更有效的治疗方法。"部分产品展示：Akoya PhenoCycler-Fusion单细胞原位空间组学分析平台（点击查看更多）产品特点：PhenoCycler™-FusionPhenoCycler-Fusion提供集合了自动化、超多重生物标志物检测和高速成像的优势，提供端到端、高集成的空间生物学检测方案。该工作流程以前所未有的速度获取百万个细胞、超多重标志物的空间信息，实现空间多组学无偏差研究，开启空间生物学2.0序幕。 快速 – 10分钟描绘记录100万细胞原位信息 客观 – 实现全组织图像无偏差记录 超高参数 – 单个样本同时检测100种以上蛋白标志物 高通量 – 单周可以实现5-100张以上样本拍摄 高精度 – 实现真正单细胞水平像素，可达0.25 um/像素 多组学- 同时支持蛋白和RNA组织原位检测。Akoya PhenoImager Fusion 多光谱多色荧光定量成像仪（点击查看更多）产品特点：Akoya Biosciences PhenoImager™ Fusion是一款为细胞微环境的定量空间分析所设计、新型超快速成像仪。PhenoImager Fusion集合了快速全片成像和多重免疫荧光检测蛋白或核酸的功能，能够在完整的组织切片中定位生物标志物的表达，以及区分数十种细胞类型和它们的相互作用。当与PhenoCycler™集成时，PhenoImager Fusion能够支持超过100个生物标志物发现的工作流程。Akoya PhenoImager HT 全自动定量病理成像仪（点击查看更多）产品特点：Akoya Biosciences PhenoImager™ HT 是新一代的全组织切片多色荧光定量分析仪，创新性的将光谱成像和切片全景扫描功能完美融合，实现革新性的技术跨越。• 兼顾明场/ 荧光两种成像模式• 光谱拆分技术有效识别多重信号（多达9色荧光）• 高速自动化全组织片扫描成像（10X—40X）荧光：仅需6分钟完成整张组织切片7色荧光扫描• 高敏对焦技术，提升扫描稳定性• 荧光脉冲激发，减少荧光淬灭！！招商中！！【精彩会议Webinar】第六届细胞分析网络会议，全日程公布重磅来袭！全日程公布：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023.html围绕4大主题：【1】类器官与器官芯片【2】单细胞分析技术：微流控、质谱、测序、转录组【3】细胞治疗产品的CMC质量控制分析【4】细胞成像分析技术8月30日精彩等你：https://insevent.instrument.com.cn/t/uus（主办单位：仪器信息网，赞助联系13683372576）

GS-Smart小型自动凝胶染色摇床在考马斯亮蓝染色实验中的应用 考马斯亮蓝染色法（CBB染色法）是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法，它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一，而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作，因而得到了广泛应用。考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤，分别是染色和脱色。通常，为了让蛋白凝胶能够充分的染色和脱色，一般会先后将CBB染色液、脱色液加入持续摇摆的脱色摇床工作池，再置入凝胶使其充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。普通的脱色摇床除了工作池的摆动频率可以调节外，并没有其他参数可以设置，进液、换液和排液等步骤都必须由实验人员手动完成。