细胞凋亡分析

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  • Lionheart LX是一款高性价比的全自动显微成像系统,整个机型设计紧凑,无需人眼通过目镜观察样本,有效的避免长时间人眼观察造成的视觉疲劳,也无需耗费高昂的采购成本和学习成本,搭载具有高内涵分析功能的Gen5软件,可以自动化进行图片拍摄、处理和分析,在实验室应用非常广泛。特点全自动智能显微成像系统:Lionheart LX拥有全自动的6位物镜转轮,能够同时实现4色荧光通道的成像,具有高精度电动载物台,可以自动聚焦、自动曝光、一键式成像,Gen5软件功能可以让用户体检轻松简单的全自动图像拍摄和分析。具有高对比度明场、彩色明场和荧光成像模式:明场、彩色明场和20多种荧光通道成像可选,Lionheart LX 突破多种成像拍摄体验,从Z轴层切(Z-stacking)到Z轴图像展示(Z-projection),Montage拍摄实现图像拼接,并且具有视频录制、自定义坐标拍摄和高通量整版拍摄功能,极大的拓宽了Lionheart LX在生命科学领域的应用。非标记细胞成像:可以通过高对比度明场进行非标记细胞成像,利用Gen5软件全自动完成图片拍摄、图片处理和结果分析,方法简便,适用于细胞计数、细胞毒性、细胞增殖和融和度相关实验。Lionheart LX典型应用:——终点法活细胞检测细胞凋亡细胞自噬细胞周期细胞毒性线粒体膜电位——组织学(HE)——非标记细胞计数——融合度分析——基因毒性彗星分析γH2AX——表型分析免疫荧光
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细胞凋亡分析相关的资讯

  • 细胞坏死与细胞凋亡的区别
    细胞程序性死亡 概念:细胞程序死亡(programmed cell death,PCD)也常常被称为细胞凋亡,是生物体发育过程中普遍存在的,是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时,受基因调控启动的自-杀保护措施,包括一些分子机制的诱导激活和基因编程,通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时,就像树叶或花的自然凋落一样,凋亡的细胞散在于正常组织细胞中,无炎症反应,不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除,不影响其他细胞的正常功能。 凋亡细胞的主要特征是(参见表15-2):①染色质聚集、分块、位于核膜上,胞质凝缩,最后核断裂,细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体 ②凋亡小体内有结构完整的细胞器,还有凝缩的染色体,可被邻近细胞吞噬消化,因始终有膜封闭,没有内溶物释放,故不会引起炎症 ③凋亡细胞中仍需要合成一些蛋白质,但是在坏死细胞中ATP和蛋白质合成受阻或终止 ④核酸内切酶活化,导致染色质DNA在核小体连接部位断裂,形成约200bp整数倍的核酸片段,凝胶电泳图谱呈梯状 ⑤凋亡通常是生理性变化,而细胞坏死是病理性变化。理论意义:程序性细胞死亡在生物发育和维持正常生理活动过程中非常重要.在发育过程中,细胞不但要恰当地诞生,而且也要恰当地死亡。例如,人在胚胎阶段是有尾巴的,正因为组成尾巴的细胞恰当地死亡,才使我们在出生后没有尾巴.如果这些细胞没有恰当地死亡,就会出现长尾巴的新生儿.从胚胎、新生儿、婴儿、儿童到青少年,在这一系列人体发育成熟之前的阶段,总体来说细胞诞生得多,死亡得少,所以身体才能发育.发育成熟后,人体内细胞的诞生和死亡处于一个动态平衡阶段,一个成年人体内每天都有上万亿细胞诞生,同时又有上万亿细胞“程序性死亡”.两者处于一种动态平衡中,使人体器官维持合适的细胞数量得以正常运作的,正是“程序性细胞死亡”机制。(又如蝌蚪尾的消失,骨髓和肠的细生物发育过程中及成体组织中正常的细胞凋亡有助于保证细胞只在需要它们的时候和需要它们活的地方存活。这对于多细胞生物个体发育的正常进行,自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。)