植物花色苷含量检测试剂盒 微量法

植物花色苷含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。

根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最 大吸收峰,而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照样本质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液），充分匀浆后转移到 EP 管中，提取液定容至 1mL，盖紧后 60℃浸提 30min，期间可震荡数次。12000rpm，常温离心 10min，取上清液待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，可见分光光度计蒸馏水调零。

2. 加样表：在96孔板中分别加入

充分混匀后测定测定管 1 和测定管 2 分别在 530nm 和 700nm 处的吸光度，测定管 1 在 530nm 和 700nm 处的吸光值记为 A1、A1’，测定管 2 在 530nm 和 700nm 处的吸光值记为 A2、A2’，计算 ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。

三、花色苷含量计算

A、以微量玻璃比色皿计算：

1．按样本质量计算：

花色苷含量（μmol/g 质量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F]×V提取÷W=0.037×ΔA× F÷W

2．按样本蛋白浓度计算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F]×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr

F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1mL；10³：单位换算系数，1mmol=10³μmol；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。

B、以96孔板计算：

1. 按样本质量计算

花色苷含量（μmol/g 质量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.062×ΔA× F÷W

2. 按样本蛋白浓度计算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr×V提取)=0.062×ΔA×F÷Cpr

F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：96孔板光径，0.6cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1mL；10³：单位换算系数，1mmol=10³μmol；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。

注意事项：

1. 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如10μL上清液和180μL试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100μL上清液和100μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入计算公式中。

2. 因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。

实验实例：

1、 取 0.1g 葡萄皮加入 1mL 提取液充分匀浆后转移到 EP 管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提 30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至 1mL，离心取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.573-0.060）-（0.120-0.060）=0.453，按样本质量计算含量得：

花色苷含量（μmol/g 质量）=0.062×ΔA×F÷W =0.062×0.453×10÷0.1=2.81μmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！