而且启动后，由于工作池一般是持续不停的摆动，因而染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。所以，普通考马斯亮蓝染色脱色实验一般都需要有实验人员值守。此外，为固定蛋白质和维持CBB在染色前的酸性环境，同时也为了去除前期电泳残留物质对染色的干扰，通常配置的CBB染色液或脱色液中有时会加入具有神经毒性的甲醇和强刺激性的乙酸，且配好的CBB染色液一般总体呈棕黑色（CBB R-250）。而普通脱色摇床的工作池完全敞开暴露，所以摆动过程中有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床（又名自动凝胶染色仪）可以很好地解决以上普通考马斯亮蓝染色脱色实验所面临的问题，同时也能带来更多便利。首先，她的智能编程功能可以实现进液、换液、出液、定时摇动、废液回收的自动运行，全过程无需人员值守，从而真正全自动完成CBB染色脱色实验。其次，她配备了可封闭的染色池，能有效防止CBB染色液、脱色液溅出溢出，阻隔挥发物质，从而大大降低污染风险，保护实验人员的健康。染色池还有多款尺寸可选，甚至可以定制，从而尽可能多地满足不同科研工作者对考马斯亮蓝染色脱色实验的不同需求。第三，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床操作起来也十分简单方便，只需&ldquo 加入溶液、置入凝胶、设置管路程序、点击运行&rdquo 四个简单的步骤，便可轻松搞定考马斯亮蓝染色、脱色的全过程，省时省力省心。另外，再值得一提的是，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床还拥有国际外首创的机身与储液瓶一体化设计，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。总体来看，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床一款专为自动凝胶染色量身打造的仪器，非常适合考马斯亮蓝染色脱色实验。由她替代传统脱色摇床，势必掀起CBB染色脱色自动化的革命浪潮，将为广大科研工作者带来满意的实验结果和便捷愉悦的实验体验。 本文关键词：染色摇床,自动凝胶染色摇床,考马斯亮蓝染色,CBB染色

近日，中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所马英新课题组在国际学术期刊 Sensors and Actuators B: Chemical 上发表了题为：Construction of ratiometric Si-Mn:ZnSe nanoparticles for the immunoassay of SARS-CoV-2 spike protein 的研究论文。 该研究开发了一种比率型荧光探针（Si-Mn:ZnSe NPs），通过结合酶联免疫反应（ELISA）模型，建立了一种新冠病毒（SARS-CoV-2）刺突蛋白（S蛋白）的免疫荧光检测方法。 以SARS-CoV-2假病毒和VSV-G假病毒作为实际样本考察该方法的传感性能，结果显示该方法对SARS-CoV-2假病毒响应特异性良好，具有与商品化试剂盒相当的检测灵敏度，为诊断SARS-CoV-2感染提供了一种可靠的潜在思路。 S蛋白是新冠病毒侵染过程中的关键成分，具有识别目标细胞和促进膜融合的作用。因此，快速检测S蛋白对新冠疫情的防控至关重要。 目前，新冠感染早期诊断的主流方法有三种，包括分子检测（检测病毒RNA）、抗体检测（检测IgG和IgM抗体）和抗原检测（检测病毒蛋白）。相比其他两种方法，抗原检测特异性好且反应时间短，在大批量SARS-CoV-2阳性筛查中，已得到广泛应用。