实践意义:如果调节细胞“自-杀”的基因出了问题,该死亡的细胞没有死亡,反而继续分裂繁殖,便会导致有问题或恶性细胞不受控制地增长,比如癌症 如果基因错向不该死的细胞发出“自-杀令”,不让之分裂繁殖,使不该死亡的淋巴细胞大批死亡,便破坏了人体的组织或免疫系统,比如艾滋病。控制“程序性细胞死亡”的基因有两类:一类是抑制细胞死亡的 另一类是启动或促进细胞死亡的。两类基因相互作用控制细胞正常死亡。如果能发现所有的调控基因,分析其功能,研究出能发挥或抑制这些基因功能的药物,那么人类就能够敲响癌症和艾滋病的丧钟。当然,这个过程需经过一番艰苦努力,因为线虫只有959个细胞,而人体则有大约1000万亿个细胞。
  • 文献速递|基于细胞外囊泡的新型纳米材料通过 Let-7a 诱导舌鳞癌细胞凋亡
    近日近日,吉林大学动物科学学院实验动物中心王东旭教授课题组与吉林大学口腔医院口腔颌面外科刘炜炜教授课题组在细胞外囊泡与舌鳞状细胞癌关系研究领域取得了新的进展。相关研究成果已发表在国际知名期刊《Frontiers in Bioengineering and Biotechnology》(IF:5.89,JCR 2区)。▲图1|国际知名期刊《Frontiers in Bioengineering and Biotechnology》(IF:5.89,JCR 2区)近年来,针对舌鳞状细胞癌(TSCC)的治疗和诊断已取得了进展,但 5 年生存率仍然很低。治疗TSCC的方法主要为手术、放疗和化疗。在过去几十年中,中医药在癌症研究方面已被广泛应用。例如,从蜂蜜中提取的白杨素可以通过非编码RNA在多种癌细胞中诱导细胞凋亡并抑制增殖。并且,纳米结构也已被广泛研究用于癌症治疗中的药物递送和诊断,例如金纳米粒子 (AuNPs)。细胞外囊泡(EVs)是由细胞释放到细胞外环境中的小囊泡。EVs 由脂质双层膜组成,该膜包裹着小的无细胞器的细胞质,EVs 的摄取特定于细胞类型。但白杨素与金纳米粒子在单独运用时对癌症缺乏特异性,有证据表明,纳米粒子与 EVs结合可作为靶向癌细胞的药物载体。因此,纳米材料与 EVs 结合可以提高癌症治疗的效率。为了探究该方法,王东旭教授与刘炜炜教授团队首先使用白杨素治疗 TSCC 细胞和分离的 EVs-白杨素。然后将四氯金酸(HAuCl4)与 EVs-白杨素一同孵育形成 Au-EVs。在 EVs-Con 和 EVs-chrysin 之间进行转录组测序筛选后,对 let-7a 家族进行了分析。该研究结果表明,Au-EVs 通过TSCC中的 let-7a 诱导细胞凋亡。▲图2 |实验方案示意图文章中,研究 Au-EVs在体内的抗肿瘤作用的实验使用了博鹭腾AniView600多模式动物活体成像系统拍摄观察。在该实验中,首先将SCC9 细胞注射到裸鼠体内。7天后,将Au-EVs注射到肿瘤下方,并在第8天和第15天用近红外光照射裸鼠并进行肿瘤生长分析。结果表明,Au-EVs具备肿瘤靶向性,且荧光强度随时间增加而增加。此外,近红外辐射可以淬灭 Au-EVs 的荧光。在第21天时收集肿瘤,与预期结果相符,Au-EVs 与 NIR 结合显着抑制了肿瘤生长,并且没有改变体内其他器官。这些结果表明,Au-EVs 有效地介导了等离子光热疗法(PPT)并抑制了体内肿瘤的生长。▲图3|注射Au-EVs 后的荧光强度本研究发现,Au-EVs作为一种新型纳米材料,在SCC9 细胞中具有吸收特异性。在经过近红外辐射后,Au-EVs 能够有效增强细胞凋亡。通过RNA-seq,筛选 EVs-chrysin miRNA,Let-7a-3p,并且过表达let-7a-3p会诱导细胞凋亡,此结果表明经NIR 处理的 Au-EV 显著抑制了体内肿瘤的生长。综上所述,本研究结果提供了一种能够提高 AuNPs 靶向性的纳米材料,并且该材料可能与针对 TSCC 的疗法相关。论文链接:doi: 10.3389/fbioe.2021.766380
  • 中国首个针对乙肝治疗的细胞凋亡通路新靶点IAP抑制剂获批临床
