无机焦磷酸酶(酵母)纯化自重组 E. coli 菌株,携带有从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 内含肽的融合基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐:P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸扩增实验中,其可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。
应用
反转录反应中提高 RNA 产量
增强 DNA 复制
活性定义
1 单位指标准反应条件下(20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM MgCl2,2mM PPi,25℃ 反应 10 分钟)每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
(1) 该酶在多种反应Buffer中均具有活性,通常该酶在HDA扩增、LAMP扩增等实验中,可直接接入即可。
(2) 该酶的用量在不同的实验中需要优化,通常在0.05~1U/ml浓度调整。
(3) 该酶的最佳反应温度为25℃,其在16~37℃均有活性,65℃ 10min可使该酶失活。
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