当下市场上的抗原自测试剂盒多数依托胶体金免疫测流层析技术，灵敏度低限制了其应用场景。 量子点（QDs）具有吸收光谱宽、斯托克斯位移大、荧光强度高和生物毒性低的优势，是一类理想的荧光探针，在生化分析领域得到广泛应用。据研究，荧光法的灵敏度是比色法的10~100倍，荧光免疫分析有望提升病毒抗原检测的灵敏度。本研究构建的比率荧光法采用Si-Mn:ZnSe NPs双发射探针，相当于在检测系统中添加了一项内标校准，解决了单发射探针强度受环境变化、探针浓度变化和仪器波动的影响较大的局限性，具有灵敏度高、稳定性好的优点。图2：（A）Si-Mn:ZnSe NPs探针构建；（B）比率荧光ELISA法检测SARS-CoV-2 S蛋白原理。通过形成固定化CAT的免疫复合物，可将检测S蛋白含量转化为检测体系内H2O2含量。 根据上述原理图，该团队通过Si dots和Mn:ZnSe QDs的自组装作用制备了Si-Mn:ZnSe NPs探针。首先考察了Si-Mn:ZnSe NPs的荧光强度对H2O2浓度的响应。随着H2O2浓度从0μmol/L增加到50μmol/L, Si-Mn:ZnSe NPs在610nm处的荧光被明显猝灭，而440nm处的荧光没有明显变化。这证明通过比率荧光的方法检测体系中的H2O2浓度是可行的（图3）。过氧化氢酶（CAT）可以催化H2O2分解，因此，CAT介导的ELISA可以用于S蛋白的免疫分析。图3：Si-Mn:ZnSe NPs对H2O2响应的荧光光谱 在最优反应条件下，S蛋白浓度与Si-Mn:ZnSe NPs的荧光强度比呈线性关系。如图4A和4B所示，随着S蛋白浓度从0.05ng/mL增加到300ng/mL, Si-Mn:ZnSe NPs在610nm处的荧光发射强度逐渐增强。如图4C所示，lg（S）与荧光信号比（F610/F440）在0.05~10ng/mL范围内呈良好线性关系（y = 0.2318x + 0.3378, R2 = 0.9904）。图4D显示，S蛋白浓度与荧光信号比（F610/F440）在5~50ng/mL范围内呈良好线性关系（y = 0.0116x + 0.4479, R2 = 0.9987）。本方法对S蛋白检出限为0.032ng/mL。图4：不同浓度SARS-CoV-2 S蛋白存在下Si-Mn:ZnSe NPs的荧光光谱（A）与信号比（B）；SARS-CoV-2 S蛋白浓度与荧光信号比的线性拟合（C-D） 前期工作中，该团队将SARS-CoV-2 S蛋白整合到HIV假病毒合成系统中，构建SARS-CoV-2 S蛋白假病毒（ACS Appl. Mater. Interfaces, 2021, 13, 21, 24477-24486.）。 本研究以上述SARS-CoV-2 S蛋白假病毒作为实际样本模型考察了本方法的准确性与重现性，并与商品化试剂盒检测结果进行对比（图5）。结果显示，所建比率荧光ELISA法测定的S蛋白浓度与商品化试剂盒相似，表明该方法具有较高准确性。构建VSV-G假病毒作为阴性对照，采用比率荧光ELISA法检测SARS-CoV-2假病毒和VSV-G假病毒中的S蛋白，结果如图6所示，10组SARS-CoV-2假病毒均有检出，而10组VSV-G假病毒均无检出，表明该方法对SARS-CoV-2 S蛋白检测具有较高的特异性。图5：商品化试剂盒和本方法测定SARS-CoV-2假病毒S蛋白的结果。n.s.表示不显著，*表示p＜0.05。图6：比率荧光ELISA法检测SARS-CoV-2假病毒和VSV-G假病毒S蛋白的结果 本研究以水热法制备了Si dots，水浴法制备了Mn:ZnSe QDs，通过二者静电相互作用自组装合成具有良好pH稳定性和光稳定性的Si-Mn:ZnSe NPs。H2O2可以特异性猝灭探针位于610nm处的荧光而对440 nm处的荧光无影响。