6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测试剂盒 微量法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前配制，加入 2.2 mL 试剂一，混匀；

2、 试剂三：临用前配制，加入 2 mL 试剂一，混匀。

产品说明：

磷酸戊糖途径途径中 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化 NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP⁺生成 NADPH，NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，而 NADP⁺没有；通过测定 340nm 吸光度增加速率，计算 6PGDH 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心 10min，取上清粗酶液，待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 37℃水浴预热 30min 以上。

3. 加样表（在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入）

于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 0s 吸光值记为 A1，第 180s 吸光值记为 A2。记 ΔA 测定=A2 测定-A1测定，ΔA 空白=A2 空白-A1 空白。

三、6PGDH 活性计算

注意事项：

1. 试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在 4℃，可保存 1 周。

2. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融；

3. 若样本初始（0s）读值大于 0.5 且 ΔA 测定小于 0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。

4. 使用96孔板测定时，可根据样本数量将试剂一（预热后）、二、三预混为工作液，因是根据反应速率计算酶活，为保证每个样本的反应时间尽量一致不推荐同时测过多样本。

实验实例：

1. 称约 0.1g 肾脏组织，加入 1mL 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心 10min，取上清稀释 5 倍，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定=A2 测定-A1 测定=0.4866-0.3035=0.1831，ΔA 空白=A2 空白-A1 空白=0.0325-0.0269=0.0056，按样本质量计算酶活得：

6PGDH 酶活性(U/g 质量) =536×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷W×5（稀释倍数）=4757 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！