    p style="text-align: center "img title="001.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/48582be5-56f8-4909-b2e6-9897a64c3ce4.jpg"//pp  APG-1387临床研究负责人、中国肝炎防治基金会副理事长、2017年亚太肝病研究学会(APASL)主席、中华医学会感染病学分会前任主任委员、南方医科大学南方医院肝病中心主任侯金林教授评论道:“目前临床上用于治疗乙肝的药物能非常有效的抑制病毒复制,但临床治愈率(即HBsAg消失)很低。因此,大多数乙肝患者需要长期使用抗病毒药物。我对APG-1387治疗乙肝的新颖作用机制感到非常兴奋,期待与亚盛在APG-1387的临床试验合作中进一步验证其清除患者体内HBV感染的潜力。”/pp  APG-1387是亚盛医药自主设计开发的、具有全球知识产权的新一代凋亡蛋白抑制因子(IAP)高效特异性抑制剂,主要通过模拟内源性Smac分子降解IAPs来诱导和加速细胞凋亡的进程。由南方医院肝病中心张小勇教授课题组完成的临床前研究发现,慢性乙肝患者肝内IAPs分子表达上调,导致HBV感染的肝细胞发生免疫逃避,不能被特异性T细胞杀伤。APG-1387治疗可有效抑制肝细胞中的IAPs表达,促进病毒特异性T细胞介导的HBV DNA和HBV表面抗原的消除,从而治愈慢性HBV感染。IAP抑制剂用于治疗乙肝病毒感染的优势在于,依靠特异性T细胞的识别能力,能优先杀死感染细胞而不影响健康细胞。/pp  值得关注的是,世界卫生组织在去年发布的《2017年全球肝炎报告》显示,全球感染乙肝或丙肝的人数已超过3.25亿,每年约有134万人因此丧生。在我国,慢性乙肝病毒携带者达到了9000万人左右,慢性乙肝患者有3000万人,得到治疗的仅有200万人,不足总数的1/10。根据研究与咨询公司GlobalData的数据,未来十年,中国仍将是最大的乙肝市场,且将继续保持高增长态势。预计到2020年我国乙肝用药市场规模将达到200亿元,远期将达300亿。而目前市场上并未有完全能治愈乙肝的药物,用药需求巨大。/pp  亚盛医药首席医学官翟一帆博士表示:“APG-1387在中国进入临床开发是我们执行全球开发战略中的关键一步,我们期待这个药能够为迫切需要更有效治疗药物的乙肝患者提供更多的可能性。”/pp  亚盛医药目前也在对APG-1387进行癌症的临床开发。此前,APG-1387在中国和澳大利亚均已完成针对晚期实体瘤的临床I期剂量爬坡试验。去年11月,APG-1387又获得了美国FDA新药临床试验批准,将与肿瘤免疫药物联合用于治疗晚期实体瘤、恶性血液肿瘤。/pp  strong关于APG-1387/strong/pp  APG-1387是亚盛医药设计开发的新型小分子细胞凋亡蛋白抑制因子(IAP)抑制剂。研究结果表明IAP蛋白高度表达可诱导肺癌、头颈部肿瘤、乳腺癌、胃肠癌、黑素瘤和多发性骨髓瘤的发生。亚盛医药正在全球范围内开发APG-1387,已在中国和澳大利亚完成癌症的临床I期剂量爬坡试验。APG-1387也被用于治疗乙型肝炎,临床前研究表明APG-1387可显著降低HBV DNA和HBV表面抗原。/pp strong 关于乙型肝炎/strong/pp  乙型肝炎是一种病毒感染,可以攻击肝脏,并可能引起急性和慢性疾病。乙型肝炎患者和HBV携带者是本病的主要传染源,HBV可通过母婴、血和血液制品、破损的皮肤黏膜及性接触传播。感染HBV后,由于受病毒因素、宿主因素等影响,会出现不同的结局和临床类型,后期可能发展成肝硬化或肝癌。/pp strong 关于亚盛医药/strong/pp  亚盛医药是一家全球领先的处于临床阶段的新药研发企业,致力于在肿瘤、乙肝及与衰老相关的疾病等治疗领域开发创新药物。公司拥有自主研发的蛋白-蛋白相互作用靶向药物设计平台及100多项国际发明专利。公司研发产品管线主要专注细胞凋亡路径关键蛋白的抑制剂,通过抑制BCL-2、IAP或MDM2-p53等,重启肿瘤细胞的凋亡程序 第二代和第三代的针对癌症治疗中出现的激酶突变体的抑制剂 与肿瘤治疗有密切相关性的表观遗传学靶点的抑制剂等。公司现有六个新药项目已进入到中国、美国及澳大利亚的I-II期临床开发阶段,其中包括APG-1252,一个新型、强效的BCL-2/BCL-xL双重抑制剂。/p

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  • 细胞凋亡如何检测?

