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伏马毒素主要是由串珠镰刀菌菌f.moniliforme和f.proliferatum在一定温度和湿度条件下繁殖所产生的次级代谢产物。到目前为止,发现的伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11种。粮食在加工、贮存、运输过程中易受上述两种真菌污染,特别是当温度适宜时,更利于其生长繁殖,从而产生出一类结构性质相似的毒素,其中FB1是其主要组分占60%以上,其毒性也最强。因此,伏马毒素可以通过粮食加工、饲料生产等过程对畜牧业乃至人类健康产生较严重的危害。FB1对食品污染的情况在世界范围内普遍存在,主要污染玉米及玉米制品,其污染的饲料主要为以玉米为原料的饲料。1996年我国对玉米、小麦等粮食作物中FB1污染进行调查。发现不同地区均有不同程度污染。我国食道癌高发区林县的玉米伏马菌素污染率为48%。因此,人们怀疑该地区食道癌高发与食用污染此毒素玉米相关。该毒素已被世界卫生组织列为近年来首先进行研究的几种霉菌毒素之一。早在1988年南非科学家就对食道癌发病率高和低的地区进行过调查,食道癌发病率与主食玉米受伏马毒素污染呈正相关,进一步的动物试验也得到了相同的结果。1994年中国学者和日本学者对食道癌高发区的河南省林县进行了一次调查,发现该地区主食玉米中伏马毒素水平高达30~50mg/kg,发霉玉米中伏马毒素最高值达118.4mg/kg。目前伏马毒素引发食道癌的机理还不清楚,需进一步确证和研究。Pribolab®(普瑞邦)应用免疫亲和柱净化,利用高效液相色谱仪和荧光检测器检测可提供伏马毒素测定的HPLC检测方案,得出的结果准确可靠,检出限好,是一种很好的检测伏马毒素的方法。
以下是xcm-105051版友给我的站短,希望大家一起来帮忙,谢谢!您好,我现在正在用日立的F-7000来检测伏马毒素,伏马毒素本身没有荧光,用OPA试剂衍生后再来测,但衍生后的化合物不稳定,荧光会随着时间衰减。 伏马毒素是溶于乙腈:水=1:1的溶液中的。所以我配制了一系列浓度的伏马毒素标准溶液,空白是乙腈水(因为空白与OPA试剂衍生后也有荧光,但低于系列浓度的伏马毒素衍生后的荧光值)。然后对分别空白和系列浓度的伏马毒素衍生后进行时间扫描。分别计算前30S的荧光平均值,再绘制标准曲线。 问题是每次的的标准曲线结果都比较好(相关系数能到0.99以上,),但是每天和每天测的荧光值有一定差别,就是曲线方程不一样。 这是因为是有系统误差呢?还是荧光受条件因素较多,所以每次的都不一样呢? 还有就是我应该怎样来调零和扣除空白呢?
伏马毒素的危害伏马毒素(Fumonisin,FB)是由镰刀菌属在一定的温度和湿度下产生的水溶性代谢产物,对食品污染的情况在世界范围内普遍存在,主要污染玉米及玉米制品。动物试验和流行病学资料已表明,伏马菌素主要损害肝肾功能,能引起马脑白质软化症和猪肺水肿等,并与我国和南非部分地区高发的食道癌有关,现已引起世界范围的广泛注意。伏马毒素的检测国内外已建立了多种方法。伏马毒素的分析方法通常包括提取、纯化、分离和检测几个步骤。目前,大多数方法均采用免疫亲和柱(Pribolab)纯化样品,应用HPLC或GC结合不同的检测器进行。伏马毒素伏马毒素(B1, B2,和B3)是由镰孢菌(霉)属念珠菌产生的真菌毒素。在世界范围内都发现了伏马毒素污染玉米的现象。研究表明伏马毒素可以诱发老鼠患肝癌,猪的肺水肿和马的脑脊髓白质病。在一些地区中玉米中伏马毒素含量很高,在这些地区(比如中国和非洲)人的食道癌具有高发性。适用PriboFast伏马毒素试剂盒原理是竞争酶联免疫反应,用于检测玉米中的伏马毒素。原理这个 Pribolab伏马素素检测试剂盒的原理是固相直接竞争酶联免疫反应。聚苯乙烯微孔板中包被伏马毒素的特异性抗体,这种抗体和伏马毒素的各个亚型都有很好的交叉反应。利用90%的甲醇从样品中提取伏马毒素,把提取的样品和HRP(辣根过氧化物酶)标记的伏马毒素混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或样品中的伏马毒素竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后,倒出孔里的液体,清洗除去没有反应的物质后加入显色底物(TMB),在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系,与标准品或样品中伏马毒素的量成反比例关系。所以,标准品或样品中的伏马毒素浓度越高,显色的蓝色将会越浅。加入酸,终止反应,底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里,在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较,相对应得出结果。提取步骤中需要的材料研磨器;烧杯:125ml;天平:量程为20g量筒:100ml甲醇:每个样品36ml 蒸馏水:每个样品4ml滤纸 :用针孔过滤器代替;漏斗测定步骤:100μL或200μL 单道或多道移液器;计时器; 洗瓶;吸水纸;450nm 滤光片的酶标仪警告和注意事项1、使用前将所有的试剂拿到室温(19℃-27℃)。2、试剂贮存在2℃到8℃,不要使用过期的产品。不要冰冻试剂盒。3、没有用完的试剂不要回收到原试剂瓶中。操作过程中按照要求精确量取试剂体积。4、整个操作过程要严格按照要求的时间和温度。5、不要用口移取试剂或样品。6、终止液里含有酸,不要与皮肤和眼睛接触。如果有接触,一定要用清水清洗。7、所有的材料、试剂和仪器可能被样品或标准品中的伏马毒素污染,在操作过程中一定要戴手套。8、使用完毕,处理好所有的材料、试剂和仪器。样品提取步骤注意:样品必须按照有关规定收集1、配制90%的甲醇溶液(每个样品需要:4ml蒸馏水+36ml甲醇)2、研磨代表性样品(使50%的样品可以通过一个20目的滤网)。3、称量20g研磨过滤后的样品加入40ml 90%的甲醇溶液,样品稀释比为1:2(w/v)。