单宁含量检测试剂盒 微量法

单宁含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、标准品：10 mg 单宁酸。临用前加入 1.175 mL 提取液溶解为 5000 nmol/mL 的标准液。

产品说明：

单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

将样本烘干至恒重，粉碎，过 30-50 目筛之后，称取约 0.05g，加入 1mL 提取液，封口膜封口防止液体溅出，于 70℃水浴提取 30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心 10min，取上清，用提取液定容至 1mL，待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm。提取液调零。

2. 标准溶液的制备：将5000nmol/mL标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。

3. 加样表：

充分混匀震荡 5min，13000g 离心 20min（若上清中仍有颗粒或浑浊，请多次离心至完全清澈）。取 200μL上清液测定 275nm 下的吸光度，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算 ΔA 测定=A 对照管-A测定管，A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、单宁含量计算

1．标准曲线的绘制：

以标准溶液的浓度为x轴，以A标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程中得到x（nmol/mL）。

2．单宁含量计算：

（1）按蛋白浓度计算

单宁含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr

（2）按样本质量计算

单宁含量（nmol/g 质量）=x×V提取÷W =x÷W

Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需重新用PBS提取测定）；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL。

注意事项：

如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！