    摘要:细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1. 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2. 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1)。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1376376278_small.jpg3 透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1376376295_small.jpg二、磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1376376296_small.jpg方法1. 悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100 ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10 ul,室温避光30 min,再加入PI(50 ug/ml)5 ul,避光反应5 min后,加入400 ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1 h), 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。2. 贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。3. 爬片细胞染色:同上,最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。结果 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1376376298_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1376376300_small.jpg

  • 细胞凋亡实验步骤及注意事项

    一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征   2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着色,凋亡细胞和活细胞不着色。而一些活细胞染料由于为亲脂性物质,可跨膜进入活细胞,因而可进行活细胞染色。Hoechst33342是一种活性荧光染料且毒性较弱,它是双苯并咪唑的一种衍生物。与DNA特异结合(主要结合于A-T)碱基区),显示凋亡细胞和活细胞。凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。三、实验用品1、试剂:三尖杉酯碱(HT),300μg/ml,100mmol/L Tris-HCl(pH7.5),5mol/L EDTA缓冲液、碱性裂解液:0.2mol/L NaOH, 1%SDS、醋酸钠:3mol/L KAc(pH4.8);异丙醇;70%乙醇;溴酚蓝,蔗糖指示剂。TBE电泳缓冲液,1%琼脂糖,溴乙锭。PI母液:500μg/ml;Ho33342母液:2mmol/L。   2、仪器设备:荧光显微镜,电泳仪,电泳槽,微量加样器(1ml,100μl)0.5、1.5ml离心管,载玻片,盖玻片。四、实验材料人早幼粒白血病HL-60细胞,用含10%小牛血清的RPMI1640培养基在37℃,5%CO2条件下培养。五、方法步骤 1、三尖杉酯碱诱发HL-60细胞凋亡   (1)实验前约24小时,接种两瓶HL-60细胞,标记①、②,每瓶含约6ml培养液,置37℃,5%CO2培养箱培养。   (2)实验前约2.5小时,当细胞密度达到70%,①号瓶加入三尖杉酯碱200μl,使终浓度为1μg/ml,②号瓶中加入同等量PBS(pH7.4)作对照。共同放入培养箱中继续培养2.5小时。2、Ho33342和PI双重染色鉴别三种细胞   (1)染色:将瓶中的细胞摇匀取200μl于1.5ml的离心管中,加入Ho33342母液2μl,PI 20μl,染色15分钟。   (2)滴片:取一载玻片用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染色后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察,区别三种细胞,并注意三者比例。六、注意事项1、诱导培养HL-60细胞时间要准确;  2、荧光显微镜下观察细胞时,由于荧光易碎灭,观察时要尽量快。

  • 西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡

    西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国,西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物,是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI,国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验,其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型,可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡,阻滞周期、引发DNA损伤,还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比,西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其中最为主要的是线粒体凋亡途径,该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制,促凋亡蛋白Bax表达上调,使线粒体膜电位降低,细胞色素C释放到细胞质中,Caspase途径被激活,细胞发生凋亡。例如:西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平,使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3,促进细胞凋亡;在肾癌中,它可以下调Bcl-2表达,上调Bax表达,随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平,导致DNA双链损伤。研究证明,西达本胺作用于白血病细胞后,诱导细胞内ROS产生,细胞凋亡增加[17]。此外,在胰腺癌细胞系中,西达本胺明显增强细胞内ROS的产生,上调γH2AX(DNA双链断裂的标志物)表达水平,诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinases,CDKs)以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(Cyclin-dependent kinases inhibition,CDKI)的表达阻滞细胞周期。例如,西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高,CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降,阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中,西达本胺上调P21表达,下调Cyclin E表达,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,从而抑制细胞的增殖。

细胞凋亡分析相关的耗材

  • 流式细胞仪配套试剂盒
    多种流式细胞仪试剂盒提升您的分析能力使用 Luminex 流式细胞仪试剂盒扩展您在细胞计数、细胞活力、细胞健康及细胞信号研究方面的能力Luminex提供的各种流式检测试剂盒都经过了严格的优化,缩短了样品制备时间, 最大限度地减少建立检测方法所需的时间和精力,便于进行数据分析。与其他品牌流式检测试剂盒相比,路明克斯公司的流式细胞仪试剂盒在检测过程中需要的洗涤和孵育步骤更少,非常适合检测细胞活力、细胞周期、DNA 损伤 、线粒体健康、细胞凋亡指数和细胞自噬等。 所有的试剂盒均在传统的基于鞘液的流式细胞仪上进行过跨平台测试。相关试剂盒Amnis 细胞成像试剂盒可用于重要的细胞途径和药物发现应用。 Amnis成像流式细胞仪可在两个平台上使用:FlowSight 成像流式细胞仪和ImageStreamXMk II成像流式细胞仪。我们的专家随时为您的研究和实验室需求提供最佳工具。Guava 和Muse 流式细胞仪试剂盒设计用于分析细胞事件和/或细胞表型。每个试剂盒都具有独特的直接偶联抗体和/或荧光染料和蛋白报告基因的组合,以监测蛋白表达,蛋白定位和/或翻译后修饰的变化。使用这些表格找到适合您的应用或仪器的最佳试剂盒。如需了解更多信息欢迎留言或访问Luminex官网
  • Biolife CS10细胞冻存液
    Biolife CS10细胞冻存液美国Biolife品牌CryoStor临床级即用型冻存液产品都预先配制了USP级DMSO,这是一种渗透性冷冻保护剂,有助于减轻冰的形成造成的损害。在广泛的细胞类型中,CryoStor配方已被证明比商业和家庭酿造的等渗和细胞外配方更有效地减少保存后的凋亡和坏死。CryoStor产品符合 USP 无菌和 USP 内毒素检测标准,并按cGMP生产。CryoStor CS10预先配制了10%的DMSO,在冷冻、储存和解冻过程中为需要10% DMSO的细胞和组织提供了安全、保护的环境。通过调节对低温保存过程的分子生物学反应,CryoStor提供了增强的细胞活力和功能,同时消除了血清、蛋白质或高水平的细胞毒性制剂的需求。产品特点:&bull 单独的Biolife品牌标签&bull 预配置(10%DMSO)&bull 无血清&bull 无蛋白&bull USP级别/高质量组分&bull cGMP 制造&bull FDA 药物主文件备案&bull 无菌、内毒素,以及细胞放行测试产品规格:产品参数:Jurkat T细胞微球悬浮在指定的低温培养基中,然后放置在2 ml 冻存管中,并在2-8℃下孵育15分钟。