在ELISA体系中，通过固定化CAT免疫复合物巧妙地将检测S蛋白浓度转化为检测体系内H2O2浓度。结果显示，在0.05~10ng/mL和5~50ng/mL浓度范围内，S蛋白浓度与荧光信号比（F610/F440）呈良好线性关系，检出限为0.032ng/mL。构建SARS-CoV-2假病毒作为实际样本模型，所构建方法的检测结果与商品化试剂盒相当。综上，所构建的比率荧光ELISA方法对SARS-CoV-2 S蛋白具有较高准确性和特异性，可作为一种新型诊断方法协助病毒感染筛查。

醋酸铀酰（UA）通常用作生物电子显微镜超薄切片的染色溶液。醋酸铀酰作为一种放射性核材料，受严格的国际法规约束。日本科研人员为了开发一种替代的、易于使用的超薄切片染色方法，研究了各种商用光学显微镜染料。研究人员发现，Mayer' s苏木精(MH)-Reynold’s柠檬酸铅溶液的染色结果与醋酸铀酰-Reynold’s柠檬酸铅溶液的染色结果相当，因此，该方法被认为是可靠且有希望的替代醋酸铀酰染色的新方法。1958年，Watson报道了用醋酸铀酰对生物标本进行电镜染色的方法。此后，醋酸铀酰和铅溶液的双重染色法因其简单和最佳的染色结果，已在世界各地的电子显微镜设备中使用。此外，电子显微镜（EM）中的阵列层析成像（如有连续截面透射电子显微镜（TEM）或扫描电子显微镜（SEM）、连续块面成像SEM）和聚焦离子束SEM）最近在很多生物科学学科中得到了越来越广泛的应用。阵列层析成像比串行块面部成像SEM和聚焦离子束SEM更具灵活性，因为它保留了所有部分。最近的技术进步使我们能够制备300–5000个连续超薄切片标本，用醋酸铀酰染色，并通过TEM获取图像，从而产生万亿字节的数据。在此过程中，需要大量醋酸铀酰。然而，由于严格的国际法规，获得铀酰化合物最近变得很困难。此外，由于它们被用作武器的核材料，预计在世界范围内对其使用以及可用性、储存和处置的限制也将更加严格。虽然已经提出了几种醋酸铀酰替代品用于染色，但没有一种能够有效地替代醋酸铀酰。因此，醋酸铀酰仍是生物研究领域电镜研究的最佳染色液。日本科研人员建立了一种新的染色方法，使用易于处理的预染色剂，作为醋酸铀酰和其他重金属双重染色的替代方法。科研人员检查了光镜方法中常规使用的各种基本染色溶液，以确定替代试剂，该试剂可以染色嵌入环氧树脂中的常规制备的薄片和半薄片。（a–h）小鼠肝脏的EM图像用各种染料染色，然后用RPb染色。用醋酸铀酰、MH、Gill No.3和Kernechtrot以及RPb染色的小鼠肝细胞的定量分析用MH和RPb染色的各种细胞和组织的EM图像铀酰铅染色流程可追溯到1958年。目前（2022年），透射电子显微镜已经发展成为一种对比度极大提高的仪器。现代电子光学、可变加速电压、可变孔径、高对比度和高分辨率图像传感器（CCD）或互补金属氧化物半导体（CMOS）相机图像记录以及高性能图像处理软件无疑将改善图像质量，即使是低对比度试样。然而，醋酸铀和铅的双重染色可能仍将在世界各地的许多电子显微镜设备中广泛使用。MH具有以下优势：稳定供应商业和经济可用的染料溶液，无需担心液体废物（因为它广泛用于对临床样本的石蜡切片进行染色以进行诊断）。染色时间为5-20分钟，与醋酸铀酰相同。然而，MH的一个缺点是，它染色为深蓝紫色，这使得在浸泡过程中很难看到网格。这可以通过污染MH溶液液滴上的网格来克服。国际原子能机构的“电离辐射防护和辐射源安全国际基本安全标准”（BSS）规定了具体的豁免水平，国际上正在通过立法制定放射性材料的新法规。如上所述，与使用醋酸铀酰（放射性物质）的染色方法相比，MH RPb染色方法在试剂购买、搬运、储存和废液处理方面是一种简单而有用的方法。参考资料：https://www.nature.com/articles/s41598-022-11523-y

