水土中总磷酸盐含量检测试剂盒 微量法

水土中总磷酸盐含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：浓硫酸 10 mL 自备。

2、 试剂二：每瓶临用前加入 15 mL 蒸馏水溶解备用，溶解后 2-8℃保存一周。

3、 试剂四：临用前加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。

4、 试剂五：临用前加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。

5、 标准品：临用前加入 1.4 mL 下述稀释液溶解粉剂，配成 20μmol/mL 的磷标准液，2-8℃保存两周。

6、 稀释液的配制：按蒸馏水体积（mL）：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）=10:1:2 的比例混合即可，现用现配。

7、 定磷试剂的配制：按 H₂O：试剂四：试剂五：试剂六（V:V:V:V）=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最 好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：

总磷酸盐包含正磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚磷酸盐等各种磷酸盐的形式，反应了水土中的磷酸盐水平，是一个水质和土壤质量评价的重要指标。

在酸性溶液中，在分解剂和高温条件下，将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正磷酸盐，正磷酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸，在还原剂存在时被还原为磷钼蓝，在660nm处有特征吸收峰。

技术指标：

最 低检出限：0.0075 μmol/mL

线性范围：0.0098-5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震荡仪、研钵、EP管、蒸馏水、浓硫酸。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 水样：按照水样体积（mL）：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）为 10:1:2 的比例（建议取 1mL 水样，加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二），用封口膜封口，95℃水浴 30min，冷却后待测。

2. 土样：（1）新鲜土样风干，过 30-50 目筛；（2）按照风干土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）=1:10:1:2（建议称取约 0.1g 土样，加入 1mL 蒸馏水，再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二），用封口膜封口，95℃水浴振荡 30min，10000g，25℃离心 10min，取上清液待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、 将20μmol/mL标准液用稀释液稀释为2、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125、0.039μmol/mL的标准溶液备用。

3、 标准溶液稀释表：

4、 操作表 (在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) ：

三、总磷酸盐含量计算

1、标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程得到x（μmol/mL）。

2、总磷酸盐含量的计算：

土样总磷酸盐含量（μmol/g 土样）=x×V样÷（V样×W÷V样总）=1.3x÷W

水样总磷酸盐含量（μmol/mL 水样）=x×V样总÷V水样=1.3x

V样：加入样本体积，0.03mL；V样总：样本处理加到土样中的液体总体积，1.3mL；W：样本质量，g；V水样：水样体积，1mL。

注意事项：

1、定磷试剂应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。

2、加入试剂三后可能会产生絮状沉淀，其对后续实验无影响，加入定磷试剂后即自行消除。

3、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

实验实例：

1、 取 0.1g 三叶草土，加入 1mL 蒸馏水，再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二，离心取上清稀释 2 倍，之后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.692-0.045=0.647，带入标准曲线y=0.7001x+0.0078，得 x=0.913，计算含量得：

土样总磷酸盐含量（μmol/g 土样）=1.3x÷W×2（稀释倍数）=1.3×0.913÷0.1×2=23.74 μmol/g 土样。

2、 取 0.1g 林土，加入 1mL 蒸馏水，再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二，离心取上清稀释 2 倍，之后按照测定 步 骤 操 作， 用 96 孔 板 测 得计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 空 白 管 =0.685-0.045=0.640， 带 入 标 准 曲 线y=0.7001x+0.0078，得 x=0.903，计算含量得：

土样总磷酸盐含量（μmol/g 土样）=1.3x÷W×2（稀释倍数）=1.3×0.903÷0.1×2=23.49 μmol/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！