然后将cryovials转移到无LN2-程序降温仪以-1℃/分钟的速度冷冻保存。在达到-70℃后,将样品转移到LN2储存至少24小时。样品在指定条件下解冻,用CGM(1:10稀释)重悬,在37℃和5% CO2下转移到培养箱。在NucleoCounter NC-3000成像细胞仪(ChemoMetec,丹麦)上使用Via-1盒,根据膜完整性评估立即和解冻后24小时内的细胞存活率和计数。图1-Jurkat T细胞的活力是基于在解冻后24小时内使用膜完整性测定进行评估。图2-使用膜完整性试验评估了解冻后Jurkat T细胞的可见复苏率和扩增性能。结论:1-解冻后立即对细胞活率和数量进行分析并不能反映冷冻保存过程成功与否。未优化的冷冻培养基的不良影响可能要到解冻后的24-48小时才能检测到,这归因于低温保存诱导的延迟性细胞死亡(DOCD)。另一方面,优化的低温保存介质的加入可以防止DOCD的发生 因此,减少了变异性,更准确地估计了解冻后的生存和增殖。2-低温贮藏前的补料时间和培养基的变化对低温贮藏过程的结果有重要影响。这可能是由于一些参数,包括在冷冻前活力试验中没有出现的压力积累,但与DOCS结合,导致解冻后活力和功能的显著损失。3-冰成核的随机性本质上导致了细胞在低温保存过程中所承受的低温保存诱导应力的变化。因此适当的成核对模型T细胞的生存能力和增殖能力有显著影响。4-在37°C介质中稀释(类似于患者给药情景)是解冻后的最佳稀释实践。强烈建议,为了分析目的,细胞也应在温暖介质中稀释,以尽量减少在洗涤过程中渗透细胞的肿胀和溶解。使用方法:1. 将待冷冻保存的细胞重悬置于悬浮液中(机械或酶法解离)2. 对细胞进行离心3. 去除上清液-注意:尽可能多地去除培养基,以减少冷冻液的稀释。4. 添加冷(2°-8°C) 的cryostor冻存液。细胞浓度按照常规细胞培养方案0.5-10*106细胞/mL(可能更高)。DMSO是预先混合在cryostor冻存液中且冻存液中不含添加剂。5-预冷冻:细胞悬液在2°-8°C下孵育约10分钟。6-冷冻成核:在-80°C冷冻样品(许多protocol推荐交替使用-70°C和-80°C环境来处理样本)。对大多数哺乳动物细胞系统推荐使用程序降温仪来控制速率冷冻(-1°C/min),如果使用冷冻装置或异丙醇容器则应提前容器预冷至2°-8°c,使用异丙醇容器的冷冻时间(-80°C)建议约为4小时,或不超过一夜。样品内的冰成核应在大约-5°C下开始,使用可控速率冷冻机上的液氮爆裂程序设置,或在大约15-20分钟后对冷冻液/样品容器进行机械搅拌(轻弹或轻敲)。7.储存:将样品放入储存室,在液氮温度下(低于-130°C)储存样品。样品储存在-80°C仅建议短期储存(数周至数月)。8.解冻:在37°C水浴或同类似的机械解冻装置中快速解冻样品,样品融化时应轻轻地旋转样品,直到所有可见的冰都融化。在冰冻箱中,1ml样品的大约解冻时间为2-3分钟。不允许样品在冷冻温度(0-10°C)以上加热。冷冻瓶从浴液中取出时,摸起来应该是凉的。不建议被动解冻。9.立即用培养基或等效等渗介质稀释细胞/冷冻液混合物。稀释程序可以在一个步骤中完成。稀释介质应在20°C至37°C之间。建议稀释比为1:10(样品与介质)或更大。10. 应用合适的配置下种细胞。11.将细胞放入培养条件或立即使用。12.解冻后进行24小时生存能力评估。注:为了获得低温保存后细胞活力的准确测量,应在解冻后24小时进行评估,并与非冷冻对照样本进行比较。*样品解冻后立即使用膜完整性指标(如台盼蓝)进行评估,以比较分析样品细胞产量和存活率,这往往导致对细胞存活率的测量不准确。建议采用活/死荧光分析或代谢分析(MTT或alamarBlue*)更准确地评估可行回收率。CryoStor产品在环境温度下运输。收到后,保存在2°-8°C,避光,直到准备使用Biolife CS5 细胞冻存液美国Biolife品牌CryoStor临床级即用型冻存液产品都预先配制了USP级DMSO,这是一种渗透性冷冻保护剂,有助于减轻冰的形成造成的损害。在广泛的细胞类型中,CryoStor配方已被证明比商业和家庭酿造的等渗和细胞外配方更有效地减少保存后的凋亡和坏死。CryoStor产品符合 USP 无菌和 USP 内毒素检测标准,并按cGMP生产。CryoStor CS5预先配制了10%的DMSO,在冷冻、储存和解冻过程中为需要10% DMSO的细胞和组织提供了安全、保护的环境。通过调节对低温保存过程的分子生物学反应,CryoStor提供了增强的细胞活力和功能,同时消除了血清、蛋白质或高水平的细胞毒性制剂的需求。产品特点:&bull 单独的Biolife品牌标签&bull 预配置(5%DMSO)&bull 无血清&bull 无蛋白&bull USP级别/高质量组分&bull cGMP 制造&bull FDA 药物主文件备案&bull 无菌、内毒素,以及细胞放行测试产品规格:产品数据:Jurkat T细胞微球悬浮在指定的低温培养基中,然后放置在2 ml 冻存管中,并在2-8℃下孵育15分钟。然后将cryovials转移到无LN2-程序降温仪以-1℃/分钟的速度冷冻保存。