染了色的橙子(下)颜色明显更深，用纸一擦就褪色　　东南网-海峡都市报12月2日讯 外表诱人、颜色异常鲜艳的脐橙、皇帝柑、橘子，有可能是经过染色剂加工过的。知道了这个事实，难免会让人一惊。橙子染色，就好比有人去美容，无非图个卖相好看。最近，就有福州市民频频在街头买到染色橙，“居然会褪色，切开后，手指都被染红了!”　　记者连日来走访福州多家水果市场发现，目前“水果美容”已经成了水果行业的“潜规则”，一些商贩给橙子美容的手法不断翻新升级，就图能让品质差的橙子尽快脱手，卖个好价钱。染色橙从哪里来?如何能买到让人放心的水果?不少市民有太多疑问的同时或许还有担心：这次市场上出现了染色的水果，下次又会出现什么?　　走访 “染色橙”多出自流动摊贩　　记者连日来对福州多家超市进行走访，发现绝大多数超市售卖的柑橘类水果不存在染色现象，但江厝路一家超市的纽菠萝橙，用纸巾擦拭果皮后，留下了红色的印记。在记者反映这一情况后，该超市即将所有纽菠萝橙下架，不再销售。　　11月30日上午，记者来到海峡农副产品物流中心果品批发市场，目前大量上市的柑橘类水果是市场的主角。在市场内，一辆皮卡车拉着一车橙售卖。这些橙子个头很大，看起来特别红，拿在手上，用纸巾擦拭，可以看到纸巾变红，而橙子的果蒂部位居然也是红色的。不过，摊主坚称这种红色是树浆自然分泌而成的。　　旁边一家有固定摊位的摊主悄悄告诉记者，“连催熟的都不可能这么红，肯定是染色的。”　　当记者找到果品批发市场相关负责人，再度回到染色橙售卖处时，发现皮卡已经开走。　　福州陈女士也反映，最近金山大桥底下常有人开着汽车贩卖脐橙，昨天，她买了两斤，吃橙前用温水洗了洗，结果发现水变红了。“回想起来，这种橙子吃起来味道是不太新鲜。”陈女士说。　　揭秘 打蜡后 贴上标签更好卖　　记者发现，果品批发市场内固定摊贩售卖的水果基本没有染色现象，而打蜡和没打蜡的柑橘类水果各占一半左右。打蜡的柑橘大多有贴标，用网兜或者白纸仔细包装好，价格比没打蜡的要贵0.2元~0.8元/斤。　　多名批发商认为，上色的水果大多本身色相不好，或者不太新鲜。以染色橙为例，原本批发价最多1.8元/斤，但经过“美容”，可以卖到2.5元/斤。“美容费”只需要0.15元~0.2元/斤。　　昨日，记者从海峡农副产品物流中心旁的几家水果打蜡厂了解到，现在给水果打蜡有专用的打蜡机。在“果友水果打蜡厂”，工人将一箱一箱的橙子倒进流水线后，机器会自动对橙子进行加水清洗、烘干、打蜡。原本“灰头土脸”的橙子，打完蜡后表皮光鲜发亮，漂亮多了。　　记者注意到，工厂使用的液体蜡装在白色大塑料桶里，桶外贴着“果蜡”的标签，产地为浙江衢州。　　在另一家没有名字的打蜡厂，几名女工正忙着给刚刚打过蜡的橘子贴标签、码放整齐后装箱。这些小标签上印着一些英文字母，工人们说，想贴什么样的标签都行，水果贴了标签更好卖。　　记者问是否有上色的业务，两名女工表示，橘子不能加颜色，但橙子可以。不过，当记者用同样的问题询问老板时，老板直言“你不像本地人”，并表示不能给水果上色，“被查到了要罚款”。　　另据了解，很多染色橙是在产地打蜡时就被不法商贩动了手脚。　　提醒 小心有重金属渗进果肉　　省质量技术监督局有关人士表示，由于没有经过检测，不知道染色橙是用什么染色剂染色的。但如果在水果表面添加柠檬黄、日落红等色素，肯定是不允许的。如果染色时间过长、染色剂的量又大的话，色素有可能从果皮渗透进入果肉。　　另据媒体报道，按国家规定，初级农产品是严禁上色的，对于适宜采摘的果品，可做适当清洗打蜡，但上蜡要使用专业的果品蜡，不能使用工业蜡。如果用工业石蜡，其中的重金属可能会渗进果肉，危害人体健康。　　据了解，我国目前还没有专门的标准对果蜡的品种和使用进行规范。此外，美国一些州虽然允许给水果增色，但对于色素的使用量有极其严格的规定。