漆酶活性检测试剂盒 微量法

漆酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 工作液的配制：一瓶试剂二用 10 mL 试剂一溶解。现用现配。

产品说明：

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水，水浴锅

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液：直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 水浴锅温度调至 45℃。

3. 操作表：在微量玻璃比色皿/96 孔板中分别加入下列试剂：

三、漆酶活性计算

注意事项：

1、工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。

2、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样本用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，OD 值变化不超过 0.05。

实验实例：

1. 取 0.1g 香菇加 1mL 提取液进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算 ΔA 测定管=A2 测定-A1 测定=0.8963-0.1004=0.7959，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0729-0.0542=0.0187，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.7959-0.0187=0.7772，按样本质量计算酶活得：

漆酶酶活（U/g 质量）=61.7×ΔA÷W=61.7×0.7772÷0.1=479.53 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！