在达到-70℃后,将样品转移到LN2储存至少24小时。样品在指定条件下解冻,用CGM(1:10稀释)重悬,在37℃和5% CO2下转移到培养箱。在NucleoCounter NC-3000成像细胞仪(ChemoMetec,丹麦)上使用Via-1盒,根据膜完整性评估立即和解冻后24小时内的细胞存活率和计数。图1-Jurkat T细胞的活力是基于在解冻后24小时内使用膜完整性测定进行评估。图2-使用膜完整性试验评估了解冻后Jurkat T细胞的可见复苏率和扩增性能。1-解冻后立即对细胞活率和数量进行分析并不能反映冷冻保存过程成功与否。未优化的冷冻培养基的不良影响可能要到解冻后的24-48小时才能检测到,这归因于低温保存诱导的延迟性细胞死亡(DOCD)。另一方面,优化的低温保存介质的加入可以防止DOCD的发生 因此,减少了变异性,更准确地估计了解冻后的生存和增殖。2-低温贮藏前的补料时间和培养基的变化对低温贮藏过程的结果有重要影响。这可能是由于一些参数,包括在冷冻前活力试验中没有出现的压力积累,但与DOCS结合,导致解冻后活力和功能的显著损失。3-冰成核的随机性本质上导致了细胞在低温保存过程中所承受的低温保存诱导应力的变化。因此适当的成核对模型T细胞的生存能力和增殖能力有显著影响。4-在37°C介质中稀释(类似于患者给药情景)是解冻后的最佳稀释实践。强烈建议,为了分析目的,细胞也应在温暖介质中稀释,以尽量减少在洗涤过程中渗透细胞的肿胀和溶解。1. 将待冷冻保存的细胞重悬置于悬浮液中(机械或酶法解离)2. 对细胞进行离心3. 去除上清液-注意:尽可能多地去除培养基,以减少冷冻液的稀释。4. 添加冷(2°-8°C) 的cryostor冻存液。细胞浓度按照常规细胞培养方案0.5-10*106细胞/mL(可能更高)。DMSO是预先混合在cryostor冻存液中且冻存液中不含添加剂。5-预冷冻:细胞悬液在2°-8°C下孵育约10分钟。6-冷冻成核:在-80°C冷冻样品(许多protocol推荐交替使用-70°C和-80°C环境来处理样本)。对大多数哺乳动物细胞系统推荐使用程序降温仪来控制速率冷冻(-1°C/min),如果使用冷冻装置或异丙醇容器则应提前容器预冷至2°-8°c,使用异丙醇容器的冷冻时间(-80°C)建议约为4小时,或不超过一夜。样品内的冰成核应在大约-5°C下开始,使用可控速率冷冻机上的液氮爆裂程序设置,或在大约15-20分钟后对冷冻液/样品容器进行机械搅拌(轻弹或轻敲)。7.储存:将样品放入储存室,在液氮温度下(低于-130°C)储存样品。样品储存在-80°C仅建议短期储存(数周至数月)。8.解冻:在37°C水浴或同类似的机械解冻装置中快速解冻样品,样品融化时应轻轻地旋转样品,直到所有可见的冰都融化。在冰冻箱中,1ml样品的大约解冻时间为2-3分钟。不允许样品在冷冻温度(0-10°C)以上加热。冷冻瓶从浴液中取出时,摸起来应该是凉的。不建议被动解冻。9.立即用培养基或等效等渗介质稀释细胞/冷冻液混合物。稀释程序可以在一个步骤中完成。稀释介质应在20°C至37°C之间。建议稀释比为1:10(样品与介质)或更大。10. 应用合适的配置下种细胞。11.将细胞放入培养条件或立即使用。12.解冻后进行24小时生存能力评估。注:为了获得低温保存后细胞活力的准确测量,应在解冻后24小时进行评估,并与非冷冻对照样本进行比较。*样品解冻后立即使用膜完整性指标(如台盼蓝)进行评估,以比较分析样品细胞产量和存活率,这往往导致对细胞存活率的测量不准确。建议采用活/死荧光分析或代谢分析(MTT或alamarBlue*)更准确地评估可行回收率。CryoStor产品在环境温度下运输。收到后,保存在2°-8°C,避光,直到准备使用Biolife CS2 细胞冻存液美国Biolife品牌CryoStor临床级即用型冻存液产品都预先配制了USP级DMSO,这是一种渗透性冷冻保护剂,有助于减轻冰的形成造成的损害。在广泛的细胞类型中,CryoStor配方已被证明比商业和家庭酿造的等渗和细胞外配方更有效地减少保存后的凋亡和坏死。CryoStor产品符合 USP 无菌和 USP 内毒素检测标准,并按cGMP生产。CryoStor CS5预先配制了2%的DMSO,在冷冻、储存和解冻过程中为需要2% DMSO的细胞和组织提供了安全、保护的环境。通过调节对低温保存过程的分子生物学反应,CryoStor提供了增强的细胞活力和功能,同时消除了血清、蛋白质或高水平的细胞毒性制剂的需求。产品特点:&bull 单独的Biolife品牌标签&bull 预配置(5%DMSO)&bull 无血清&bull 无蛋白&bull USP级别/高质量组分&bull cGMP 制造&bull FDA 药物主文件备案&bull 无菌、内毒素,以及细胞放行测试产品规格:使用方法:1. 将待冷冻保存的细胞重悬置于悬浮液中(机械或酶法解离)2. 对细胞进行离心3. 去除上清液-注意:尽可能多地去除培养基,以减少冷冻液的稀释。4. 添加冷(2°-8°C) 的cryostor冻存液。细胞浓度按照常规细胞培养方案0.5-10*106细胞/mL(可能更高)。DMSO是预先混合在cryostor冻存液中且冻存液中不含添加剂。5-预冷冻:细胞悬液在2°-8°C下孵育约10分钟。