α-淀粉酶活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)可见分光光度法

α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 12.5mL 试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂 2-8℃保存 8 周；

2、 标准品：10 mg 淀粉标准品。临用前加 10 mL 试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成 1 mg/mL 淀粉标准液，2-8℃保存四周。

产品说明：

  淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

  α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：称取约 0.1g 样本，加 1mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，室温离心 10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。（若有浑浊则离心后进行测定）

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准溶液。

3、 按操作表依次加入各试剂：

  混匀后于 570nm 处读取测定管、对照管、空白管、标准管、标准空白管吸光度，分别记为 A 测定、A 对照、 A 空白、A 标准和 A 标准空白，计算 ΔA 测定=A 空白-（A 测定-A 对照），ΔA 标准=A 标准-A 标准空白。空白 管和标准曲线只需做 1-2 次。

三、α-淀粉酶活性计算

注意事项：

吸光值大于1.2或者ΔA大于0.8 时，可以对样本进行适当稀释后测定。

实验实例：

1. 取约 0.1g 藜叶片，加 1mL 蒸馏水匀浆，匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，室温离心 10min，吸取上清液，之后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=A 空白-（A 测定-A对照）=0.915-（0.703-0.176）=0.388，带入标准曲线 y=2.1736x+0.0057，计算 x=0.176，按样本质量计算酶活得：

α-淀粉酶活性 (U/g 质量)=0.1×x÷W=0.176 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！