多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒微量法 微量法

多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格:100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；

2、 试剂二：临用前加入 10 mL 蒸馏水，60℃水浴助溶；

3、 标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 蒸馏水，配成 50 μmol/mL 的标准液；

产品说明：

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540 nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1 : 5~10的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000 g，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细菌加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，总时间5 min）；然后4℃，16000 g，离心10 min取上清置于冰上待测。

液体：直接检测或用提取液稀释后检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至540 nm，蒸馏水调零。

2. 将50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为6、5、4、3、2、1.5 μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：（在1.5mL离心管中）

三、PG酶活计算

注意事项：

1、 样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、 当 A 大于 2 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数。

3、 植物果实组织建议将样本稀释 10 倍或 20 倍后再测定。

4、 若样本 ΔA 值偏小，建议延长酶促反应时间，并在计算公式中除以相应时间。

实验实例：

1、 取 0.1g 木槿花加入 1mL 提取液冰浴匀浆后于 4℃，16000 g，离心 10 min，取上清稀释 2 倍后按照测定步骤操作，用微量石英玻璃比色皿测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=1.6843-1.4916=0.1927，带入标准曲线 y=0.2426x0.2979，计算得 x=2.022μmol/mL，按样本质量算：

PG 酶活（U/g 质量）= 0.5x÷W×2（稀释倍数）=20.22 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！