葡萄糖脱氢酶（GCDH)检测试剂盒微量法 微量法

葡萄糖脱氢酶（GCDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 7.5 mL 试剂一溶解，用不完的试剂 4℃保存；

2、 试剂三：临用前每瓶加入 5 mL 试剂一溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃避光保存，避免反复冻融；

3、 工作液的配制：按照试剂一：试剂二：试剂三为 4：3：2 的体积比例充分混匀，现用现配，用前 37℃预热 10 min。

产品说明：

GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶，同时也是临床血糖测定的诊断用酶，可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（10⁴个）︰提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中分别加入下列试剂：

三、GCDH酶活计算

注意事项：

1、 样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、 当 A1 或 A2 大于 1.7 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

3、 当 ΔA 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定

实验实例：

1. 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算 ΔA测定管=A2 测定-A1 测定=0.5806-0.5291=0.0515，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0294-0.0294=0，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.0515-0=0.0515，按样本质量计算酶活得：

GCDH 酶活（U/g 质量）=1607.7×ΔA÷W =1607.7×0.0515÷0.1=827.966U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！