6-冷冻成核:在-80°C冷冻样品(许多protocol推荐交替使用-70°C和-80°C环境来处理样本)。对大多数哺乳动物细胞系统推荐使用程序降温仪来控制速率冷冻(-1°C/min),如果使用冷冻装置或异丙醇容器则应提前容器预冷至2°-8°c,使用异丙醇容器的冷冻时间(-80°C)建议约为4小时,或不超过一夜。样品内的冰成核应在大约-5°C下开始,使用可控速率冷冻机上的液氮爆裂程序设置,或在大约15-20分钟后对冷冻液/样品容器进行机械搅拌(轻弹或轻敲)。7.储存:将样品放入储存室,在液氮温度下(低于-130°C)储存样品。样品储存在-80°C仅建议短期储存(数周至数月)。8.解冻:在37°C水浴或同类似的机械解冻装置中快速解冻样品,样品融化时应轻轻地旋转样品,直到所有可见的冰都融化。在冰冻箱中,1ml样品的大约解冻时间为2-3分钟。不允许样品在冷冻温度(0-10°C)以上加热。冷冻瓶从浴液中取出时,摸起来应该是凉的。不建议被动解冻。9.立即用培养基或等效等渗介质稀释细胞/冷冻液混合物。稀释程序可以在一个步骤中完成。稀释介质应在20°C至37°C之间。建议稀释比为1:10(样品与介质)或更大。10. 应用合适的配置下种细胞。11.将细胞放入培养条件或立即使用。12.解冻后进行24小时生存能力评估。注:为了获得低温保存后细胞活力的准确测量,应在解冻后24小时进行评估,并与非冷冻对照样本进行比较。*样品解冻后立即使用膜完整性指标(如台盼蓝)进行评估,以比较分析样品细胞产量和存活率,这往往导致对细胞存活率的测量不准确。建议采用活/死荧光分析或代谢分析(MTT或alamarBlue*)更准确地评估可行回收率。CryoStor产品在环境温度下运输。收到后,保存在2°-8°C,避光,直到准备使用
  • BloodStor&bull 55-5 (55% DMSO + 5% Dextran)细胞冻存液
    BloodStor&bull 55-5 (55% DMSO + 5% Dextran)细胞冻存液BloodStor55-5使用USP级成分配制,特点如下:&bull 55% (w/v) DMSO&bull 5% (w/v) Dextran 40&bull 规格为5.6ml或者7.2ml可选&bull 标准和定制填充量&bull USP/高质量成分&bull cGMP制造&bull 无菌,内毒素和细胞放行测试使用方法:BloodStor55-5 (55% DMSO + 5% Dextran)室温运输,收到后保存在2°C至25°C,避光,直到准备使用。BloodStor&bull 100 (100% DMSO)细胞冻存液BloodStor 100使用USP级DMSO配方,主要特点如下:&bull 100% DMSO&bull 无菌瓶&bull 标准(50ml或者100ml瓶装可选)和定制灌装规格&bull USP/高质量成分&bull cGMP灌装&bull 无菌和内毒素检测下使用方法:BloodStor100室温运输,收到后保存在20°C至30°C,避光,直到准备使用。HypoThermosol FRS (HTS-FRS)细胞冻存液HypoThermosol FRS (HTS-FRS)生物保存培养基是一种新型的,工程的,优化的低温存储和运输介质。无血清、无蛋白质的低温溶液旨在在2-8°C下为细胞和组织提供最大的存储和运输稳定性。这种专有的、优化的配方缓解了细胞和组织在冷却和再加热期间发生的温度诱导的分子细胞应激反应,以供客户研究和临床应用。与biolife冷冻培养基CryoStor类似,HypoThermosol FRS包括清除自由基的组件,提供pH缓冲、致癌/渗透支持、能量基质和离子浓度,在低温下平衡细胞内状态。在广泛的细胞和组织类型中,低温FRS已被证明在减少保存后坏死和凋亡方面有效。HypoThermosol FRS符合 USP 无菌和 USP 内毒素检测标准,并按cGMP生产。产品特点:&bull 预先配制&bull 规格多样化选择:500ml瓶装/500ml袋装/100ml瓶装/10ml瓶装&bull 无血清&bull 无蛋白&bull USP/高质量组分&bull cGMP生产&bull FDA药物主文件&bull 无菌,内毒素和细胞放行测试使用Protocol:&bull HypoThermosol FRS室温运输&bull 收到后,应将HypoThermosol FRS存放在2°-8°C环境,避免光照,直到准备使用。&bull 打开容器前,用70%的乙醇擦拭容器外部&bull 内容物无菌。如果密封已经被打破,不要使用。&bull HypoThermosol FRS已准备好使用。&bull 简单地用冷却(&bull 在样品冷藏期结束时,简单地从冷库中取出样品,倒入冷的hypothersol FRS,然后所选的温(20°-37°C)培养基替换。CryoStor CSB 即用型细胞冻存液产品特点:&bull 单独的Biolife品牌标签&bull 无DMSO&bull 无血清&bull 无蛋白&bull USP级别/高质量组分&bull cGMP 制造&bull FDA 药物主文件备案&bull 无菌、内毒素,以及细胞放行测试
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