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硅胶填料的孔径和粒径大小对一种小分子蛋白质——胰岛素分离的影响 (PDF)

2022/12/21 13:47

阅读：65

应用领域：

制药/生物制药

发布时间：

2022/12/21

检测样品：

治疗类生物药品

检测项目：

含量测定

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参考标准：

方案摘要：

本文采用不同孔径和粒径的硅胶填料色谱柱对胰岛素这种小分子蛋白质进行分离。对不同孔径（包括 80 Å、95 Å、120 Å、170 Å、300 Å）和粒径（包括 1.8 µm、2.7 µm、 3.5 µm、5 µm）填料色谱柱的柱效和分辨率进行了对比。对比结果显示，胰岛素分析采用较大孔径填料的色谱柱可获得更高的柱效。填料孔径大于 100 Å 的色谱柱即可以使胰岛素达到高效分离，而采用 300 Å 的大孔径色谱柱对于该中等分子量分子的分析就没有必要。采用小粒径填料色谱柱分析胰岛素也可获得较高柱效。这一点通过改变粒径大小（5 µm&3.5 µm&1.8 µm）进行分析得到证实。 Agilent Poroshell 120 色谱柱使用了 120 Å 孔径，2.7 µm 粒径的表面多孔颗粒填料，使它成为胰岛素分析的最佳选择。

产品配置单：

分析仪器

二手翻新agilent安捷伦1200液相色谱仪

型号： 1200

产地：美国

品牌：安捷伦

¥12万

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方案详情：

硅胶填料的粒径和孔径是反相 HPLC 分析中色谱柱选择的重要参数。3 µm 以下（包括亚 2 µm）的小粒径填料色谱柱因其可实现高柱效和快速分离而得到广泛应用。另外，硅胶颗粒的孔径在选择色谱柱时也应充分考虑。对于分子量小于 5000 Da 的分子通常选择小孔径（60-120 &angst;）填料的色谱柱，分析低分子量蛋白质（5-50 KDa）时通常选择 200-300 &angst; 孔径填料的色谱柱，而高分子量蛋白质和疫苗则需要采用更大孔径（1000-4000 &angst;）填料的色谱柱。虽然分析小分子蛋白质，如分子量约为 5800 Da 的胰岛素，可采用小孔径填料的色谱柱，但也需要对较大孔径填料色谱柱的分析效果进行评价，选择合适填料孔径的色谱柱可获得最高的柱效。过小的孔径会限制分子在孔内外的扩散，采用适当填料孔径的色谱柱可获得较高的柱效。为了得到最高的柱效，应选用较小粒径和最佳孔径的填料。最佳孔径和粒径的研究采用 USP 规定的以等度流动相洗脱测定胰岛素的方法进行。通过考察不同孔径（包括 80 &angst;、95 &angst;、 120 &angst;、170 &angst;、300 &angst;）和不同粒径（包括 1.8 µm、2.7 µm、 3.5 µm、5 µm）填料色谱柱的柱效和分辨率，对比其色谱性能。同时考察了不同的颗粒类型，包括表面多孔颗粒和全多孔颗粒。本应用报告的最终结果得到了实现最高的柱效和分辨率，同时满足中国药典 [1] 和美国药典 [2] 规定方法要求的推荐色谱柱。

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